molbiol.ru -> Определение концентрации белка на 3ММ

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Определение концентрации белка на 3ММ -- comments to a permanent page of the site --

Тема связана с: Окрашивание белка на 3MM
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Forum robot
Постоянный участник
на сервере в Москве

20.12.2005 00:30

URL #1

Комментарии к постоянной странице сайта: Определение концентрации белка на 3ММ

Наиболее удобный метод, когда речь идет об оценке концентрации белка в большом количестве образцов (например, фракции с колонки). Окраска 2 микролитровых пятнышек детектируется и заметно изменяется в диапазоне 10ng - 10 микрограмм (для BSA).

Гость
IP-штамп: frUc3IzHqMYlk
гость

29.03.2006 11:23

URL #2

Здравствуйте. Можно узнать поподробнее, что-такое ЗММ бумага? Заинтересовался методом потому, что до этого определял белок по Брэдфорду - попотеть пришлось. Образцов обычно много, вот и думаю, что может на этот метод перейти. Тем более что слишком точная концентрация мне не нужна.

Павел
Постоянный участник
Новосибирск

29.03.2006 11:37

URL #3

ватман такой.

Гость
IP-штамп: frUc3IzHqMYlk
гость

29.03.2006 11:52

URL #4

Просто ватман, или какой-то специальный, который предназначен именно для этих целей? И если не трудно, можно ли узнать поподробнее про способ нанесения образцов на этот самый ватман.

Re
Участник

29.03.2006 14:11

URL #5

Плотная фильтровальная бумага. Наносить каплей из носика автоматической пипетки.
Удобнее - держать на столе на белом фоне иммунологическую плашку с раскапанным раствором по Брэдфорду и капать с колонки аликвот в ячейку. Чем больше белка, тем синее. Соотношение объемов краска/белок подбирается эмпирически.

ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость

29.03.2006 15:55

URL #6

На самом деле любая фильтровашка, промокашка, салфетка и даже подтирка. Лишь бы воду впытывала номально.

---Удобнее - держать на столе на белом фоне иммунологическую плашку с раскапанным раствором по Брэдфорду и капать с колонки аликвот в ячейку

Удобнее, но промокашка незаменима, если в растворе с белком содержатся вещества мешающие определению по Брэдфород, например меркаптоэтанол.

Гость
IP-штамп: frUc3IzHqMYlk
гость

10.04.2006 08:07

URL #7

Скажите, а не кто не пробовал определить концентрацию белка в спектрофотометре прогнав там эту самую иммунологическую плашку? Ведь, в принципе, можно же установив длину волны 595, раскапать белковый преперат, покрасить Кумасси и прогнать? Просто, как вспомню как я этот белок определял (20-25 образцов, да несколько повторов).

Гость
IP-штамп: frUc3IzHqMYlk
гость

10.04.2006 08:12

URL #8

Кстати, а ведь, наверное, можно подобным образом и концентрацию хлорофилла определять? Но это при условии, что в лаборатории есть АИФ. Кто что по этому поводу думает?

Гость
IP-штамп: frUc3IzHqMYlk
гость

10.04.2006 10:26

URL #9

Пардон, народ, за наивные предположения. Во всем разобрался. К сожалению, на нашем АИФе невозможно промерить белок и хлорофилл потому, что измерения при длинах волн 595, 665 и 649 не предусмотрены. Жаль.

ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость

10.04.2006 12:12

URL #10

Ну вы блин даете все так делают. В плашках. Ну и что.

Arc
Постоянный участник
Москва

12.04.2006 12:29

URL #11

а еще проще- накапать белок на нитроцеллюлозу и покразить Amido Black, естественно, с калиброванным контролем типа BSA. +/- 1,5 раза концентрацию даст точно- с той же погрешностью, что и Кумасси по Брэдфоорд, ибо принцип окрашивания тот же

Гость
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость

30.11.2006 15:54

URL #12

Метода Брэдфорд - ацтой! BCA rulez!

ASolov

01.12.2006 11:37

URL #13

(Гость @ 30.11.2006 12:54)

Метода Брэдфорд - ацтой! BCA rulez!

LOL

Guest
IP-штамп: frKOT2RiPkW0g
гость

24.11.2009 13:03

URL #14

здравствуйте! подскажите, пожалуйста хочу покрасить мембрану после переноса, проверить как перенеслись белки с геля(12,5% PAAG). есть кумасси раствор,которым крашу гель, технология такая же? отмывать потом мембрану также 10% уксусной?

Andrew
Постоянный участник
Москва

24.11.2009 13:31

URL #15

Окрашивать нужно пунцовым С, как описано здесь: http://molbiol.ru/protocol/17_08.html

Вера
Постоянный участник

24.11.2009 13:54

URL #16

(Гость @ 29.03.2006 09:52)

Бумага любая, лишь бы впитывала и не расползалась при отмывке (фильтровалка не очень годится).
Носиком в предварительно обозначенные карандашом точки- 2-3 мкл из соответствующей пробирки. Хорошо высушить (обязательно!)

Окунуть на несколько секунд в стардартный раствор Кумасси R250 для окрашивания белковых ПААГ.
Промывать под сильной струей ХОЛОДНОЙ воды до исчезновения синего фона. Остаются синие пятна соответствующей интенсивности на голубоватом фоне.

(После просущивания становится видно хуже, лучше смотреть мокрую после отмывки).

Сообщение было отредактировано Вера - 24.11.2009 13:55

watchesbiz
Постоянный участник

25.12.2021 19:15

URL #17

http://www.authorstream.com/Replicawatches24/
https://about.me/Replicawatches24
https://moz.com/community/users/17050093
https://trello.com/rolexrelicawatches/activity
https://replicarolexwatches.dreamwidth.org/365.html
https://visual.ly/users/watcheshutuk/portfolio
https://www.viki.com/users/watcheshutuk_549/about
https://www.academia.edu/s/14bdb7d4fe?source=link
https://www.slideshare.net/Nowseore/guide-o...ex-watch-online
https://audiomack.com/rolexrelicawatches
https://soundcloud.com/replicarolexwatches
https://www.bagtheweb.com/u/fakerolexwatches/profile
https://www.flipsnack.com/ReplicawatchesUK/...ca-watches.html
https://www.4shared.com/office/zA4L7Rmzea/G...hase_a_Fak.html?
https://codepen.io/Rolexrelicawatches/full/abBEzaQ

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.