Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
watchesbiz | Отправлен 11.11.2021 16:39 |
Настя14145 | Отправлен 18.04.2019 14:55 |
(semi @ 18.04.2019 15:53) Ну значит, вы на правильном пути. Поднимите температуру до 58, как выше советуют. Шмер-то исчез? Или вы после здешней ругани нам картинок больше не предъявите? Уже в работе. Шмеров почти не было, Пока идет амплификация, после фореза покажу фото. Премного благодарна за поддержку! |
|
semi | Отправлен 18.04.2019 14:53 |
(Настя14145 @ 18.04.2019 12:25) Да, развела праймеры, снизила концентрацию магния и ДНК взяла в разведении и снизила количество Taq. Также попробовала снизить температуру отжига до 52 и 48, и убрала градиент. При 52 проявились еле заметные бэнды на нужной длине, на 48, к сожалению, ничего. Ну значит, вы на правильном пути. Поднимите температуру до 58, как выше советуют. Шмер-то исчез? Или вы после здешней ругани нам картинок больше не предъявите? |
|
Настя14145 | Отправлен 18.04.2019 11:25 |
(semi @ 18.04.2019 12:19) Да, развела праймеры, снизила концентрацию магния и ДНК взяла в разведении и снизила количество Taq. Также попробовала снизить температуру отжига до 52 и 48, и убрала градиент. При 52 проявились еле заметные бэнды на нужной длине, на 48, к сожалению, ничего. |
|
semi | Отправлен 18.04.2019 11:19 |
(Настя14145 @ 18.04.2019 12:05) А что-нибудь уже пробовали из множества советов бывалых? |
|
Настя14145 | Отправлен 18.04.2019 11:05 |
(kb1 @ 18.04.2019 01:56) Добрый день. Хорошо, попробую, спасибо за совет! |
|
kb1 | Отправлен 18.04.2019 00:56 |
попробуйте режим 94 С - 20 сек 58 С -20 сек 70 С - 20 сек магний до 2 мМ |
|
-Ъ- | Отправлен 16.04.2019 14:50 |
(kakakaka @ 16.04.2019 15:41) нет, сказала МЕЛКИЙ, а не КРУПНЫЙ но рогатый скот. |
|
Настя14145 | Отправлен 16.04.2019 14:49 |
(-Ъ- @ 16.04.2019 15:48) Вам остается попробовать ПЦР реактивы от другого производителя. Других советов чтобы Вы смогли "корректировать и калибровать параметры ПЦР" у меня лично нет. ПЦР у Вас не идет, контролей нет никаких, т.е. говорить не о чем, к сожалению. Я Вас поняла. Премного благодарна за ответы и советы. С уважением. |
|
-Ъ- | Отправлен 16.04.2019 14:48 |
Вам остается попробовать ПЦР реактивы от другого производителя. Других советов чтобы Вы смогли "корректировать и калибровать параметры ПЦР" у меня лично нет. ПЦР у Вас не идет, контролей нет никаких, т.е. говорить не о чем, к сожалению. |
|
Посмотреть тему (откроется в новом окне) | |