Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Лаба для работы с антителами, что нужно? -- оборудование, схема процесса --
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Asgard




 прочитанное сообщение 30.05.2018 09:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Ув. формучане, помогите разобраться с процессом и оборудованием для работы с антителами.

Задача такая - есть референсное антитело с известной последовательностью.

Нужно наработать это антитело, провести аланиновое сканирование его cdr областей и наиболее перспективные варианты клонировать в гибридомы для дальнейшей наработки и изучения.

Может кто вкратце описать основные стадии и необходимое для этого оборудование. Или ткнуть меня туда, где об этом написано.

Лаборатория планируется с нуля.

Заранее спасибо.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 13:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Для начала это референсное антитело где-то на бумаге, или в пробирке, или есть продуцент.

А вообще вам понадобится генноинженерная лаборатория это:
бактериальный бокс(ы)
термостаты с качалкой и без для выращивания культур бактерий
Цетрифуги настольные и нет с охлаждением и нет до 15000g
Твердотельные термостаты(лучше с охлаждением) под микропробирки.
Термоциклер для ПЦР(ПЦР бокс)
комплект оборудования для горизонтального электрофореза в агарозе вместе с системой визуализации
Спектрофотометр в том числе и микрообъемный.

Так же вам понадобится культурально клеточное оборудование.
Клеточный бокс
СО2-инкубатор
цитоцентрифуга
Инвертированный микроскоп
Дьюар с жидким азотом и широким горлом(по другому называется криохранилище)

Так же вам понадобится холодильное оборудование от +4 до - 80оС весовое оборудование, рН-метры, магнитные мешалки, качалки и тп Наборы автоматических микропипеток(дозаторов) лаб. столы и шкафы, вытяжные шкафы складские помещения в том числе и с холодильниками.

А выглядит это примерно так с помощью предзаказанных олигонуклеотидов с соответствующими заменами на аланин делается библитека векторов(например фаговая) или экспрессирующая с соответствующими мутантами. Потом идет получение продуцетов или фагов с соответствующих пептидами. А вот потом идет скрининг и от того на ЧТО скрининг и какие методы будут использованный для скрининга зависит дополнительное оборудование, которое может включать.

Белково-химическое оборудования начиная от хроматографии и электрофореза/иммуноблота в том числе и двумерного до ИФА(Который все равно понадобится для отбора целевых клонов)
и заканчивая всяким другим оборудованием флуориметрами, проточными цитометрами, поверхностным плазмонным резонансом и масспектрометрами тд и тп
Участник оффлайн! Asgard




 прочитанное сообщение 30.05.2018 14:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

MMM, спасибо за подробный ответ!
А бюджет примерный сможете озвучить? хотя бы порядок цифр.

P.S. Референсное антитело на бумаге.
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 17:53     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Лаборатория для одного антитела....
Круть крутая....
приблизительная цена оборудования ( без учета расходников которые тоже не дешевы...
- инкубатор от от 2,5-10К $ ламинар примерно в ту же цену, центрифуги от 1К до 4К каждая.
Микроскоп самый простенький 1,5К
Дюар -350
Термостат с качалкой для бактером от 3.5К.
цыклер от 1К
ридер для ИФА от 5К
мелкое оборудование:
Пипетки автоматы сет 1.5-2К
для електрофореза ДНК и белков от 4.5К
Холодильники ну тут можно обойтись и бытовыми , но нужны на +4, -20 и -40.
pH-метр, мешалки, качалки все оптом где-то 5-8К
страшное оборудование типа масспека и еспиар котоое МММ в конце написал совершенно не обязательно есгть сервисные компании которые за денежку сделают вам сие анализы.
Итого по минимуму 30.5К бакинских рублей.
как говорил выше без расходников на них если с нуля примерно такая же сумма, может чуть меньше.
Едем дальше какие антитела собираитесь получать очеловеченные или мышиные ????
в основе планируите полноразмерное антитело или только фрагмент???
остальное после ответов....
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 18:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Порядка миллионов евро.
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 18:19     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

МММ окстись ....
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 18:23     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

если все включая системы очистки, масспек и еспиас, проточник, флуориметры...
тогда даже больше ляма получится....
по минимуму можно обойтись 70-100К....
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 18:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Ну да если термоциклер за килобакс брать то да. а если за 5, то как раз лям и выйдет. Кстати совсем забыл про парочку дистиллеров и миллипоровскую деионизованную воду.

Сообщение было отредактировано MMM - 30.05.2018 18:59
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 20:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Я бы начинал с вентиляции. Думал, что только инженеры в краю родных осинок положили на обеспечение средами. Оказывается и очень ученые сотрудники тоже считают это буржуазным предрассудком....
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 20:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

А то у нас как всегда зафигачат культуральное оборудование с массспеками в затхлую конуру, а потом удивляются, почему вместо биотехнолорических прорывов на радость владимиру владимировиыу мы получили мандавошек размером с таракана.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Fritz
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 22:59     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(vb @ 30.05.2018 10:09)
Ссылка на исходное сообщение  А то у нас как всегда зафигачат культуральное оборудование с массспеками в затхлую конуру, а потом удивляются, почему вместо биотехнолорических прорывов на радость владимиру владимировиыу мы получили мандавошек размером с таракана.

Желчь унд зависть детектед....
))))
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 31.05.2018 06:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

(Tom1 @ 30.05.2018 20:59)
Ссылка на исходное сообщение  Желчь унд зависть детектед....
))))

Я тебя умоляю. Я так долго все это наблюдаю, что почти смирился и постиг дзен. Но иногда рецидивы надежды на логику и здравый смысл бывают.
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 31.05.2018 14:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

(Asgard @ 30.05.2018 14:36)
Ссылка на исходное сообщение  MMM, спасибо за подробный ответ!
А бюджет примерный сможете озвучить? хотя бы порядок цифр.

P.S. Референсное антитело на бумаге.

Сотни миллионов рублей и 5-7 лет времени, из которых первые 1-2 года вы будете все заниматься ТОЛЬКО пусконаладкой того, что нужно.

Вам ещё предстоит построить настоящий стерильный и моющийся клеточный блок в здании обязательно с виварием, желательно - кроличьим, а не только крысо-мышиным. Если вивария нет - прибавьте еще 3-5 лет на его постройку, оборудование и сертификацию, бюджет 1,5-2 млрд рублей в зависимости от жадности подрядчиков.
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 31.05.2018 14:42     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

(vb @ 30.05.2018 20:09)
Ссылка на исходное сообщение  А то у нас как всегда зафигачат культуральное оборудование с массспеками в затхлую конуру, а потом удивляются, почему вместо биотехнолорических прорывов на радость владимиру владимировиыу мы получили мандавошек размером с таракана.

Да никто уже не удивляется, все привыкли. lol.gif
А некоторые посредники - так даже и рады. tongue.gif
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 01.06.2018 16:02     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

(NMR-guy @ 31.05.2018 04:40)
Ссылка на исходное сообщение  Сотни миллионов рублей и 5-7 лет времени, из которых первые 1-2 года вы будете все заниматься ТОЛЬКО пусконаладкой того, что нужно.

Вам ещё предстоит построить настоящий стерильный и моющийся клеточный блок в здании обязательно с виварием, желательно - кроличьим, а не только крысо-мышиным. Если вивария нет - прибавьте еще 3-5 лет на его постройку, оборудование и сертификацию, бюджет 1,5-2 млрд рублей в зависимости от жадности подрядчиков.

А он исчо и ябеда...
футакимбыть....
Участник оффлайн! CowDoc
Постоянный участник
Middle East



 прочитанное сообщение 02.06.2018 10:19     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

Вопрос, вам как, временный бюджет слить надо или реальный Проект запустить?
В РФ много контор, кто серьезно работает, по международным стандартам. Все они ВСЕ!!! охреневшие и жадные, желающие минимум 200% прибыли получить, но работать нужно с ними, давить их и за жабры подвешивать.
Кто сможет пройти и предоставить полную бюрократию от/до по оборудованию/помещениям URS-FAT-SAT (URS-->FS-->DS-->IQ-->OQ-->PQ), с тем и работать.
Из последних, с кем работал и остался доволен, наши+французы:
Biotechno Group, 117587, Moscow, Dnepropetrovskaya, 2, +7 (495) 925-3453, +7 (495) 995-0565.
Да, и не слушайте всех этих теоретиков, многое зависит от объема конечного выпуска, если есть деньги и площади, то полгода согласование Проекта (вы должны донести свои идеи инженерам), столько же строительство и упаковка/наладка оборудования, запуск/отработка идет паралельно в пилотной лаборатории.
А то вам сейчас сказок по нарасказываю .... виварии для кроликов строить надо на первом этапе практически девелопмента )))

Сообщение было отредактировано CowDoc - 02.06.2018 10:23
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.06.2018 11:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

CowDoc! А вы уверены, что автору нужно пароизводство, а не ресерч?
Участник оффлайн! CowDoc
Постоянный участник
Middle East



 прочитанное сообщение 02.06.2018 13:14     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

2MMM
А для этого и делается изначально URS+FS, и проектировщику будет понятно, очередной шизик, или серьезные намерения.
Вы знаете, сколько встречается в последнее десятелетие:"Деньги есть, ты мне построй, а дальше уже само как-то!"
Участник оффлайн! Asgard




 прочитанное сообщение 05.06.2018 17:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

CowDoc
Нужен реальный проект.
Есть виварии для кроликов, в другом месте.

Tom1
Ну почему же одного антитела. Начинать нужно с одного, а дальше будут другие.


Главная задача - это проверить активность полученных вариантов антитела. И соответственно наладить все методики, чтобы можно было проверять другие антитела уже более потоково.
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.06.2018 22:33     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

(Asgard @ 05.06.2018 07:13)
Ссылка на исходное сообщение  CowDoc
Нужен реальный проект.
Есть виварии для кроликов, в другом месте.

Tom1
Ну почему же одного антитела. Начинать нужно с одного, а дальше будут другие.


Главная задача - это проверить активность полученных вариантов антитела. И соответственно наладить все методики, чтобы можно было проверять другие антитела уже более потоково.

определитесь нужны моноклоны или обойдетесь поликлонами?????
Участник оффлайн! Asgard




 прочитанное сообщение 06.06.2018 12:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

Нужны моноклональные, конечно. Сразу не написал.
Участник оффлайн! trickortip




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  23.07.2019 13:42     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

Thanks for sharing this information. I really like your blog post very much. You have really shared a informative and interesting blog post with people. https://www.trickortip.com

Это СПАМ!
Это сообщение — спам.
Nett

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Организация работы группы/лаборатории · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 07.12.19 12:45
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft