Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Трансфекция фибробластов
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Shushashu




 прочитанное сообщение 26.05.2017 15:28     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
Важно!
Добрый день, прошу вашей помощи
Проводила получение фибробласт мышиных эмбрионов, после чего красила Романовским-Гимза, было все нормально (рисунок приложен)
Потом решила провести трансфекцию кальций-фосфатным методом и полученная картинка (тоже приложена) не очень радует, что с ними могло случиться?
Встраивала плазмиду рEGFP-N3, несущую ген gfp, при 470 светится, все хорошо, но клетки выглядят не очень здоровыми...
Подскажите, пожалуйста, кривые руки или стечение обстоятельств и кривые руки?

Картинки:
2.jpg - кликните, чтобы открыть увеличенную картинку
2.jpg — (1.29мб)   

1.jpg - кликните, чтобы открыть увеличенную картинку
1.jpg — (1.8мб)   

Участник оффлайн! Леонид В
Постоянный участник
Квебек



 прочитанное сообщение 26.05.2017 16:53     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

плотность нижней культуры представляется дня этак три как запредельной

Всего благодарностей: 2Поблагодарили (2): Дядя ФАКСер, LMP
Участник оффлайн! Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum



 прочитанное сообщение 26.05.2017 16:55     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Переношу в "общие вопросы", бо не по теме раздела.

Топикстартеры! Данный раздел форума предназначен для обсуждения вопросов связанных с методами клеточных технологий (сепарация клеток, криопрезервация, клеточная терапия, инструментальные методы в клеточной биологии- как то микроскопия, проточная цитометрия и т.п.) а никак не базовых методик. Поэтому, с вопросами вида "где достать протокол для ficoll- центрифугирования", "сколько пирувата добавлять в среду" или "контаминация в среде выпуска 19хх года"- пожалуйста, в раздел "Молекулярная и клеточная биология".
Участник оффлайн! IIM
Постоянный участник
Heidelberg



 прочитанное сообщение 26.05.2017 17:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

сколько часов роста культуры между первым и вторым снимком?
Участник оффлайн! Shushashu




 прочитанное сообщение 26.05.2017 19:47     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(IIM @ 26.05.2017 18:00)
Ссылка на исходное сообщение  сколько часов роста культуры между первым и вторым снимком?

Первая культура 24 часовая (первый снимок), с нее произведен пересев (второй снимок). На втором снимке культуре 72 часа (после трансформации прошло 48 часов с одной заменой среды через 24 часа)
Могла ли культура изменить так морфологию из-за трансфекции?
Участник оффлайн! Shushashu




 прочитанное сообщение 26.05.2017 19:48     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(Дядя ФАКСер @ 26.05.2017 17:55)
Ссылка на исходное сообщение  Переношу в "общие вопросы", бо не по теме раздела.

Прошу прощения, в следующий раз буду внимательнее
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.05.2017 21:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Попробую уточнить:
на момент трансфекции:
- каков был процент конфлюентности?
* Если вам надо наблюдать эффект в течении 72ч, я бы больше 30 не делал.
- антибиотики были при трансфекции?
* они вляют
- сыворотку меняли?
* некоторые ставят оптимем, и клеткам эта перемена не очень нравится
Участник оффлайн! Shushashu




 прочитанное сообщение 27.05.2017 12:10     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

(LMP @ 26.05.2017 22:39)
Ссылка на исходное сообщение  Попробую уточнить:
на момент трансфекции:
- каков был процент конфлюентности?
* Если вам надо наблюдать эффект в течении 72ч, я бы больше 30 не делал.
- антибиотики были при трансфекции?
* они вляют
- сыворотку меняли?
* некоторые ставят оптимем, и клеткам эта перемена не очень нравится


Процент конфлюентности был 80, антибиотики не добавляла, так как не вела отбор на селективной среде, сыворотку меняла
72 часа, потому что до трансфекции 24 часа и после неё до анализа еще 48 часов.
Меньше 48 не получается, ибо тогда сама трансфекция не происходит
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 27.05.2017 12:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Ну вот, клеток поменьше раза в 2, на старте, и FBS можно 0,5% сделать. Они и не перерастут и считать их проще будет
Участник оффлайн! Sergeant
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 27.05.2017 13:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

1. Выглядит как типичный апоптоз
2. Что бы разобраться нужны контроли.
3. Взять другую плазмиду и лучше другой протокол выделения
4. Пару альтернативных протоколов трансфекции. кальцый-фосфат очень травматичный для многих типов клеток. Фюджен или Амакса на порядки лучше (но естественно не дешевле)
5. Вирусы тоже хороши. Например ленти.

PS 1' Поставить тест на апоптоз smile.gif
If it looks like a duck, swims like a duck and quacks like a duck, then it probably is a duck.
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 28.05.2017 00:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

ну стоп, какие еще лентивирусы.
Амакса зачем? это же порация, думаете прибор есть?
может пусть лучше шушашу расскажет о цели своей работы? тогда и можно будет чтото конкретное посоветовать.

фибробласты растут как звери и , как было сказано выше, тут дикий перерост.
плюс, невнятно описано что и как рассевали и культивировали.
от трансефкции pEGFP никакого апоптоза или токсичности быть не может.
Участник оффлайн! Леонид В
Постоянный участник
Квебек



 прочитанное сообщение 28.05.2017 09:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

(LMP @ 27.05.2017 05:13)
Ссылка на исходное сообщение  Ну вот, клеток поменьше раза в 2, на старте, и FBS можно 0,5% сделать. Они и не перерастут и считать их проще будет

кальций-фосфатная трансфекция с клетками в два раза меньше?
это сколько ж тогда нужно ДНК?

подобные методы трансфекции требуют высокой конфлюэнтности, но потом надо с ней бороться: рассевать через несколько часов, добавлять мало сыворотки, снижать температуру ... словом танцы с бубном. На любителя.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Shushashu
Участник оффлайн! Shushashu




 прочитанное сообщение 30.05.2017 08:13     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

Всем спасибо за обсуждение!
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  23.11.2021 15:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

https://replicawatches24.tumblr.com/post/64...lica-watches-uk
https://ello.co/replicawatchesuk/post/ubut9ig9g4glx-q6nyphka
https://www.evernote.com/shard/s451/client/...%2BWatches%2BUK
https://www.bloglovin.com/@rolexrelicawatch...replica-watches
https://www.designspiration.com/watcheshutuk/saves/
https://write.as/fakerolexwatches/hints-to-...lica-watches-uk
https://www.dailystrength.org/journals/hint...lica-watches-uk
https://issuu.com/replicawatchesuk/docs/dif...he_replica_watc
https://www.keepandshare.com/discuss2/5601/...lica-watches-uk
https://penzu.com/public/9e250377
https://bestreplicawatc.livejournal.com/336.html
https://www.pearltrees.com/replicawatchesuk/item349627941
https://www.intensedebate.com/people/watches24
https://anonfiles.com/N039Qf66q9/Guide_On_H...atch_Online_pdf
Участник оффлайн! watchesonline89
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  05.01.2023 12:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

https://62e8ce2ae5d50.site123.me/
https://www.vingle.net/posts/4647029
https://eatsleepride.com/c/383272
https://anotepad.com/notes/prkpsawt
https://demo.wowonder.com/1665548793521727_195426
https://linktr.ee/omegawatches89
https://omegawatches89.gumroad.com/p/reason...replica-watches
https://omegawatches93.mystrikingly.com/
https://writer.zoho.com/writer/open/k3enw04...fea14e95e0ee806
https://www.edocr.com/v/rakkz4oq/omegawatch...-replica-online
https://diigo.com/0pigfx
https://62e8ce2ae5d50.site123.me/blog/reaso...replica-watches
https://www.worldranklist.com/preview/bookm...s-Online-Store-
https://omegawatches89-95.webselfsite.net/contact
https://form.jotform.com/223252982096057

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 13:06
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft