Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Когда используют немеченый изотипический контроль?
Компания Biocommerce - официальный дистрибьютер продукции компаний Miltenyi Biotec GmbH (Германия) и RanD S.r.l. (Италия).
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Chrus
Участник



 прочитанное сообщение 28.05.2013 12:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Уважаемые коллеги!

А можно использовать немеченый (неконъюгированный с FITC, например) изотип-контроль? Можно в одну пробирку добавить немеченный изотип, забивающий всю Fc-неспецифику, и меченые целевые антитела? Почему же все-таки все используют меченые изотип-контроли? И зачем производят немеченые?
Участник оффлайн! Annabel
Участник
Бостон, США



 прочитанное сообщение 28.05.2013 21:30     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Можно ли забить Fc-неспецифику (точнее, конечно, Fc-специфику smile.gif) изотипом? Можно, наверное, но лучше FcBlock (http://www.bdbiosciences.com/resources/protocols/uses_of_fcblock.jsp).

Меченые изотип-контроли используют не для забития Fc связывания, а чтобы учесть в общем флуоресцентном фоне долю неспецифического связывания меченого антитела И связывания антитела Fc-рецеторами. В ИДЕАЛЕ изотип-контроль всем таков же, каково ваше меченое антитело, только без специфики Fab. В РЕАЛЬНОСТИ все бывает по-разному smile.gif

Немеченые изотип-контроли кто-то использует на первом этапе двуступенчатого окрашивания, параллельно с немечеными специфическими антителами. Та же история - чтобы оценить, сколько к клетке прилипнет неспецифики, которая на втором этапе окрашивания вся засияет как настоящая smile.gif.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Дядя ФАКСер
Участник оффлайн! Chrus
Участник



 прочитанное сообщение 29.05.2013 17:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Annabel, большое спасибо за ответ. Не могли бы Вы рассказать поподробнее про двуступенчатое окрашивание параллельно с немечеными специфическими антителами. Какая цель у такого окрашивания?
Участник оффлайн! Annabel
Участник
Бостон, США



 прочитанное сообщение 29.05.2013 19:13     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Допустим, у вас есть рецептор АБВГД, к которому меченые антитела не продают. Вы берете свое, скажем кроличье, анти-АБВГД антитело и инкубируете с клетками. Потом берете анти-кроличье FITC-меченое вторичное антитело и красите. Параллельно вы инкубируете клетки с неспецифическим (изотипом) кроличьим антителом и тоже красите анти-кроликом FITC. Флуоресценция во второй пробирке - ваш фон, то есть неспецифика+Fcсвязывание+аутофлуоресценция клеток.
Участник оффлайн! Chrus
Участник



 прочитанное сообщение 30.05.2013 09:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Спасибо, Annabel, теперь все ясно!
Участник оффлайн! Леонид В
Постоянный участник
Квебек



 прочитанное сообщение 10.05.2018 19:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

ответ уже дан, но попробую досунуть пять копеек

(Chrus @ 28.05.2013 05:58)
Ссылка на исходное сообщение  
А можно использовать немеченый (неконъюгированный с FITC, например) изотип-контроль?

можно и нужно как контроль для непрямой иммунофлюоресценции


(Chrus @ 28.05.2013 05:58)
Ссылка на исходное сообщение  Можно в одну пробирку добавить немеченный изотип, забивающий всю Fc-неспецифику, и меченые целевые антитела?

можно, но не понятно зачем.
Вам забить=блокировать или проконтролировать?
если забить, то надо забивать (специфику = эпитоп да не тот / специфику другого конца (FC) / неспецифику). Соответственно использовать специфический белок, пептид / иммуноглобулин / BSA, желатин, температуру, детергент и паки и паки

проконтролировать это радикально из другой оперы и именно для этого
(Chrus @ 28.05.2013 05:58)
Ссылка на исходное сообщение  все используют меченые изотип-контроли


(Chrus @ 28.05.2013 05:58)
Ссылка на исходное сообщение И зачем производят немеченые?

как контроль для непрямой ИФ

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Дядя ФАКСер

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Клеточные технологии · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 20.10.18 04:08
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft