Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Окрашивание белковых гелей Coomassie brilliant blue R250 -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: Окрашивание гелей Кумасси R250
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Forum robot
Постоянный участник
на сервере в Москве



 прочитанное сообщение 11.01.2006 02:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Комментарии к постоянной странице сайта: Окрашивание белковых гелей Coomassie brilliant blue R250

Метод наименее чувствительный (по сравнению с серебряным окрашиванием или окрашиванием Zn/имидазолом). Его делают популярным два сравнительных преимущества: (i) он проще и несравненно дешевле, чем серебряное окрашивание; (ii) в отличие от окрашивания Zn/имидазолом, гель можно высушить и сохранить. Чувствительность: 0.1-1.0 микрограмм белка на бэнд.
_Павел Егоров_
IP-штамп: frftLGqhpFF.A
гость



 прочитанное сообщение 11.01.2006 02:06     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Перед окрашиванием гель прокипятить 3 мин. в дистиллированной воде, в микроволновке. Так можно быстро удалить значительное количество SDS из геля, что позволит уменьшить фон и сократить время окрашиывния.
_arwerha_
IP-штамп: frftLGqhpFF.A
гость



 прочитанное сообщение 11.01.2006 03:39     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

БЫСТРЫЙ СПОСОБ ОКРАСКИ!

Главное его преимущество - то, что через час Вы уже сможете узнать о том, что Ваш белок опять не там (или там, если повезло)
Ну, и реактивы без всякого особо ядовитого метанола. Спирт, уксус...

Краситель: 0,22% (масс/об) Кумасси G-250, 40% (об/об) этанол, 8% (об/об) уксусная кислота.

Гель залить красителем, нагреть до появления пара (на горелке или в микроволновке - у кого что есть) , под крышкой оставить минут на 15, после чего краситель слить обратно в колбу (он работает долго без замены). Гель отмывать от фона кипячением в нескольких сменах воды (из-под крана или дистиллята, это не очень принципиально) до исчезновения окраски фона и проявления полос белка.
Участник оффлайн! Alder
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.01.2006 20:25     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

спасибо!
только это к другой страничке, где окраска с использованием G-250
_Valery Tarasov_
IP-штамп: frftLGqhpFF.A
гость



 прочитанное сообщение 11.01.2006 22:37     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Можно все это проделать быстрее и безопаснее

1. 10-15 минут в 10% Укс.к., 40% этанол - фиксация
2. 20 мин. в 0.4% Coomassie Blue R250, 10% Укс.к., 40% этанол - окрашивание
3. 20 мин. в 10% Укс.к. - отмывка (если белка много то и после первых минут видны полосы)
Участник оффлайн! Olori




 прочитанное сообщение 07.09.2006 21:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Вот спасибо!
Участник оффлайн! bkrg




 прочитанное сообщение 26.10.2006 15:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

С Кумасси R-250 мы красим так.
За 10 мин. до окончания фореза ставится кастрюлька с водой на плитку. К моменту окончания фореза она закипает. Гель кидается в стакан, заливается раствором следующего состава: этанол - 300мл, вода - 300мл, ледяная уксусная к-та - 60мл, кумасси R250 - 0,7г. Наливать не очень много, но так, чтобы гель свободно болтался в жидкости. Кипятим стакан на водяной бане - 10мин. Краску сливаем (ее можно использовать многократно), ополаскиваем гель в стакане водой, заливаем 7%уксусом (столько же, сколько и краски) и кипятим 3-5 мин. Меняем уксус, снова кипятим. После 3й смены гель гарантированно отмывается. Все делать под тягой. Кипятить с краской обязательно на водяной бане, иначе она будет плеваться во все стороны
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.10.2006 15:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

микроволновка, безусловно, много лучше, если налит немного, то пару минут- и уже все почти кипит, только следить, чтоб гель не скукожился, и будет хорошо

А что, помыть в горячей воде (те использую слово кипяток, ибо риск) перед окрашиванием снижает фон?
Гость
IP-штамп: frsCQkPH3djzA
гость



 прочитанное сообщение 07.11.2007 01:11     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Кто нибудь знает как сделать коричневый раствор кумаси (как в "Bio-Rad Bio Safe Commassie")?

Красится и отмывается без кипячения за 20 мин.

у меня была ссылка на протокал в статье 70х или 80х годов.
Guest
IP-штамп: frNFBHcL2JSwo
гость



 прочитанное сообщение 07.11.2007 01:17     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

colloidal coomassie - в гугле
Guest
IP-штамп: frPanb9Lvzu1g
гость



 прочитанное сообщение 07.11.2007 22:25     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Несколько "заметок на полях" smile.gif
С G-250 - коллоидный раство получают, постепенно примешивая раствор красителя к 10% ТХУ, получается эдакая смесь цвета хаки. Фон, действительно, слабее, но и чувствительность ниже - потому что окрашиваются белки только на поверхности геля, а не по всей толще, т.к. колллоидный раствор плохо проникает.

Если готовить раствор красителя не с этанолом, а изопропанолом, то SDS диссоциирует быстрее и фиксация происходит лучше. К тому же лучше, чем при стандартной процедуре, окрашиваются гликопротеиды.

А для хорошей отмывки, не распространяя вокруг себя аппетитные пары уксуса с этанолом smile.gif удобно погрузить белок в отмывочный раство с 10% глицерином - гель сжимается и белеет, при возвращении в нормальную среду восстанавливается в размерах, но фон гораздо ниже (личное наблюдение ).
Убирать краску можно легко, добавляя в отмывочный раствор куски поролона - замечательно экстрагирует кумасси.
Гость
IP-штамп: frw3GfipDY0Lk
гость



 прочитанное сообщение 16.01.2009 14:21     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

ОЧЕНЬ БЫСТРЫЙ МЕТОД ОКРАШИВАНИЯ (10-15 МИНУТ!!!)

Граждане, все можно сделать еще проще и быстрее. При окрашивании геля Кумасси R-250 довести раствор краски с положенным в него гелем до кипения в микроволновке (это буквально одна минута) и все. Никакая фиксация не нужна, белки фиксируются уже в краске.

Дальше можете уже отмывать в воде при кипении. Налейте в пластиковую коробочку для микроволновки воду (побольше) и доведите до кипения (минуты 3). Кипятить не надо, можно отмыть нужную полосу. Набросайте фильтровальную бумагу (любую, которую не жалко, хоть туалетную) и покачивайте, пока синий фон из геля не перейдет в бумагу. Затем воду смените и процедуру повторите. Все! Окрашивание закончено! На все-про-все - 10-15 минут!

Если хотите удалить из геля SDS (чтобы раствор краски после использования можно было хранить и использовать бесконечно долго), вместо обычной процедуры фиксации, наверное, можно попробовать кипятить гель в воде до окрашивания, как предлагалось выше. Никогда не пробовала, однако, метод кажется вполне разумным.
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 25.01.2016 12:21     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

Можно ли в рецептуре метанол заменить этанолом?
Участник оффлайн! R.J.Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.01.2016 12:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

так и надо, жить спокойнее и проще, результат тот же
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 26.01.2016 01:45     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

Ну просто в хроматографии и методах мокрой химии этанол и метанол - далеко не одно и то же, так что не хотелось бы на собственной шкуре шишки набивать
НУ раз "все юзают этанол", а ето в отличии от метанола у меня практически неограничено, бум его лить
Участник оффлайн! R.J.Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.01.2016 12:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

лить и пить!
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  25.11.2021 07:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

http://replicarolexwatches.simpsite.nl/
https://www.smore.com/rj7kh-best-replica-watches
https://www.athleticsnation.com/users/Replicarolexwatches
https://pastebin.pl/view/ab0e458a
https://mix.com/watcheshutukcom
https://www.woddal.com/post/359216_tiny-acc...nybody-039.html
https://share.naturalnews.com/posts/3904099
https://demo.wowonder.com/post/214429_the-i...-producers.html
https://rapichat.com/post/5369_our-purpose-...ible-there.html
https://dashburst.com/replicarolexwatches/1
https://sway.office.com/KifcQvn36MK821G8
https://flipboard.com/@replicarolex24
https://getpocket.com/redirect?url=https%3A...eshut.uk.com%2F
https://www.openstreetmap.org/user/Hints%20...20Rolex%20Watch

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.05.22 16:10
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft