Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Окрашивание белковых гелей коллоидным Кумасси G250. -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: Окрашивание коллоидным Кумасси G250
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Forum robot
Постоянный участник
на сервере в Москве



 прочитанное сообщение 13.06.2005 12:38     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Достоинства метода: высокая чувствительность (обычно заявляется 5-10ng на пятно, то есть на порядок меньше, чем у окраски серебром, но раз в 5 выше, чем у стандартного окрашивания Coomassie R250.);
Участник оффлайн! yaden
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.06.2005 12:38     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Здесь лежит статья с усовершенствованием этого метода http://newjournal.kcsnet.or.kr/main/j_sear...tm?code=B021105

Всего благодарностей: 4Поблагодарили (4): Fritz, AnKri, distemper, Masha1
Участник оффлайн! Mac-1
Постоянный участник
оттуда



 прочитанное сообщение 17.06.2005 22:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Описаный в статье реагент продает Pierce как "Gel code Blue".

Коллоидная окраска хорошо работает только на тонких и сверхтонких гелях (0.5 mm и тоньше, типа PhastGel), для 0.75-1 мм лучше применять краску такого состава:

5 мг Кумасси R-250
10 мг Кумасси G-250
10 мг Amido black
------------------
100 ml 10% Уксусной кислоты

Гель разбухает при окраске, что обеспечивает лучшую диффузию краски внутрь, при отмывке в 5% уксусной/20% метанол он возвращается к обычному размеру.
гость: г
IP-штамп: fra6xdMWXgbHc
гость



 прочитанное сообщение 19.06.2005 15:30     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Стандартный способ с 10-20% сульфатом аммония у меня работал нестабильно. Я титровал разок БСА, было видно 5 нг, как, примерно, видно 50нг при обычном R-250.
Обычно использовал коллоидное Кум.после окрашивания стандартным способом с R-250 для усиления окраски слабых полос, но красить надо сутки, помогало.
Участник оффлайн! yaden
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 01.11.2005 15:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Самая свежая статья по этому методу:
G.Candiano et al. Blue silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis. Electrophoresis 2004, 25, 1327–1333.
http://www3.interscience.wiley.com/cgi-bin...565269/ABSTRACT

Делаю как в статье, только метанол заменяю на этанол - работает хорошо. Но полгода не хранится... проверено.
Гость
IP-штамп: frftLGqhpFF.A
гость



 прочитанное сообщение 11.01.2006 01:58     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Это - калька SympleBlue Microwave Protocol from Invotrogen (1,0 и 1,5мм минигели) ©

Пологаю, для него подойдет раствор любого коллоидного кумасси - я делал это с био-радовским 161-0786. Итак:

1. Поместить гель в 100мл ультра-чистой воды и греть в микроволновке при 950-1100Вт ----- 1 минута.
2. Покачать гель на орбитальном шейкере и
слить воду ----- 1 минута.
3. Дважды повторить этапы 1 и 2 ----- каждого по 1 минуте.
4. Добавить 20-30мл коллоидного кумасси и погреть в микроволновке при 950-1100Вт ----- 45-60 секунд.
5. Покачать на орбитальном шейкере.
Слить краску ----- 5-10 минут.
6. Мыть гель покачиванием в 100мл ультрачистой
воды ----- 10 минут.
7. Влить в воду 20мл 20%NaCl и качать ----- 5-10 минут.
(8. При желании повторить этап 6, чтобы убрать
фон ----- 1 час).

Еще отсебятина: жидкости буквально кипят, но 3%ПААГ или градиентный 3-8%ПААГ остаются целыми, чуствительность неплохая - я красил после трансфера/20 часов и, к своему удивлению, что не все перенеслось. Надеюсь, это те 5нг, про которые пасали на фирме. А фон белый-белый.
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 11.12.2008 19:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

У меня вопрос, а кто пробовал растворит обычный (не пудра-образный) сульфат аммония в фосфорной кислоте? Сколько это может времени занять? Я на шейкер поставил, уже час плюхается, но эффекта не заметно... Пробую наваять http://www3.interscience.wiley.com/cgi-bin...565269/ABSTRACT но 13гр соли не хочет растворяться в 13мл эсида.

Сообщение было отредактировано plotter - 11.12.2008 19:12
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 12.12.2008 12:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Народ, коллоидом никто не красит чтоли?
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 22.07.2010 16:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Написано, что после отмывки нельзя долго хранить. Некоторые гели месяцами валяются забытыми в холодильнике, под сантиметровым слоем обычного дистиллята. И все полосочки видно как на свежепрогнанном.
guest: ммм
IP-штамп: frzbfAE0vSQrM
гость



 прочитанное сообщение 22.07.2010 20:33     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

-Народ, коллоидом никто не красит чтоли?
Я другим протоколом красил там ТХУК и сульфата и фосфорки нет.

--под сантиметровым слоем обычного дистиллята.
Это зря лучше все же в уксусе низкомолекулярные белочки размываются в водице, а то и совсем из геля выходють.

-Написано, что после отмывки нельзя долго хранить.
Может коллоидный кумаси легко отваливается от геля, не знаю.
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 11.08.2010 18:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Это зря лучше все же в уксусе низкомолекулярные белочки размываются в водице, а то и совсем из геля выходють
~12.5kDa. Сидят как вкопанные.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 23.02.19 10:58
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft