Rambler's Top100
 		Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Real time PCR
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

 
 Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! david
Постоянный участник
Montreal, Canada
 прочитанное сообщение 20.12.2003 17:24     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
Hе могу понять, заказал праимеры, которые уже использовались, со статьи, сделал ПЦР все работает, никакои неспецифичности, а Real Time гонит weep.gif


[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн! david
Постоянный участник
Montreal, Canada
 прочитанное сообщение 20.12.2003 17:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование
вернее, я могу понят, почему иногда ПЦр работает а real time нет, но вопрос, почему в случае когда я отчетливо вижу бeнд на геле то Ct в real time 40??? On вроде бы чувствительней...

[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн! david
Постоянный участник
Montreal, Canada
 прочитанное сообщение 21.12.2003 12:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование
ну и что, так и будем молчать??? может подскажите?

[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн! Gobochka
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 21.12.2003 22:04     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование
a chto znachit real time "gonit"? voobc'e nikakogo producta net ili primer dimer slishkom bol'shoj i produkt poqtomu ne vidno.
a voobc'e-to dlya kazhdoj mashinki real time est' svoya programma dlya konstruirovaniya prajmerov. vy svoi prajmery konstruirovat' ne pytalis'?
izvinite, glyuchit tut translit segodnya.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 22.12.2003 10:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование
Может флуорофор сдох
Участник оффлайн! jalex
Постоянный участник
 прочитанное сообщение 22.12.2003 12:27     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование
ПЦР в реальном времени ставите с SYBR GREEN или с зондом? Если с SG, то какой длины фрагмент? Если больше 250-300 н.о., то меняйте праймеры, чтобы фрагмент был короче. SG - интеркалятор и более длинные фрагменты хуже денатурируют даже при 95оС.
Участник оффлайн! david
Постоянный участник
Montreal, Canada
 прочитанное сообщение 22.12.2003 12:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование
ну так вот все по порядку:
1. Работаю с SYBR green
2. Флуорофор не сдох, потому как 18s , контроль работает,
3. Гонит, значит не работает, Ct=40 ето значит нет продукта, в смысле, всего 40 циклов и никакого продукта, а 18s, например уже на 12 цикле, а то еше и раньше начинает подьем.
4. бeнды у меня не больше 200. (100 and 160)

[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн! david
Постоянный участник
Montreal, Canada
 прочитанное сообщение 22.12.2003 12:50     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование
Автор - Гобочка:
а что значит реал тиме \"гонит\"? вообще никакого продуцта нет или пример димер слишком большой и продукт поэтому не видно.
а вообще-то для каждой машинки реал тиме есть своя программа для конструирования праймеров. вы свои праймеры конструировать не пытались?
извините, глючит тут транслит сегодня.
Вот-вот, то же самое мне посоветовала агент с фирмы , но я же брал праимеры со статьи где уже делали реал тиме..ну я вернулся к тому же да и условия те же сделал, а праимеры новые я уже получил, сегодня буду ставить, но вот те вот праимеры меня мучают, почему же они не работали frown.gif

[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн! Sergey S
Участник
Москва
 прочитанное сообщение 22.12.2003 17:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование
А то. что Вы на форезе видите - это. я так понимаю, после обычного PCR. Попробуйте поставить то же самое, но с Вашим китом для RT - его не так уж много уйдёт на это smile.gif Поварьируйте условия - например, концентрация ДНК (кДНК?) - развелите раз в сто - а то у Вас как-то её там много (судя по18s)
Участник оффлайн! david
Постоянный участник
Montreal, Canada
 прочитанное сообщение 22.12.2003 23:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование
Автор - Сергей С:
А то. что Вы на форезе видите - это. я так понимаю, после обычного ПЦР. Попробуйте поставить то же самое, но с Вашим китом для РТ - его не так уж много уйдёт на это  smile.gif   Поварьируйте условия - например, концентрация ДНК (кДНК?) - развелите раз в сто - а то у Вас как-то её там много (судя по18с)
С разведением понятно, концентрация cДНА у меня где-то 200нг идет на реакцию, ето конечно много, но вопрос в другом.
уточните пожалуйста, что вы имели ввиду с поставить тоже самое но с китом RT??

[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 23.12.2003 14:53     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование
Так шо конкретно имелось ввиду: ПЦР работает, дбавляем в ТУ ЖЕ ПЦР-смесь SYBR green и оно уже не работает, так? Или как?
Если да, то ты магний забыл. SYBR ингибирует реакцию, надо много магния.
18sРНК - тонна или две - плохой контроль.
Участник оффлайн! Sergey S
Участник
Москва
 прочитанное сообщение 23.12.2003 16:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование
Про магний, кстати, хороший момент smile.gif А поставить то же самое, но с китом я имел в виду следующее (может, чего не так понял, но сужу по тому, как сам делал): когда я, например, ставил обычный ПЦР - все реактивы заказывал по отдельности - всё было нормально. Пытаюсь поставить RT с Applied'овским китом - ничего, а на форезе после обычного PCR сигнал такой, что можно позавидовать smile.gif Так я условия оптимизировал на обычном амплификаторе (без оптического блока), но с китом - не шло, пока не развёл (концентрация ДНК была большая).
Участник оффлайн! david
Постоянный участник
Montreal, Canada
 прочитанное сообщение 24.12.2003 01:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование
Автор - &лт;мимо шел&гт;:
Так шо конкретно имелось ввиду: ПЦР работает, дбавляем в ТУ ЖЕ ПЦР-смесь СЫБР греен и оно уже не работает, так? Или как?
Если да, то ты магний забыл. СЫБР ингибирует реакцию, надо много магния.
18сРНК - тонна или две - плохой контроль.
нет не так)))делаю ПЦР независимо от Реал тиме с одним и тем же цДНА.
Состав реакции реал тиме тако: цДНА, примеры, сыбр греен, вода.
а пцр я обычно делаю с реады микс, и все красиво и хорошо А почему 18с плохой контроль? уточните
[Текст переведён с транслита]

[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн! david
Постоянный участник
Montreal, Canada
 прочитанное сообщение 26.12.2003 10:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование
а скол'ко надо брат' cДНА на реакцию Real time, 25-50 нг достаточно? какое минимальное количетсво при котором real time может работать?


[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн! Sergey S
Участник
Москва
 прочитанное сообщение 26.12.2003 14:50     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование
Всё в том же ките рекоммендуют брать от 1 до 10 ng of cDNA для оптимизации концентации праймеров. А ещё можно посмотреть уже рекоммеднованный здесь сайт http://www.wzw.tum.de/gene-quantification/ Может, чего найдёте ценного.
Участник оффлайн! Flormar Cosmetics
 прочитанное сообщение Сообщение на английском  09.12.2022 19:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование
Big N Bold mascara is the ultimate eye mascara that is not only going to enhance your eye makeup but your personality as well. Being bold is one of the most important qualities that an individual can show off to the world. Use the Flormar's Big N Bold Mascara to make your eyes look bold and beautiful.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики 		Назначение кнопок:
   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -  
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.04.24 04:40
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024  IPS, Inc.