Я наверно не ясно выразилась, я врач КДЛ, написала на счет пациента, которому в 3-х других лабах дают положительный результат на ПЦР ВГБ, а в моей лаборатории я получаю отрицательный результат. По всем контролям у меня все отлично работает, но возникает вопрос, почему тогда те 3 дают положительный?

  с этим все ясно, у меня техническая проблема, или проблема набора , или черт его знает что, хочу понять за что можно зацепиться, и была ли такая проблема у кого-то еще?

  Работаю в Ереване, наборы Литеховские, и количественный, и качественный, аппарат Biorad  CFX 96

  Работаю в Ереване, наборы Литеховские, и количественный, и качественный, аппарат Biorad  CFX 96

  Рабочую смесь готовлю, на полимеразу и праймеры никаких претензий нету, потому что других пациентов получаю положительных, ПКО тоже

  А что за реакция? не хотите не отвечайте, никто вас не обязывает

  интересно наскока я понял это вы не отвечаете
от кого полимераза
от кого праймеры от кого
пакманы   

  Литех

  Наборы формата real time

  я не знаю что такое литех  выложите последоательности праймеров и пакмана
заклонируйте пцр прдукт этого литеха
сделайте 10 кратные разведения плазмиды
выложите калибровочные кривые вашего биорада

  Наборы формата real time        
переведите 

  я не знаю что такое литех  выложите последоательности праймеров и пакмана
заклонируйте пцр прдукт этого литеха
сделайте 10 кратные разведения плазмиды
выложите калибровочные кривые вашего биорада

- внутренний контроль в образце работает?

   Одновременно положительные контроли и внутренние контроли четко выходят. Ставила двумя наборами форматов качественный и количественный. Хочу добавить, что других позитивных я получаю.

  Какое "заклонируйте"? Это же клиника (на сколько я понимаю), ох уж мне эти н.с.(ы)
пара вопросов топикстартеру
- внутренний контроль в образце работает?
- имеются ли у вас в лабе праймеры к какой нибудь человеческой последовательности? Если да - протестируйте ими свой образец, мож там банально развал ДНК
- если пациент сдавал кровь у вас, проверьте пробирку в которую был забор, сестра могла ошибиться с антикоагулянтом и взять не эдта- шную, а с цитратом или гепарином
- если есть возможность взять повторно и перевыделить, лучше это сделать

  Внутренний контроль в образце четко работает, выходит с разницей в один цикл от внутренних конролей положительных контролев. На счет ДНК пациента его повторно вызывали, то же самое. По 3 раза перевыделяли - ничего.

У меня такие предположения - 1. может быть в других местах на ПЦР тупо не ставили, а давали ответ чисто по HbsAg-у, но сама понимаю что маловероятно.
2. Второе предположение разница в программах, конкретно в количествах циклов в разных лабах.
3. Возможно ли такая ситуация, что он также HDV положительный, и это как-то ингибирует у меня реакцию, может разные праймеры у нас???

  А заключение из других лабораторий нельзя получить? И в программах и в праймерах может быть разница. Многие пользуются рошевскими китами для гепатита. Но в конце концов если в наборе уверены, то можете его название в свое заключение и вставить. Куда вам деваться если альтернативы нет?

  Вообще, если пациент сдавал в разное время в разных кдл, то сравнивать результаты уже не очень корректно.
во вторых, если действительно хотите разбираться, то есть такие вещи как внутрилаборатрный и внешний контроли качества.
есть ли у вас внутрилабораторная панель? Участвуете ли вы в какихто программах внешнего контроля качества?
Очень, очень рекомендую.
внутренний контроль очень полезен при получении новых наборов. Я в свое время каждый новый набор так испытывал, а после ряда случаев некачественных серий, каждую новую серию набора.
второе будет вам пооезно при доказательстве своей правоты, если не дай бог, дело дойдет до суда.

  Все намного банально, не надо девушку мучить...
Этих генотипов HBV туча, от А до ...?, а у Литеха они, видимо, не охвачены в одной реакции, или просто редкий случай с одной заменой, не определяющей генотип.
В праймерах ошибка маловероятна, но в зонде легко допустить такое.
А сам сто раз переделывал свои олиги на стадии разработки из-за таких "пропусков".
Вам нужно сравнить результаты по этому образцу на китах от разных производителей, но внутри вашей Лабы.
Звоните в Литех, разбирайтесь... На форуме пока не вижу дельных советов.
Можно проигнорировать программу амплификации от производителя и поставить "свою": 95 - 2 мин.  - 1 цикл,
            95  - 20-30 сек,
            50  - 20-30 сек,
            60  - 40 сек (чтение плашки)  - 40 циклов.

Возможно сигнал поднимется, если образец по настоящему +.

  А может он выздоровел? Или титр резко упал на фоне лечения. Антитела есть а вируса уже нет или мало))

  Все намного банально, не надо девушку мучить...
Этих генотипов HBV туча, от А до ...?, а у Литеха они, видимо, не охвачены в одной реакции, или просто редкий случай с одной заменой, не определяющей генотип.
В праймерах ошибка маловероятна, но в зонде легко допустить такое.
А сам сто раз переделывал свои олиги на стадии разработки из-за таких "пропусков".
Вам нужно сравнить результаты по этому образцу на китах от разных производителей, но внутри вашей Лабы.
Звоните в Литех, разбирайтесь... На форуме пока не вижу дельных советов.
Можно проигнорировать программу амплификации от производителя и поставить "свою": 95 - 2 мин.  - 1 цикл,
            95  - 20-30 сек,
            50  - 20-30 сек,
            60  - 40 сек (чтение плашки)  - 40 циклов.

Возможно сигнал поднимется, если образец по настоящему +.

  60 - 40 сек (чтение плашки) - 40 циклов.
если после 30 ничего нет то и лвить нечего

  у меня 43 циклов и полный негатив, а ПКО выходит на 28-ом

  Все намного банально, не надо девушку мучить...
Этих генотипов HBV туча, от А до ...?, а у Литеха они, видимо, не охвачены в одной реакции, или просто редкий случай с одной заменой, не определяющей генотип.
В праймерах ошибка маловероятна, но в зонде легко допустить такое.
А сам сто раз переделывал свои олиги на стадии разработки из-за таких "пропусков".
Вам нужно сравнить результаты по этому образцу на китах от разных производителей, но внутри вашей Лабы.
Звоните в Литех, разбирайтесь... На форуме пока не вижу дельных советов.
Можно проигнорировать программу амплификации от производителя и поставить "свою": 95 - 2 мин.  - 1 цикл,
            95  - 20-30 сек,
            50  - 20-30 сек,
            60  - 40 сек (чтение плашки)  - 40 циклов.

Возможно сигнал поднимется, если образец по настоящему +.

 
Звоните в Литех, разбирайтесь... На форуме пока не вижу дельных советов.

  могу дать единственный дельный совет - менять наборы.
вот тут под боком врач кдл сидит, говорит, что литех послали еще несколько лет назад, так как они на этих наборах фсвок не прошли.
надеюсь, вы знаете что такое фсвок?
У меня был свой опыт работы с литехом, но к кдл это не относится..

  могу дать единственный дельный совет - менять наборы.
вот тут под боком врач кдл сидит, говорит, что литех послали еще несколько лет назад, так как они на этих наборах фсвок не прошли.
надеюсь, вы знаете что такое фсвок?
У меня был свой опыт работы с литехом, но к кдл это не относится..

  вы понимаете что вы советуете?
Я удивлен, что приходится писать вещи типа дваждыдвачетыре...
вообщето кдл не место для экпериментов. Там работают по четким инструкциям к наборам. Подбирать условия должны разработчики на этапе разработки. Если у них там чтото не охвачено и они об этом не пишут в инструкции, то такие вот херовые разработчики...
Если клиничесая лаборатория не знает, что такое внутрилабораторный контроль качества, то вот такая вот херовая лаборатория...
в итоге имеем то, что имеем.

  У нас RfB вместо фсвок , последняя аттестация была 2 месяца назад , теми же наборами, четкое совпадение, никаких проблем не было(

https://www.rfb.bio/cgi/switchLang?lang=en

  а какие мнения про наборы Амплисенс и ДНК-технология?

  Внутрилабораторный контроль качества производится! До этого случая никаких проблем не было.

  Замечательно. Я правда, не сталкивался с этой системой, конкретики не знаю.
С амплисенсом тоже были регулярные проблемы, говорят. Ну это со слов.
я сам давно этим занимался, тогда цнииэм только разворачивалось и самая большая проблема была чтото купить у них . Коммуникации и Сервис были ниже уровня моря. Возможно, что сейчас чтото изменилось.
Ну тогда, я бы смело выдавал результат, который у вас получился.
а дальнейшие вопросы решал в порядке их поступления.
Выяснять причины можно. Но это долго и многое не в вашей компетенции. Начать нужно с того, что одну и туже пробу нужно исследовать с использованием разных наборов. Потом, у разработчика может быть больше информации посвойствам набора (надеюсь). Надо привлекать их.
непонятно, зачем пациент проводит анализ в разных лабораториях?

  Вся проблема в том, что все лаборатории, в том числе наша, частные.А наше руководство, которое не является специалистом уверено, что так как 3 другие дают одинаковый результат, только у нас он отличается, значит у нас проблема

  Ваше начальство не право, считаетеся, что ложно отрицательных на ПЦР 1-1,4 %.
В России такие новые варианты вирусов должны передаваться для анализа в соответствующие НИИ Роспотребнадзора. Предупредите "Литех". Скорее всего у трех других компаний другие наборы. Это не означает, что наборы "Литех" хуже. Это означает, что вариант вируса, который у пациента, не идентифицируется данным набором. У Вас же были положительные тесты на других пациентах с данным набором. Скорее всего тест-системы других компаний тоже имеют "лакуны". Более того, в каждой стране стремятся делать тест-системы на "родные" изоляты вирусов. Тест-системы "Биорада" для Африки отличаются от тест систем для России.

Вашему руководству рекомендую посетить самому и прихватить Вас сюда:  http://congress.fedlab.ru/

Очень сожалею, что Вы задали вопрос не в самые лучшие времена молбиола и многие специалисты покинули форум.