 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила* Разделяй и властвуй: 5 мифов о сортировке клеток -- deleted by Дядя ФАКСер --
Тема связана с: 5 мифов о сортировке клеток
Кураторы темы:* Дядя ФАКСер
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
  |
 Дядя ФАКСерПостоянный участник Nothern Maccaronia, Ticinum  |
 19.09.2017 13:17
Миф №1: Сортировка клеток – лучший способ выделения целевых клеток из гетерогенных популяций. Сегодня есть три основные задачи, которые пользователи ставят перед клеточными сортерами: обогащение, выделение редких популяций и сортировка единичных клеток. И хотя сортер в этом отношении, действительно, и швец, и жнец, и на дуде игрец, далеко не всегда его использование является оптимальным решением. Вы же не будете покупать Порше, чтобы кататься на нем в соседний магазин? Например, обогащение клеточной популяции – задача несложная, и решается простыми клеточными сепараторами и специальными реагентными наборами. А если говорить о таком тонком и деликатном деле, как работа с единичными клетками, то существует целый , заточенный на эффективное решение именно таких задач. Если вы не уверены в том, какой метод лучше всего подойдет для вашей работы, всегда можно . Вам подберут решение, которое действительно необходимо: не больше и не меньше. Миф №2: Чем больше лазеров, тем больше флуоресцентных каналов. Классическое заблуждение, культивируемое производителями в самых разных областях: от мобильных телефонов до научных приборов (пример: о том, как на самом деле связано количество пикселей с качеством изображения в гель-документирующих системах). Интерес производителя здесь очевиден: чем больше, тем дороже. На самом деле, зачастую у сортеров с одними и теми же лазерами количество флуоресцентных каналов драматически различается. Все потому, что число каналов напрямую зависит от того, как физически расположены лазеры в приборе. В сортерах с коллинеарными лазерами количество флуоресцентных каналов гораздо меньше, чем в сортерах с лазерами, разделенными в пространстве, т.к. во втором случае сигнал от каждого лазера детектируется отдельно. Рис.1 Оптическая схема с коллинеарными лазерами – 4 флуоресцентных канала.  Рис.2 Оптическая схема с пространственно разделенными лазерами – 7 флуоресцентных каналов.  Миф №3: Максимальная скорость сортировки – это та скорость, с которой вы будете сортировать. Реальность куда прозаичнее: максимальная скорость сортировки клеток – это та скорость, на которой можно сортировать калибровочные частицы при настройке сортера. Сортировка реальных клеток на таких скоростях приведет к значительному росту коэффициента вариации (CV) и падению чистоты сорта. Такой расклад приемлем, когда стоит задача обогащения, но для обогащения есть более простые и гуманные способы (см. Миф №1). Во всех остальных случаях действительно важным является параметр чистоты сорта на заданной скорости. И вот здесь идет война за каждый лишний процент, особенно когда речь идет о редких популяциях – кто знает, не попадет ли ваша драгоценная клетка в тот самый 1%? Миф №4: Одноразовые элементы жидкостного тракта – перспектива для клинического использования сортера клеток. Один из самых активно распространяемых мифов, связанный с давней мечтой ученых и клиницистов использовать сортировку клеток для лечения пациентов, которую подогрел недавно вышедший . К сожалению, этой мечте пока не суждено стать реальностью. Подавляющее большинство клеточных сортеров мирового рынка работают на технологиях, основанных на фокусировании клеток в потоке жидкости через систему капилляров. Это значит, что для гарантии стерильности и отсутствия кросс-контаминации весь жидкостной тракт сортера, от пробозаборника до системы сбора образца, должен быть сменным и одноразовым. Некоторыми производителями оборудования, действительно, предпринимались попытки внедрения отдельных одноразовых элементов (например, использование сменного чипа вместо сопла), но в большинстве своем жидкостной тракт сортера до сих пор остается стационарными и требует стандартных процедур очистки. Это исключает возможность получения такими сортерами IVD сертификата за рубежом и регистрации в Минздраве РФ. Продолжаем ждать и надеяться! Миф №5: Чем выше чувствительность в эквивалентах (MESF), тем лучше качество сигнала. Чувствительность в эквивалентах – это важно и хорошо. Но нужно иметь в виду, что не только MESF влияет на качество сигнала. Откровенно говоря, реальная разница между 115 и 125 MESF не так уж велика, так как большинство эпитопов содержатся в клетке в достаточном количестве, чтобы не замечать этой разницы. Кроме того, на одном антителе, как правило, связано больше одной молекулы флуорохрома, что позволяет успешно детектировать эпитопы в низких концентрациях. Не менее важным параметром является разрешение сигнала. А разрешение зависит не только от чувствительности детекторов, но и от самой метки, от уровня автофлуоресценции объекта, от мощности лазера (чем мощнее лазер, тем больше сигнал с флуорохрома) и т.д. Как правило, в технических описаниях сортеров разрешение никак не цифруется, и единственный способ оценить этот параметр – по графикам сортировки флуоресцентных калибровочных частиц, которые часто приводят в рекламных материалах к приборам. Рис.3 Пример детектирования флуоресцентных микросфер на сортере клеток. CV <2.5. Восемь пиков видны во всех 4-х флуоресцентных каналах.  Ссылка на статью на сайте - Файл/ы:
Тема ассоциирована со страницей: Разделяй и властвуй: 5 мифов о сортировке клеток |
Cell_sorting_myths.pdf
|
Annabel Участник Бостон, США |
20.09.2017 04:09
Тема ассоциирована со страницей: Разделяй и властвуй: 5 мифов о сортировке клеток |
|
Guest IP-штамп: frBp13I6uCA8o гость |
22.09.2017 00:25
(Annabel @ 20.09.2017 04:09)  Слушайте, только мне кажется, что с каждым пунктом этой статьи что-то не так (иногда многократно)? Общее впечатление - как от сортинга на Калибуре просто, когда “Вдумчиво и серьезно заниматься сортерами клеток «Компания Хеликон» начала в 2014 году.“ Поэтому стиль изложения сыроват, а примеры несколько абстрактны, но в целом — нормально, с учетом того, что не совсем понятно на кого рассчитан документ (за сортировкой везде в міре приглядывает ответственный за платформу (core facility), это анализ может вырваться из-под ока смотрящего). А ответственный за сервис должен, по идее, не быть в плену подобных мифов. Тема ассоциирована со страницей: Разделяй и властвуй: 5 мифов о сортировке клеток |
|
Annabel Участник Бостон, США |
22.09.2017 07:22
Тема ассоциирована со страницей: Разделяй и властвуй: 5 мифов о сортировке клеток |
|
tus |
23.09.2017 10:55
(Annabel @ 22.09.2017 08:22) да там вообще вдумчивые волшебники работают. Судя по каталогу, они собираются "тонко и деликатно" выделять единичные клетки масс-цитометрией... Так в каталоге же про изучение единичных клеток, а не про выделение  Сообщение было отредактировано tus - 23.09.2017 11:08 Тема ассоциирована со страницей: Разделяй и властвуй: 5 мифов о сортировке клеток |
|
Annabel Участник Бостон, США |
23.09.2017 18:19
Тема ассоциирована со страницей: Разделяй и властвуй: 5 мифов о сортировке клеток |
|
Дядя ФАКСер Постоянный участник Nothern Maccaronia, Ticinum |
30.09.2017 19:41
Тема ассоциирована со страницей: Разделяй и властвуй: 5 мифов о сортировке клеток |
|
dgustica Серпухов |
02.10.2017 15:09
) Волшебники правят) А Феи отдыхают) Если что то нужное и важное есть, то оно в каталог явно не попадет, потому что кто то вдруг станет умнее и мудрее
Тема ассоциирована со страницей: Разделяй и властвуй: 5 мифов о сортировке клеток |
| « Предыдущая тема · Мусорница · Следующая тема » |
|
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2023 IPS, Inc.