Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Нужен совет по индуцибильному промотору и мутагенезу
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Micio

Москва



 прочитанное сообщение 28.04.2018 10:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Есть задача вставить в геном мыши полноразмерный ген под индуцибильный промотор.
Прежде чем вставлять в геном мыши, ген нужно будет наработать при помощи ПЦР с геномной ДНК (размер продукта 18кб), затем ввести в середину гена однонуклеотидную замену, заменить промотор на индуцибельный и вставить в геном мыши.

Совет нужен по тому как лучше ввести однонуклеотидную замену в этот ген и как заменить промотор. Также нужен совет какой промотор лучше выбрать.

Заранее спасибо за любые советы, а также критику.
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 28.04.2018 10:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

18 кил с геномки- флаг вам в руки, к тому ж, сколько вы ошибок наловите, даже если поднимите, что вам за однонуклеотидной заменой гоняться, там еще куча всего появится, не говоря уж о всяких аллельных формах. Далее, как Вы читать 18 кил собираетесь? А как клонировать? Смешно
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 28.04.2018 12:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Задача какая научная у вас? Как вариант можно сделать миниген, удалив протяженные интроны.
Будет вероятно сильно меньше 18 кб, зависит от гена. Клонировать естественно по кускам и потом собирать.
Как заменить промотор? да очень просто. не клонировать в плазмиду нативный, а вместо него поставить индуцибельный.
какой индуцибельный взять? сложно сказать не знаю что у вас за ген, какие научныее цели и тп.
ну например доксициклин индуцибельный. мышам в воду добавлять доксициклин.
как вставить замену в ген? с помощью ПЦР-мутагенеза.

но честно говоря, если вы задаете такие вопросы - то стоит начать с азов генной инженерии и молекулярного клонирования.
Участник оффлайн! Micio

Москва



 прочитанное сообщение 28.04.2018 13:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

(ship @ 28.04.2018 13:04)
Ссылка на исходное сообщение  Задача какая научная у вас?  Как вариант можно сделать миниген, удалив протяженные интроны.
Будет вероятно сильно меньше 18 кб, зависит от гена. Клонировать естественно по кускам и потом собирать.
Как заменить промотор? да очень просто. не клонировать в плазмиду нативный, а вместо него поставить индуцибельный.
какой индуцибельный взять? сложно  сказать не знаю что у вас за ген, какие научныее цели и тп.
ну например доксициклин индуцибельный. мышам в воду добавлять доксициклин.
как вставить замену в ген? с помощью ПЦР-мутагенеза.

но честно говоря, если вы задаете такие вопросы - то стоит начать с азов генной инженерии и молекулярного клонирования.


Чтобы сделать миниген нужно знать какие интроны можно выкинуть?
ПЦР-мутагенез для 18 кб подойдет?
В принципе используют для вставки в геном полноразмерный ген или предпочитают ограничиться кДНК версией?
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 28.04.2018 18:31     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(Micio @ 28.04.2018 11:00)
Ссылка на исходное сообщение  Чтобы сделать миниген нужно знать какие интроны можно выкинуть?
ПЦР-мутагенез для 18 кб подойдет?
В принципе используют для вставки в геном полноразмерный ген или предпочитают ограничиться кДНК версией?

дизайн минигена индивидуален в каждом случае. обычно убирают самые протяженные интроны.

для 18 кб мутагенез?? еще раз повторю, разберитесь с азами молекулярной биологии, прежде чем ставить такие задачи.
мутагенез делать в небольшом фрагменте гена и потом собирать полную конструкцию.

можно полноразмерный , можно кДНК. для экспрессии трансгена очень часто важно наличие интронов. поэтому в идеале полноразмерный, но может и кДНК работать хорошо.
все индивидуально для каждого гена. не проверишь -не узнаешь.
Участник оффлайн! Micio

Москва



 прочитанное сообщение 28.04.2018 23:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(ship @ 28.04.2018 19:31)
Ссылка на исходное сообщение  дизайн минигена индивидуален в каждом случае. обычно убирают самые протяженные интроны.

для 18 кб мутагенез??  еще раз повторю, разберитесь с азами молекулярной биологии, прежде чем ставить такие задачи.
мутагенез делать в небольшом фрагменте гена и потом собирать полную конструкцию.

можно полноразмерный , можно кДНК. для экспрессии трансгена очень часто важно наличие интронов. поэтому в идеале полноразмерный, но может и кДНК работать хорошо.
все индивидуально для каждого гена. не проверишь -не узнаешь.


спасибо за ответы, мутагенез 18 кб и сборка гена все таки не азы молекулярной биологии.
Буду благодарен за качественное пособие на эту тему (сборки больших генов, минигенов). Мутагенез на небольшом фрагменте я представляю как делать.
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 29.04.2018 00:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(Micio @ 28.04.2018 21:14)
Ссылка на исходное сообщение  Мутагенез на небольшом фрагменте я представляю как делать.

так и надо делать на небольшом. вы же хотите 1 нуклеотид заменить. а вы говорите о 18 кб.

пособий нет, мы пока свои результаты не опубликовали))
сборка гена - ну ПЦР по кускам, секвеникруете что ПЦРили, выбираете сайты рестрикции геномные и по ним собираете.

при сборке минигена главное проверить паттерн сплайсинга, прежде чем трансгенов делать.
надо убедится что удаление интронов не влияет на правильность сплайсинга.

если задача экспрессировать мутантнй белок - то можно начать с кДНК в плазмиде с каким нибудь гетерологичным интроном, чтобы сплайсинг как факт шел.
типа pCAG вектор
Участник оффлайн! R-J-Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 04.05.2018 13:53     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

да, очень смешной интрон, ни прочесть, ни амплифицировать
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 17:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

https://www.uptrennd.com/post-detail/hints-...-watch~ODY3MDU2
https://anotepad.com/note/read/mqg8p5jm
https://www.crokes.com/replicarolexwatches/profile/
https://ko-fi.com/post/Watches-Shopping-Gui...-Watc-E1E13PZV9
https://www.merchantcircle.com/blogs/replic...x-Watch/1966540
https://www.nairaland.com/6427528/watches-s...de-finding-fake
https://www.vingle.net/posts/3587193
https://fortunetelleroracle.com/sport/replica-watches-280478
https://www.goodreads.com/story/show/132736...ake-rolex-watch
https://www.diigo.com/item/note/85twz/phwr?...2395edb2dac07ea
https://github.com/ReplicawatchesUK/Replica...ake-Rolex-Watch
https://www.reddit.com/user/Bestreplicawatc...ke_rolex_watch/
https://slashdot.org/submission/13306958/wa...ake-rolex-watch
https://www.wattpad.com/1030107359-replica-...guide-finding-a
https://www.instructables.com/member/Fakero...licPreview=true
Участник оффлайн! watchesonline89
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.12.2022 11:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

https://telegra.ph/Advantages-Of-Replica-Watches-08-03
https://issuu.com/home/published/_6_.docx
https://www.gta5-mods.com/paintjobs/watchesswiss
https://omegawatches89.onweb.it/
https://padlet.com/omegawatches89/je3eq9ol3xzmb9bp
https://www.pinterest.com/omegawatches89/
https://knowyourmeme.com/users/omegawatches89
https://bitcointalk.org/index.php?topic=76487.new#new
https://omegawatches89.blog.hu/
https://knowyourmeme.com/forums/general/top...f-so-why?page=1
https://penzu.com/p/c6f21f5d
https://www.reddit.com/user/omegawatches89/...are_so_popular/
https://www.vingle.net/posts/4647076
https://penzu.com/p/c68b65cc
https://diigo.com/0pige9

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.04.24 16:41
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft