Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Электропорация -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: Электрокомпетентные клетки
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Forum robot
Постоянный участник
на сервере в Москве



 прочитанное сообщение 11.01.2006 20:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Комментарии к постоянной странице сайта: Электропорация

Электропорация позволяет получить максимально возможную в настоящее время компетентность клеток. Процедура очень быстрая и удобная, но, к сожалению, относительно дорогая. Основное неудобство – требуется очищенный препарат DNA (с неочищенными либо проскакивает искра, либо компетентность становится даже ниже, чем у обычных-химически компетентных клеток). Приготовление библиотеки. Вычисление времени роста.
_DmitriM_
IP-штамп: frftLGqhpFF.A
гость



 прочитанное сообщение 11.01.2006 20:06     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Я получал клетки вплоть до 10^11. Методика такая же, как описано, но клетки растил до OD600 = 0.4 - 0.5, и на 500 мл культуры делал промывку охлажденной до 4 С MilliQ 3 раза по 500 мл. Потом 3 раза по 150 мл 10% глицерола. Промывка действительно играет большую роль.
Чтобы уменьшить вероятность проскока при электропорации, ДНК должна быть очень чистой, но кроме того, клетки и ДНК надо несколько раз аккуратно перемешать пипетманом.
_Фома_
IP-штамп: frftLGqhpFF.A
гость



 прочитанное сообщение 11.01.2006 21:08     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Искра "без причин", т.е. при нормальных клетках и чистой ДНК, проскакивает обычно в старых кюветах и, как правило, в одних и тех же. Если в кювете случился пробой, её лучше выкинуть.
Гость
IP-штамп: fr3PpYUagJAXg
гость



 прочитанное сообщение 29.11.2006 15:07     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

А вот у меня конкретный вопрос, люди, если делали, пделитесь опытом, в работе с культурами с плохопроницаемой клеточной стенкой (микобактерии, родококки est.), каких параметров выращивания клеток следует придерживаться, чтобы получить максимально компетентные клетки???
Участник оффлайн! Andrey N
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 02.12.2006 17:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Что касается Rhodococcus --- очень важный вопрос: был ли вообще хоть какойт-то результат от порации при соблюдении всех ньюансов и правил; уверены ли Вы, что эта плазмида точно поддерживается в данном штамме?
Если ответ - однозначно нет, то оставте попытки,- переносите коньюгацией!
Участник оффлайн! Phila
Участник



 прочитанное сообщение 05.12.2006 21:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Сколько ни пыталась делать электропорацию - клетки потом ведут себя неадекватно или вовсе дохнут
guest: Andrey N
IP-штамп: froLOOvyV3Njo
гость



 прочитанное сообщение 06.12.2006 17:43     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

---- Сколько ни пыталась делать электропорацию - клетки потом ведут себя неадекватно ----

А как это?? smile.gif

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): comp3v
Гость
IP-штамп: frtjKzws.a5mc
гость



 прочитанное сообщение 11.12.2007 02:02     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Я приготовлял электрокомпетентные клетки из DB3.1 штамма, устойчивому к токсичным эффектам ccdB гена (Invitrogen).
В результате после трансформации на семи высеянных чашках выросла только одна колония.
Скажите, возможно ли что данный штамм вовсе не пригоден для приготовления электрокомпетентных клеток?
Участник оффлайн! studstud




 прочитанное сообщение 17.09.2008 15:28     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Трансформирую 2 мкл (ок. 300 нг) E.coli DH5-alpha плазмидой (fusion pBBR and pME), время импульса ок. 4,4 - 4,5 мс в 0,1 см кювете и либо вообше нет трансформантов, либо всего ок. 200. Одно "но" - глицерол беру 85% аптечный и разбавляю деионизатом. В чем причина??? Еще вопрос - можно ресуспендироват комп. клетки при приготовлении пипетированием?
Гость
IP-штамп: frtjKzws.a5mc
гость



 прочитанное сообщение 09.12.2008 03:24     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Я ресуспендировал сначала синим типом, а потом аликвотил желтым. Не рекумендуется пипетировать клетки излишне только в процессе самой электропрорации, так как это может увеличить вероятность проскока искры в кювете.
guest: Гость
IP-штамп: frRO7E7vl9EtY
гость



 прочитанное сообщение 09.12.2008 13:40     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Рекомендую купить новые кюветы. Алмабион пока держит старую цену, но обещает поднять с нового года: http://www.almabion.ru/kuveti.htm
guest: Гость
IP-штамп: frecG.u5Slk7M
гость



 прочитанное сообщение 11.06.2009 14:44     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Кто-нибудь использует прямоугольные импульсы для порации E.coli?

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 04.07.20 00:05
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft