molbiol.ru -> Лаба для работы с антителами, что нужно?

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология > Организация работы группы/лаборатории

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Лаба для работы с антителами, что нужно? -- оборудование, схема процесса --
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Asgard

30.05.2018 09:58

URL #1

Ув. формучане, помогите разобраться с процессом и оборудованием для работы с антителами.

Задача такая - есть референсное антитело с известной последовательностью.

Нужно наработать это антитело, провести аланиновое сканирование его cdr областей и наиболее перспективные варианты клонировать в гибридомы для дальнейшей наработки и изучения.

Может кто вкратце описать основные стадии и необходимое для этого оборудование. Или ткнуть меня туда, где об этом написано.

Лаборатория планируется с нуля.

Заранее спасибо.

MMM
Постоянный участник

30.05.2018 13:13

URL #2

Для начала это референсное антитело где-то на бумаге, или в пробирке, или есть продуцент.

А вообще вам понадобится генноинженерная лаборатория это:
бактериальный бокс(ы)
термостаты с качалкой и без для выращивания культур бактерий
Цетрифуги настольные и нет с охлаждением и нет до 15000g
Твердотельные термостаты(лучше с охлаждением) под микропробирки.
Термоциклер для ПЦР(ПЦР бокс)
комплект оборудования для горизонтального электрофореза в агарозе вместе с системой визуализации
Спектрофотометр в том числе и микрообъемный.

Так же вам понадобится культурально клеточное оборудование.
Клеточный бокс
СО2-инкубатор
цитоцентрифуга
Инвертированный микроскоп
Дьюар с жидким азотом и широким горлом(по другому называется криохранилище)

Так же вам понадобится холодильное оборудование от +4 до - 80^оС весовое оборудование, рН-метры, магнитные мешалки, качалки и тп Наборы автоматических микропипеток(дозаторов) лаб. столы и шкафы, вытяжные шкафы складские помещения в том числе и с холодильниками.

А выглядит это примерно так с помощью предзаказанных олигонуклеотидов с соответствующими заменами на аланин делается библитека векторов(например фаговая) или экспрессирующая с соответствующими мутантами. Потом идет получение продуцетов или фагов с соответствующих пептидами. А вот потом идет скрининг и от того на ЧТО скрининг и какие методы будут использованный для скрининга зависит дополнительное оборудование, которое может включать.

Белково-химическое оборудования начиная от хроматографии и электрофореза/иммуноблота в том числе и двумерного до ИФА(Который все равно понадобится для отбора целевых клонов)
и заканчивая всяким другим оборудованием флуориметрами, проточными цитометрами, поверхностным плазмонным резонансом и масспектрометрами тд и тп

Asgard

30.05.2018 14:36

URL #3

MMM, спасибо за подробный ответ!
А бюджет примерный сможете озвучить? хотя бы порядок цифр.

P.S. Референсное антитело на бумаге.

Tom1
Постоянный участник

30.05.2018 17:53

URL #4

Лаборатория для одного антитела....
Круть крутая....
приблизительная цена оборудования ( без учета расходников которые тоже не дешевы...
- инкубатор от от 2,5-10К $ ламинар примерно в ту же цену, центрифуги от 1К до 4К каждая.
Микроскоп самый простенький 1,5К
Дюар -350
Термостат с качалкой для бактером от 3.5К.
цыклер от 1К
ридер для ИФА от 5К
мелкое оборудование:
Пипетки автоматы сет 1.5-2К
для електрофореза ДНК и белков от 4.5К
Холодильники ну тут можно обойтись и бытовыми , но нужны на +4, -20 и -40.
pH-метр, мешалки, качалки все оптом где-то 5-8К
страшное оборудование типа масспека и еспиар котоое МММ в конце написал совершенно не обязательно есгть сервисные компании которые за денежку сделают вам сие анализы.
Итого по минимуму 30.5К бакинских рублей.
как говорил выше без расходников на них если с нуля примерно такая же сумма, может чуть меньше.
Едем дальше какие антитела собираитесь получать очеловеченные или мышиные ????
в основе планируите полноразмерное антитело или только фрагмент???
остальное после ответов....

MMM
Постоянный участник

30.05.2018 18:11

URL #5

Порядка миллионов евро.

Tom1
Постоянный участник

30.05.2018 18:19

URL #6

МММ окстись ....

Tom1
Постоянный участник

30.05.2018 18:23

URL #7

если все включая системы очистки, масспек и еспиас, проточник, флуориметры...
тогда даже больше ляма получится....
по минимуму можно обойтись 70-100К....

MMM
Постоянный участник

30.05.2018 18:58

URL #8

Ну да если термоциклер за килобакс брать то да. а если за 5, то как раз лям и выйдет. Кстати совсем забыл про парочку дистиллеров и миллипоровскую деионизованную воду.

Сообщение было отредактировано MMM - 30.05.2018 18:59

vb
Постоянный участник

30.05.2018 20:07

URL #9

Я бы начинал с вентиляции. Думал, что только инженеры в краю родных осинок положили на обеспечение средами. Оказывается и очень ученые сотрудники тоже считают это буржуазным предрассудком....

vb
Постоянный участник

30.05.2018 20:09

URL #10

А то у нас как всегда зафигачат культуральное оборудование с массспеками в затхлую конуру, а потом удивляются, почему вместо биотехнолорических прорывов на радость владимиру владимировиыу мы получили мандавошек размером с таракана.

Поблагодарили (1): Fritz

Tom1
Постоянный участник

30.05.2018 22:59

URL #11

(vb @ 30.05.2018 10:09)

Желчь унд зависть детектед....
))))

vb
Постоянный участник

31.05.2018 06:55

URL #12

(Tom1 @ 30.05.2018 20:59)

Желчь унд зависть детектед....
))))

Я тебя умоляю. Я так долго все это наблюдаю, что почти смирился и постиг дзен. Но иногда рецидивы надежды на логику и здравый смысл бывают.

NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни

31.05.2018 14:40

URL #13

(Asgard @ 30.05.2018 14:36)

Сотни миллионов рублей и 5-7 лет времени, из которых первые 1-2 года вы будете все заниматься ТОЛЬКО пусконаладкой того, что нужно.

Вам ещё предстоит построить настоящий стерильный и моющийся клеточный блок в здании обязательно с виварием, желательно - кроличьим, а не только крысо-мышиным. Если вивария нет - прибавьте еще 3-5 лет на его постройку, оборудование и сертификацию, бюджет 1,5-2 млрд рублей в зависимости от жадности подрядчиков.

NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни

31.05.2018 14:42

URL #14

(vb @ 30.05.2018 20:09)

Да никто уже не удивляется, все привыкли.

А некоторые посредники - так даже и рады.

Tom1
Постоянный участник

01.06.2018 16:02

URL #15

(NMR-guy @ 31.05.2018 04:40)

А он исчо и ябеда...
футакимбыть....

CowDoc
Постоянный участник
Middle East

02.06.2018 10:19

URL #16

Вопрос, вам как, временный бюджет слить надо или реальный Проект запустить?
В РФ много контор, кто серьезно работает, по международным стандартам. Все они ВСЕ!!! охреневшие и жадные, желающие минимум 200% прибыли получить, но работать нужно с ними, давить их и за жабры подвешивать.
Кто сможет пройти и предоставить полную бюрократию от/до по оборудованию/помещениям URS-FAT-SAT (URS-->FS-->DS-->IQ-->OQ-->PQ), с тем и работать.
Из последних, с кем работал и остался доволен, наши+французы:
Biotechno Group, 117587, Moscow, Dnepropetrovskaya, 2, +7 (495) 925-3453, +7 (495) 995-0565.
Да, и не слушайте всех этих теоретиков, многое зависит от объема конечного выпуска, если есть деньги и площади, то полгода согласование Проекта (вы должны донести свои идеи инженерам), столько же строительство и упаковка/наладка оборудования, запуск/отработка идет паралельно в пилотной лаборатории.
А то вам сейчас сказок по нарасказываю .... виварии для кроликов строить надо на первом этапе практически девелопмента )))

Сообщение было отредактировано CowDoc - 02.06.2018 10:23

MMM
Постоянный участник

02.06.2018 11:56

URL #17

CowDoc! А вы уверены, что автору нужно пароизводство, а не ресерч?

CowDoc
Постоянный участник
Middle East

02.06.2018 13:14

URL #18

2MMM
А для этого и делается изначально URS+FS, и проектировщику будет понятно, очередной шизик, или серьезные намерения.
Вы знаете, сколько встречается в последнее десятелетие:"Деньги есть, ты мне построй, а дальше уже само как-то!"

Asgard

05.06.2018 17:13

URL #19

CowDoc
Нужен реальный проект.
Есть виварии для кроликов, в другом месте.

Tom1
Ну почему же одного антитела. Начинать нужно с одного, а дальше будут другие.

Главная задача - это проверить активность полученных вариантов антитела. И соответственно наладить все методики, чтобы можно было проверять другие антитела уже более потоково.

Tom1
Постоянный участник

05.06.2018 22:33

URL #20

(Asgard @ 05.06.2018 07:13)

определитесь нужны моноклоны или обойдетесь поликлонами?????

Asgard

06.06.2018 12:06

URL #21

Нужны моноклональные, конечно. Сразу не написал.

trickortip

23.07.2019 13:42

URL #22

Thanks for sharing this information. I really like your blog post very much. You have really shared a informative and interesting blog post with people. https://www.trickortip.com

Это сообщение — спам.
Nett

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.