Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Проблема с МТТ-тестом -- Слетают клетки на стадии инкубации с МТТ --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Artin




 прочитанное сообщение 15.03.2019 10:00     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Добрый день, уважаемые форумчане!

Столкнулся со следующей проблемой: при оценке чувствительности клеток (MCF-7) к экстрактам из растений, с помощью МТТ-теста, у меня были аномально низкие значения оптической плотности (0,1 в контроле и соответственно ниже, при увеличении концентрации экстракта).

Кратко о схеме опыта: культивирование клеток в 96 луночной плашке (TC-plate 96-well, cell+ Sarstedt), 60-и луночный формат; плотность посева — 2 тыс. клеток на лунку; преинкубация 24 ч., инкубация с экстрактом в питательной среде — 48 ч.; далее удаление экстракта (аспирация), промывка PBS-ом (Gibco), внесение раствора МТТ в PBS-е (0,5 мг/мл) и инкубация в течении двух часов; экстракция формазана.

Решил визуально оценить состояние клеток на различных этапах. Преинкубация и окончание инкубации с экстрактом — все норм, распределение клеток равномерное, имеется градиентное уменьшение плотности монослоя при увеличении конц. экстракта. Потом решил оценить каждый этап инкубации с МТТ: т.е взял на мониторинг три из шести контрольных лунок и оценивал состояние клеток после удаления экстракта, промывки PBS и внесения МТТ-раствора. И вот тут вылезло следующее: при внесении раствора МТТ значительная часть клеток (визуально 30 %) слетает с пластика. Три оставшиеся контрольные лунки я не мыл и после удаления питательной среды загрузил туда сразу МТТ-раствор (все клетки остались на пластике). Лунки с раститрованым экстрактом делал как обычно: мыл и загружал МТТ (в конце обработки всего планшета посмотрел в микроскоп: там клетки слетают тоже). Спетрофотометр показал, что в промытых лунках оптическая плотность 0,2 — в контроле с промывкой и ниже — в опытных лунках. Три контрольные лунки без промывки показали значение OD 0,6.

Соответственно, я выделил несколько возможных косяков:
1. Сушка клеток во время промывки. Наименее вероятно, так как три контрольных лунки были обработаны меньше чем за минуту (секунд примерно 30), а клетки слетели все равно.
2. Действие экстрактов. Наименее вероятно, так как опять же клетки слетают и в контрольных лунках, которые я мыл (без экстракта).
3. Испортился PBS или МТТ. Наименее вероятно, так как в аналогичном PBS-е я растворял МТТ и загружал в непромытые контрольные лунки — и после 2-ух часов инкубации с ними все гуд.
4. Разница в температурах промывочного PBS и раствора МТТ. Более вероятно. Первый был комнатной температуры, а раствор МТТ я подогревал до 37 градусов. Хотя опять же, на мой субъективны взгляд, странно: неужели для трех промытых контрольных лунок хватило тех пары секунд инкубации с "холодным" раствором, чтобы поубивать 50 % клеток? Да и при рутинном культивировании я промываю флаконы таким вот "холодным" PBS-ом (перед трипсинизацией или заменой среды) и таких печальных последствий не наблюдаю.

Выводы и возможные пути решения проблемы:
1. Вероятно аспирационка слишком агрессивно вытягивает раствор из лунок. Соответственно, нужно убрать стадию промывки и в краевых лунках сделать бесклеточную раститровку экстракта, для контроля способности остатков самого экстракта восстанавливать МТТ до формазана и/или влиять на оптическую плотность раствора.
2. Греть промывочный PBS.

Буду искренне благодарен за критические замечания! Может кто-нибудь сталкивался с такой проблемой и нашел ее решение.

P.S. Надеюсь, что проблема была описана до приемлемой внятности smile.gif
P.S.S. При первом взгляде кривульки выходят приличные: S-образность, разброс данных небольшой, однако имеет место явный косяк + скачки в значениях IC50 для одних и тех же экстрактов.

Сообщение было отредактировано Artin - 15.03.2019 10:11
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  11.11.2021 16:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/
http://simp.ly/p/nxGlWb
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24
https://8tracks.com/replicawatchesuk
Участник оффлайн! nushra4
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  01.05.2022 13:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

In-Home & Online Support for your ,The best Tech Support , ready to help you - anytime, anywhere.
nigoal123
IP-штамп: frAWeMdOsBSXM
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  02.05.2022 10:46     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Use subheadings to บาคาร่าออนไลน์ break up the text and slot xo make clear paragraphs. 11hilo Write in a semi-informal สล็อต conversational style. 123GOAL And make sure there is organisation

The planning stage is nigoal Spend ten minutes brainstorming ideas ลิงค์รับทรัพย์ and choose the best พ ริ ต ตี้ เกม มิ่ง Think what your ราคา บอล subheadings might be Hotgraph reader know what to expect.
Участник оффлайн! nushra4
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  02.05.2022 14:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Thanks for an interesting blog. What else may I get that sort of info written in such a perfect approach? I have an undertaking that I am just now operating on, and I have been on the lookout for such info. Ethereum NFT
totoguy
IP-штамп: frWm4lfN9Gavc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  03.05.2022 05:18     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Found your post interesting to read. I can’t wait to see your post soon. Good Luck for the upcoming update. This article is really very interesting and effective. 스포츠토토사이트
totovi
IP-штамп: frWm4lfN9Gavc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  03.05.2022 05:18     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

This type of article that enlighted me all throughout and thanks for this.This going to be excitement and have fun to read. thank to it. check this out to for further exciting. 메이저토토
totoright
IP-штамп: frWm4lfN9Gavc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  03.05.2022 05:18     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

I wish I had someone like you next to me. Then I could have asked you a lot of advice. I'm so glad I got to know you through your post. Your writing helped me a lot. I think you and I will be able to exchange good opinions. Please visit my blog when you have time. 스포츠토토사이트
baccaratcommunity
IP-штамп: frDpn602qZAsw
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.06.2022 05:52     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Your writing is perfect and complete. baccaratcommunity However, I think it will be more wonderful if your post includes additional topics that I am thinking of. I have a lot of posts on my site similar to your topic. Would you like to visit once?
Участник оффлайн! humza
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.06.2022 19:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

I exactly got what you mean, thanks for posting. And, I am too much happy to find this website on the world of Google. <a href="http://www.randoexpert.com/">learn the facts here now</a>
best chegg alternatives
IP-штамп: frcvbYtbLe0Ew
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  13.07.2022 15:15     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Begun by Sal Khan in 2008, Khan Academy is https://socialapples.com/best-chegg-alternatives/ a US-based online non - beneficial instructive association which expects to make learning simple for understudies with the assistance of a bunch of online devices. The site has illustrations made as brief recordings, valuable practice activities, and even materials for instructors.
Guest
IP-штамп: froGyfM7ueoVc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  03.08.2022 15:46     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

We also offer original identity documents, including registered passports, diploma, driver's licenses and more from countries like: Australia, USA, Belgium, Brazil, Canada, Italy, Finland, France, Germany, Netherlands, Spain, United Kingdom. novelty passport online
bimam95
IP-штамп: froGyfM7ueoVc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  11.08.2022 10:59     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

Thanks for any other magnificent article. Where else may just anybody get that kind of information in such a perfect method of writing? I have a presentation next week, and I’m on the look for such information. penis vibrator
pushpa987
IP-штамп: frJ29JTBlItMA
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  11.08.2022 13:00     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

We’re a group of volunteers and starting a new scheme in our community. Your website provided us with valuable information to work on. You have done a formidable job and our entire community will be thankful to you. <a href="https://www.haobet77.com">jdb games</a>
pushpa987
IP-штамп: frJ29JTBlItMA
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  11.08.2022 13:01     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

We’re a group of volunteers and starting a new scheme in our community. Your website provided us with valuable information to work on. You have done a formidable job and our entire community will be thankful to you. jdb games
guest: amanda
IP-штамп: froGyfM7ueoVc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  15.08.2022 18:01     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

<a href="https://www.blackrooster-schools.co.uk">school badges</a> Black rooster schools provide different categories of school badges including shield &amp; bar badges, star &amp; round badges, flag badges, and many more. <a href="https://www.blackrooster-schools.co.uk">https://www.blackrooster-schools.co.uk</a>
guest: amanda
IP-штамп: frJ29JTBlItMA
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  15.08.2022 18:02     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

school badges Black rooster schools provide different categories of school badges including shield &amp; bar badges, star &amp; round badges, flag badges, and many more. https://www.blackrooster-schools.co.uk
pushpa
IP-штамп: froGyfM7ueoVc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.08.2022 10:34     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

What a fantabulous post this has been. Never seen this kind of useful post. I am grateful to you and expect more number of posts like these. Thank you very much. PLUS SIZE BODYSUITS FOR WOMEN
Участник оффлайн! marwotoo




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  28.05.2023 22:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

Find doctors near me. Doctor Schedules
s deviantart gitbook linktr reddit

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 07:49
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft