Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Rob Участник |
У меня очередной технический вопрос. Как мне провести ELISA эксперимент, чтобы определить связывающую активность заданного антитела и заданного белка, который Fc? На ночь инкубирую плитку с неспецифическим антителом, потом блокирую заданым белком (при расчете концентрации неизвестного, блокировал BSA), потом инкубирую с заданым антителом, далее - меченное антитело HRP. Поправьте меня, пожалуйста, если эта схема не верна. Благодарю |
vb Постоянный участник |
|
Rob Участник |
(vb @ 13.09.2017 22:16) Подразумеваю, как будет антитело связываться с белком. Покрываю плитку анти-человеческим неспецифич. антителом...потом блокирую BSA...потом, белок Fc человеческий...потом, антитело человеческое, произведенное в мышках...и сверху HRP ani-human (или может надо HRP-anti mouse?). |
vb Постоянный участник |
(Rob @ 13.09.2017 20:45) хорошо, в каких единицах измерения вы это планируете выражать? |
MMM Постоянный участник |
|
Rob Участник |
(vb @ 14.09.2017 00:21) в молярной концентрации |
Rob Участник |
(MMM @ 14.09.2017 13:07) human Fc, произведенной в мыше |
MMM Постоянный участник |
(Rob @ 14.09.2017 17:28) Правильно ли я понимаю из вашего ответа, что это не антитело, а только Fc фрагмент человеческого антитела? |
Rob Участник |
(MMM @ 14.09.2017 20:02) Правильно ли я понимаю из вашего ответа, что это не антитело, а только Fc фрагмент человеческого антитела? это антитело, а не фрагмент |
Rob Участник |
покрываю пластик плитки goat anti-human UNLB антителом...инкубирую ночь потом, белок, у которого human Fc....инкубирую потом, антитело human Fc (mouse origin)...инкубирую потом, goat anti-human HRP..инкубирую... крашу Не будет ли HRP антитело вязаться к UNLB антителу? |
vb Постоянный участник |
(Rob @ 14.09.2017 14:28) Концентрации чего? |
vb Постоянный участник |
(Rob @ 14.09.2017 18:20) Хочу добавить деталей... покрываю пластик плитки goat anti-human UNLB антителом...инкубирую ночь потом, белок, у которого human Fc....инкубирую потом, антитело human Fc (mouse origin)...инкубирую потом, goat anti-human HRP..инкубирую... крашу Не будет ли HRP антитело вязаться к UNLB антителу? Нет не будет. вот только с чем у вас связывается, антитело human Fc (mouse origin? |
MMM Постоянный участник |
(Rob @ 14.09.2017 21:20) Неа! Козлы с козлами не связываются. |
MMM Постоянный участник |
(Rob @ 14.09.2017 21:20) Я конечно понимаю, что вы русский язык узнали от мамы с папой, которые уехали из России лет эдак 30-40 назад. Но ваша "плитка" очень режет уши. plate у нас называют планшет или микропланшет и еще иногда планшет для микротитрования ну и вульгарно плашка. |
MMM Постоянный участник |
(vb @ 14.09.2017 22:59) Как с чем? Оно должно вытеснить тестируемый Fc-белок (продукт ГМО) с анти-человеческих козлов. И тем самым показать превосходство мышинных натуральных ГМО химер перед рекомбинантными Fc-продуктами ГМО. |
MMM Постоянный участник |
Но на самом деле вам надо сделать не так. Вам надо мышинную химеру или просто человеческий нативный Fc пометить биотином связать ее с нижними античеловеками, а потом вытеснять тестируемым белком и белком сравнения (тем же нативным Fc или мышинной химерой, но не меченными биотином) и вытеснять эквимолярными количествами и сравнивать результаты вытеснения с помощью стрептавидин пероксидазы. Сообщение было отредактировано MMM - 14.09.2017 23:09 |
Rob Участник |
(MMM @ 14.09.2017 23:40) Я конечно понимаю, что вы русский язык узнали от мамы с папой, которые уехали из России лет эдак 30-40 назад. Но ваша "плитка" очень режет уши. plate у нас называют планшет или микропланшет и еще иногда планшет для микротитрования ну и вульгарно плашка. Спасибо за понимание... |
Rob Участник |
(MMM @ 14.09.2017 23:46) Как с чем? Оно должно вытеснить тестируемый Fc-белок (продукт ГМО) с анти-человеческих козлов. И тем самым показать превосходство мышинных натуральных ГМО химер перед рекомбинантными Fc-продуктами ГМО. Я вообще то предполагаю, что антитело должно прицепиться к белку-Fc, а не бороться за козлиное антитело. |
Rob Участник |
|
Rob Участник |
(MMM @ 15.09.2017 00:06) Значит в чем ваша проблема: Если вы будете в конце инкубировать с античеловеческим коньюгатом, то он сможет узнавать только человеческий Fc фрагмент(не важно чей мышинных химер или рекомбинантного Fc), потому что в вашем бутерброде снизу под этим коньюгатом, больше ничего человеческого, кроме Fc - нет. А это значит что все что теоретически могло бы удерживать коньюгат на плашке, что бы связаться с коньюгатом должно от этих якорей отвалится, ибо держится оно за плашку Fc-фрагментом. Либо все будет строится на том, что заякорить коньюгат можно будет только за ту часть Fc, которая не связана с самыми нижними античеловеками, а будет ли такая часть узнаваться коньюгатом неизвестно. В любом случае античеловеческий коньюгат ни при каких условиях вашего бутерброда не сможет отличить Fc рекомбоминанта от Fc - мышыинной химеры. Вот если вы будете использовать антимышинный коньюгат, то тогда та часть этого коньюгата, которая узнает Fab фрагменты мыши сможет связаться с оставшимися связанными с нижними античеловеками мышинными химерами. Но на самом деле вам надо сделать не так. Вам надо мышинную химеру или просто человеческий нативный Fc пометить биотином связать ее с нижними античеловеками, а потом вытеснять тестируемым белком и белком сравнения (тем же нативным Fc или мышинной химерой, но не меченными биотином) и вытеснять эквимолярными количествами и сравнивать результаты вытеснения с помощью стрептавидин пероксидазы. Перечитываю нескольк раз.... если антитело связывается с белком...то ведь HRP прицепиться к антителу...и будет у меня сигнал... |
Rob Участник |
Если узнает Fc, то белок Fc прицепится, а потом, антитело узнает этот белок и тоже свяжеться, а потом....HRP козлиное увидит Fc антитела и так будет видна картина связывание белка с антителом |
vb Постоянный участник |
Или у вас мышиное античелрвеческое? |
MMM Постоянный участник |
(Rob @ 15.09.2017 18:59) Я вообще то предполагаю, что антитело должно прицепиться к белку-Fc, а не бороться за козлиное антитело. Даааа? А почему в таком случае ему не прицепится и к химерным мышечеловекам, у которых Fc тоже человеческий? Сообщение было отредактировано MMM - 15.09.2017 20:51 |
MMM Постоянный участник |
(Rob @ 15.09.2017 19:04) Перечитываю нескольк раз.... если антитело связывается с белком...то ведь HRP прицепиться к антителу...и будет у меня сигнал... Вы сами-то поняли че спросили. |
MMM Постоянный участник |
(Rob @ 15.09.2017 19:11) Козлиное UNLB немеченное антитело на плитке разпознает все, что можно разпознать или только какую то спец. область, как примеру, Fc? Пожалуйста!: не меченное антитело на ПЛАНШЕТЕ..... (Rob @ 15.09.2017 19:11) Если узнает Fc, то белок Fc прицепится, а потом, антитело узнает этот белок и тоже свяжеться, а потом....HRP козлиное увидит Fc антитела и так будет видна картина связывание белка с антителом Во первых кто вам сказал, что если к Fc причепилось одно антитело, то к нему же причепится и второе антитело. Если так рассуждать, то к нему может и третье прицепится и четвертое. Но Fc фрагмент не резиновый он не может нести на себе скольугодно много антител. Если нижние античеловеки поликлоны и верхние коньюгированные античеловеки тоже поликлоны. То в этих поликлональных пулах, есть пулы практически на все антигенные детерминанты, которые имеются на Fc фрагменте. Это значит что в верхних коньюгатах всегда может найтись клон антител, который будет конкурировать с нижним клоном за антигенную детерминанту. А это означает, что такие иммунные комплексы рискуют быть снятыми с иммобилизованных антител и перейти в раствор в комплексе с коньюгатом и следовательно не будут впоследствии детектированы. Сообщение было отредактировано MMM - 15.09.2017 20:48 |
Rob Участник |
(MMM @ 15.09.2017 21:30) Даааа? А почему в таком случае ему не прицепится и к химерным мышечеловекам, у которых Fc тоже человеческий? НУ я так и говорю, что белок Fc должен связаться с антителом....и активность этого связывания я и хочу узнать. Итак нижний козел прицепит к себе белок за Fc...потом, антитело Fab регион узнает комплиментарно белок и свяжется с ним....потом верхний козел HRP распознает Fc регион антитела.... |
Rob Участник |
(vb @ 15.09.2017 21:16) Вопервых, человечье антитело не свяжется с челокечьим Fc. С чего бы ему связываться? Или у вас мышиное античелрвеческое? ПРостите, уточните, пожалуйста, какое антитело вы имеете ввиду? Одно козлиное UNLB неспецифическое, второе- козлиное HRP меченое, третье - исследуемое. |
vb Постоянный участник |
(Rob @ 15.09.2017 19:18) ПРостите, уточните, пожалуйста, какое антитело вы имеете ввиду? Одно козлиное UNLB неспецифическое, второе- козлиное HRP меченое, третье - исследуемое. Покрываю плитку анти-человеческим неспецифич. антителом...потом блокирую BSA...потом, белок Fc человеческий...потом, антитело человеческое, произведенное в мышках...и сверху HRP ani-human (или может надо HRP-anti mouse?). |
MMM Постоянный участник |
1) Мы сенсебилизируем планшет поликлональными козячьими антителами против человеческих антител 2)Наносим анализируемый белок, содержащий Fc фрагмент антител человека. Ок! Что происходит?Априорно поликлональные антитела содержат клоны, направленные на антигенные детерминанты как Fc, так Fab фрагментов. Но против анализируемого белка будут задействованы клоны направленные только против Fc фрагмента причем только те, для которых на данном анализируемом фрагменте найдутся антигенные детерминанты. 3)Мы наносим гуманизованные антитела мыши - этакую химеру Fc - фрагмент человеческий, а Fab-фрагмент мышинный. Что происходит? Вы не пишите о специфичности этих химер, но вряд ли они направлены против Fc-фрагмента человека, ибо тогда бы они были бы напрвлены сами против себя и очень быстренько образовали бы гигантский нерастворимый иммунный комплекс. Так что допустим, что их специфичность никакак не связана ни с какими антителами, тогда для антител, которыми сенсибилизирован планшет они будут представлять все тот же Fc фрагмент человека и некий индиферентный балластный кусок(мышинный Fab фрагмент) и тогда Fc фрагмент мышинных химер начнет конкурировать за связывание с уже нанесенным ранее Fc -фрагментом за связывание с антителами, которыми сенсебилизирован планшет. Т.е. начинается конкурентная борба между тестируемым белком и мышинными химерами за места на скамейке антител, которыми сенсибилизирован планшет. Побеждает тот кого больше и кто сильнее держится за скамейку. В зависимости от концентраций и свойств анализируемых молекул мы можем получить скамейку со смесью молекул химер и анализируемых молекул в разных соотношениях или скамейку, на которой молекулы только одного из участников борьбы за места на скамейке. 4) Теперь сверху мы наносим коньюгат и это опять поликлональная сыворотка против человеческого Fc фрагмента. Вопрос-смогут ли эти антитела как-то отличить химеры мышы от анализируемого Fc- белка? Ответ-нет не смогут. Вопрос смогут ли антитела коньюгата конкурировать за связывание Fc фрагмента с антителами , которыми сенсебилизирован планшет? Ответ - да, смогут. И наконец глобальный вопрос сможем ли мы такой схемой ELISA извлечь какую-то информацию о характере связывания с изучаемого белка с антителами против антител человека. Отвечаем - нет. Потому что используемые для проявления результата коньюгаты не обладают специфичностью ни к одному из участников конкурентной борьбы - это раз. И два они сами являются конкурентами тем антителам, которые заякоривают имунный комплекс на планшете и тем самым разрушают заякоренный комплекс и смывают его в педальное ведро. Сообщение было отредактировано MMM - 16.09.2017 15:37
|
Rob Участник |
(MMM @ 16.09.2017 14:42) Ну давайте попорядку. 1) Мы сенсебилизируем планшет поликлональными козячьими антителами против человеческих антител 2)Наносим анализируемый белок, содержащий Fc фрагмент антител человека. Ок! Что происходит?Априорно поликлональные антитела содержат клоны, направленные на антигенные детерминанты как Fc, так Fab фрагментов. Но против анализируемого белка будут задействованы клоны направленные только против Fc фрагмента причем только те, для которых на данном анализируемом фрагменте найдутся антигенные детерминанты. 3)Мы наносим гуманизованные антитела мыши - этакую химеру Fc - фрагмент человеческий, а Fab-фрагмент мышинный. Что происходит? Вы не пишите о специфичности этих химер, но вряд ли они направлены против Fc-фрагмента человека, ибо тогда бы они были бы напрвлены сами против себя и очень быстренько образовали бы гигантский нерастворимый иммунный комплекс. Так что допустим, что их специфичность никакак не связана ни с какими антителами, тогда для антител, которыми сенсибилизирован планшет они будут представлять все тот же Fc фрагмент человека и некий индиферентный балластный кусок(мышинный Fab фрагмент) и тогда Fc фрагмент мышинных химер начнет конкурировать за связывание с уже нанесенным ранее Fc -фрагментом за связывание с антителами, которыми сенсебилизирован планшет. Т.е. начинается конкурентная борба между тестируемым белком и мышинными химерами за места на скамейке антител, которыми сенсибилизирован планшет. Побеждает тот кого больше и кто сильнее держится за скамейку. В зависимости от концентраций и свойств анализируемых молекул мы можем получить скамейку со смесью молекул химер и анализируемых молекул в разных соотношениях или скамейку, на которой молекулы только одного из участников борьбы за места на скамейке. 4) Теперь сверху мы наносим коньюгат и это опять поликлональная сыворотка против человеческого Fc фрагмента. Вопрос-смогут ли эти антитела как-то отличить химеры мышы от анализируемого Fc- белка? Ответ-нет не смогут. Вопрос смогут ли антитела коньюгата конкурировать за связывание Fc фрагмента с антителами , которыми сенсебилизирован планшет? Ответ - да, смогут. [b] И наконец глобальный вопрос сможем ли мы такой схемой ELISA извлечь какую-то информацию о характере связывания с изучаемого белка с антителами против антител человека. Отвечаем - нет. Потому что используемые для проявления результата коньюгаты не обладают специфичностью ни к одному из участников конкурентной борьбы - это раз. И два они сами являются конкурентами тем антителам, которые заякоривают имунный комплекс на планшете и тем самым разрушают заякоренный комплекс и смывают его в педальное ведро. Вы же мне писали, что козлы с козлами не связываются. У меня был вопрос о связывании верхнего HRP anti-human к поликлональному нижнему anti-human. А тут говорите, что обратное |
Rob Участник |
Почему вы утверждаете, что исследуюемое человеческое антитело захочет вязаться к поликлональному коньюгированному?. Оно же сконструировано на связь с белоком, зачем ему бороться за связывание с поликлональным антителом? |
Rob Участник |
Если я сделаю вот таким путем... На планшетик поставлю исследуемое антитело напрямую....проинкубирую...потом, белочек Fc....проинкубирую...и потом поликлональное анти-человеческое.... Что скажете? |
MMM Постоянный участник |
Нет НЕ говорю. Либо вы плохо понимаете русский, либо вы не понимаете о чем я вам толкую. Верхние коньюгаты с нижними поликлонами НЕ связываются! они связываются с Fc-фрагментами. И нижние с Fc и верхние с Fc. Вам не кажется это интересным и важным для анализа, для понимания, что же будет в этом случае происходить. Сообщение было отредактировано MMM - 17.09.2017 23:51 |
MMM Постоянный участник |
(Rob @ 17.09.2017 23:30) а если мне верхнее HRP взять не козлиное, а кроликовое, Не поможет ни кроликовое, ни мышинное, ни лошадинное, ни ослинное. (Rob @ 17.09.2017 23:30) или не anti-human, а anti-mouse? А это уже обсуждалось. Самоцитируюсь: (MMM) Вот если вы будете использовать антимышинный коньюгат, то тогда та часть этого коньюгата, которая узнает Fab фрагменты мыши сможет связаться с оставшимися связанными с нижними античеловеками мышинными химерами. В этом есть смысл. В этом случае вы увидите только мышинные химеры оставшиеся связанными с нижними антителами. (Rob @ 17.09.2017 23:30) Почему вы утверждаете, что исследуюемое человеческое антитело захочет вязаться к поликлональному коньюгированному?. Потому что поликлональные антитела были получены на человеческие антитела. В состав человеческих антител входит Fc-фрагмент антител человека. В состав исследуемого белка входит,по вашему утверждению, Fc-фрагмент человека. Значит среди клонов поликлональных антител, будут клоны против человеческого Fc- фрагмента и значит они будут связываться с Fc-фрагментом анализируемого белка. (Rob @ 17.09.2017 23:30) Оно же сконструировано на связь с белоком, зачем ему бороться за связывание с поликлональным антителом? На что оно там сконструировано НЕ важно. ВАЖНО, что в нем есть человеческий Fc-фрагмент и он будет узнаваться любыми поликлональным антителами полученными на полную молекулу человеческих антител. |
MMM Постоянный участник |
(Rob @ 17.09.2017 23:32) На планшетик поставлю исследуемое антитело напрямую....проинкубирую...потом, белочек Fc....проинкубирую...и потом поликлональное анти-человеческое.... Что скажете? Фигня! |
Rob Участник |
(MMM @ 18.09.2017 00:49) Почему фигня? |
MMM Постоянный участник |
(Rob @ 18.09.2017 16:16) 1)Когда вы пытаетесь пришлепнуть белок к пластику здесь не работает биоспецифичность здесь скорее играют роль физико-химические параметры белка. 2)Античеловеческими антителами вы не поймете - где у вас мышечеловеческая химера, а где Fc-содержащий белок. |
Rob Участник |
По классике, на пластик цепляется исследуемый антиген (белокFc), к нему антитело исследуемое, а сверху HRP анти-человеческое. |
Rob Участник |
Покрывал планшетик анти-человеческим UNLB антителом, потом плазма Fc-человеческий из мышки (концентрацию, которого я опрделелял), потом HRP анти-человеческое....Нет, тут вроде все нормально. |
MMM Постоянный участник |
Директ ELISA она для определения антител к антигену. В ней планшет сенсебилизируется антигеном. И в данном случае нам плевать, как он там будет на плашку прилипать. А вот антитела из тестируемой сыворотки к антигену будут прилипать уже биоспецифически и дозозависимо. Так что в такой ИФА никаких претензий. Вы же таким способом пытаетесь не антитела определить, а антиген, да еще и в смеси с другим антигеном, причем имеющими на определенном участке чуть ли не 100% гомологию. --Покрывал планшетик анти-человеческим UNLB антителом, потом плазма Fc-человеческий из мышки (концентрацию, которого я опрделелял), потом HRP анти-человеческое....Нет, тут вроде все нормально. На самом деле там тоже вопрос есть, потому что там и нижние и верхние антитела против одного и того же антигена человеческих антител. И что бы такая схема работала, необходимо что бы нижние антитела узнавали на антигене антигенную детерминанту отличную от антигенной детерминанты, узнаваемой верхними антителами, в противном случае они будут конкурировать за связывание с антигеном. Но там вообще закрытая система была. Производитель не указывает, что за антитела и против каких антигенных детерминант он использует в своем наборе. Сообщение было отредактировано MMM - 18.09.2017 18:29 |
Rob Участник |
(MMM @ 18.09.2017 19:27) -Ведь Директ Элайза, как раз и работает по такой схеме, как я написал. Директ ELISA она для определения антител к антигену. В ней планшет сенсебилизируется антигеном. И в данном случае нам плевать, как он там будет на плашку прилипать. А вот антитела из тестируемой сыворотки к антигену будут прилипать уже биоспецифически и дозозависимо. Так что в такой ИФА никаких претензий. Вы же таким способом пытаетесь не антитела определить, а антиген, да еще и в смеси с другим антигеном, причем имеющими на определенном участке чуть ли не 100% гомологию. [i][/i] Т.е. если я правильно вас понимаю, если бы сначала на плитку поставил белок, а сверху антитело, то было бы все хорошо. А если вначале антитело, а потом белок, но не правильно? А если негативный контроль....антитело плюс HRP анти-чел антитело не показало связывания. То это как считается? Я это принял, как за правильно спланированный эксперимент, в котором исследуемый белок и исследуемое антитело показали результат связывания. |
MMM Постоянный участник |
Что у вас за каша в голове! Вы определяете антитело и тогда антиген(чистый) можно нанести на планшет. А если вы определяете антиген(грязный в смеси с другими белками) то так не получится. |
Rob Участник |
(MMM @ 18.09.2017 21:14) --Т.е. если я правильно вас понимаю, если бы сначала на плитку поставил белок, а сверху антитело, то было бы все хорошо. А если вначале антитело, а потом белок, но не правильно? Что у вас за каша в голове! Вы определяете антитело и тогда антиген(чистый) можно нанести на планшет. А если вы определяете антиген(грязный в смеси с другими белками) то так не получится. Полностью с вами согласен...такой каши у меня в голове давно не было... В случае с директ Элайзой, белок чистый....И какая разница, что наносить в первую очередь...исследуемый белок или исследуемое антитело? Негативный контроль не показал связывание исследуемого антитела с HRP коньгатом. Извините, я пока занялся перечитыванием этого топика с самого начала и чем дальше, тем все мрачнее.... |
Rob Участник |
Есть антитело и есть протеин - Fc. Надо посмотреть их связывающую активность. Подойдет ли этот кит для измерения? Т.е. на подготовленный планшет я добавляю свое антитело, инкубирую...потом добавляю белок-Fc, инкубирую...потом биотинилированное антитело, инкубирую...потом стрептавидин, инкубирую... |
Rob Участник |
Картинки: Picture1.png — (263.93к) |
MMM Постоянный участник |
Вопрос: Вы хотите найти некую эффективную концентрацию своего Fc белка? Или вы хотите сравнить аффинность вашего белка с неким стандартом. --Т.е. на подготовленный планшет я добавляю свое антитело Этот номер не пройдет! В данном наборе планшет уже сенсебилизирован и добавить на него чего-то своего не удастся. Вот нанести свой Fc-белок вы можете. А дальше вас может ждать либо удача, либо разочарование. Если в данном наборе антитела, которыми сенсебилизирован планшет и которые биотинилированы оба работают против Fc фрагмента, но на направлены против разных его участков - все будет хорошо, а вот если хотя бы одно из них направлено против Fab, то вы ничего не увидите. |
затвор |
(MMM @ 14.09.2017 23:40) Я конечно понимаю, что вы русский язык узнали от мамы с папой, которые уехали из России лет эдак 30-40 назад. Но ваша "плитка" очень режет уши. plate у нас называют планшет или микропланшет и еще иногда планшет для микротитрования ну и вульгарно плашка. Затвор В начале 90-х птички, когда-то упорхнувшие из Физтеха в дальние страны , стали на недельку - другую наведываться в родные края. Как правило, они садились на край родного гнезда, заглядывали в него со смесью брезгливости и жалости, что-то неодобрительно чирикали - и улетали к новым и уже родным берегам. Однако- же, дух Физтеха жил почти в каждом: все, или почти все почитали долгом рассказать о своей работе на семинаре. Иногда выяснялось, что докладчик подзабыл русскую терминологию. Иногда, - что ему пришлось полностью сменить тематику, и все термины он учил и знает только по-английски. Кто немного стеснялся такой ситуации, кто вместе со слушателями смеялся необходимости переводить слова на родной язык... Одна из птичек делала доклад по новому прибору, который должен был, по мнению автора, затмить собой все остальные приборы и, наконец-то, принести счастье измученному человечеству. Важным элементом нового прибора была деталь, по-английски называвшаяся gate. Слово это, в зависимости от контекста, может быть переведено, как "ворота", или " выход", или "застава" и.т.д. В данном случае русским эквивалентом было слово "затвор". Когда в первый раз докладчик запнулся и спросил: "Ребята, как нужно сказать по-русски?", - секретарь семинара подсказал - "затвор". Через минуту сцена повторилась. Докладчик защелкал пальцами, и сразу несколько голосов из первого ряда с готовностью помогли: "затвор". Еще через минуту повторение вызвало смех у аудитории и беспорядочные подсказки со всех сторон. Наконец, буквально через несколько секунд докладчик споткнулся на тех же граблях. И тогда откуда-то из середины зала густой бас отчетливо и неторопливо выговорил: " Затвор, жопа ". И, о чудо, докладчик продолжил рассказ без всяких затруднений. Заколдованное слово с легкостью необыкновенной вылетало из уст его. Заодно и все остальные русские термины с полной отчетливостью всплыли в памяти докладчика. И, сосредоточившись на принципе работы прибора, слушатели вполне смогли оценить изящество и красоту идеи. |
затвор |
(MMM @ 14.09.2017 23:40) Я конечно понимаю, что вы русский язык узнали от мамы с папой, которые уехали из России лет эдак 30-40 назад. Но ваша "плитка" очень режет уши. plate у нас называют планшет или микропланшет и еще иногда планшет для микротитрования ну и вульгарно плашка. ммм у меня в принципе папа лет ендак в 1945 брал Берлин |
затвор |
(MMM @ 18.09.2017 00:49) ммм полностью с Вами согласен у меня дятька моего папы свалил в Париж в Сорбону ссука |
Rob Участник |
(MMM @ 20.11.2017 21:24) Угу! Все по кругу ходите. Вопрос: Вы хотите найти некую эффективную концентрацию своего Fc белка? Или вы хотите сравнить аффинность вашего белка с неким стандартом. --Т.е. на подготовленный планшет я добавляю свое антитело Этот номер не пройдет! В данном наборе планшет уже сенсебилизирован и добавить на него чего-то своего не удастся. Вот нанести свой Fc-белок вы можете. А дальше вас может ждать либо удача, либо разочарование. Если в данном наборе антитела, которыми сенсебилизирован планшет и которые биотинилированы оба работают против Fc фрагмента, но на направлены против разных его участков - все будет хорошо, а вот если хотя бы одно из них направлено против Fab, то вы ничего не увидите. Спасибо за ответ...Я верил, что именно Вы мне ответите. Я хочу посмотреть будет ли мой белок Fc связываться с моим антителом т.к. это антитело сделано с целью споймать именно этот белок Fc...Если смотреть ту картинку, которую я прицепил...Там показала идея, что образец биотинилируется и вуаля...читается...ТАк вот у меня этот "образец" состоит из двух частей: моего антитела, которое я наношу на подготовленный планшет и потом сверху белок Fc...и на него биотинилированное антитело. Сообщение было отредактировано Rob - 20.11.2017 22:28 |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |