Уважаемые коллеги!

Кто-нибудь использует pNOM123 и/или pMCB32? Не найдется ли карты и последовательности.

Благодарю!

Возьмите PFU полимеразу. 30 минут на 72.

:) Мысль хорошая, но это надо было для проекта на трех листах - больно-то не разбежишься :) Написала в прямом переводе, авось прокатит.

Мне кажется это не тот случай, ДНК работает в другими праймерами. Трудно представить, что именно с этой парой реакция каким-то образом ингибирована, ведь все реактивы те же, за исключением собственно праймеров.

Может все можно объяснить тем, что в образцах, которые не дают положительный сигнал, все же есть некие участки на которые отжигаются праймеры - это препятствует образованию димеров? С другой стороны, димеров не было бы и в положительных реакциях...

Бррр!

Все правильно! По логике димер должен быть везде. Ставила уже дополнительно два раза! :| Даже взяла совсем левую ДНК на которой не должно ничего получаться - та же картина, в воде и положительных реакциях есть банд, на других ДНК - нет...

Самая дурота, что не обратила на это внимания с самого начала, теперь не знаю как отмазываться... :/ Почему димер? Я не уверена, но так утверждает тот, кто требует объяснений. Можно предположить, что это остатки праймеров, но суть дела от этого не меняется. Куда-то делись праймеры... Куда?

Что значит "реакия польностью ингибирована"? Образование димеровтоже каким-то образом ингибировано или что? И как это может быть?

Кроме того с других праймеров абсолютно ВСЯ ДНК работает.

Ситуация такова. После ПЦР реакции на электрофорезе видны праймер-димеры в реакциях, которые дали положительный результат, и в негативном контроле (вода). Однако, там, где не прошла реакция, праймер-димеров нет. Даже самих праймеров не видно :|. Ну, в некоторых дорожках есть слабый намек на присутствие димера. Нанесен одинаковый объем реакций.

Как это можно объяснить? Помогите!

Помогите, пожалуйста, с переводом: sequence-specific amplification polymorphism, в русскоязычной литературе не встречается :|

Можно ли в лоб, что-нибудь типа - сиквенс-специфичный амплификационный полиморфизм, или все-таки как-то помягче надо...

Заранее, СПАСИБО!

С Промегой у меня такие же проблемы были, причем и с китом для чистки плазмиды, и с китом для чистки ПЦР продуктов. Попробуйте киаджиновский кит

Обязательно читать с плазмиды? Я обычно получаю пцр-ный продукт с универсальных праймеров, который потом и читаю. Почти всегда получается на ура.

Спасибо

нет, я из Новосибирска

Уважаемые коллеги!

Очень нужен материал (ДНК или кусочек для выделения ДНК - лапка, голова) бабочек семейства Bombycidae и/или представителей надсемейства Bombycoidea.

Помогите, если есть возможность.
Заранее спасибо!

Спасибо большое, попробую найти...

Купить можно, в некоторых случаях для оформления визы его даже НУЖНО купить и предоставить со всеми документами. Да, маленький нюанс - надо чтобы паспорт был на руках...

Где лучше купить? Там, где продают На счет - подешевле, не знаю, мне кажется они, по большому счету, везде одинаково стоят.

Уважаемые коллеги!



Помогите, пожалуйста, найти хоть какую-нибудь информацию о времени расхождения бабочек Papilionoidea и Bombycoidea.

Заранее спасибо за помощь!

Делала single cell RT-PCR с рендом праймерами китом от Invitrogen все работало отлично.

всегда делаю кДНК для qPCR с рендом праймеров

Reactome is a curated database of biological processes in humans. It covers biological pathways ranging from the basic processes of metabolism to high-level processes such as hormonal signalling. While Reactome is targeted at human pathways, it also includes many individual biochemical reactions from non-human systems such as rat, mouse, fugu fish and zebra fish. This makes the database relevant to the large number of researchers who work on model organisms. All the information in Reactome is backed up by its provenance: either a literature citation or an electronic inference based on sequence similarity. Our ontology ensures that the various events are linked in an appropriate spatial and temporal context.

The basic information in Reactome is provided by bench biologists who are experts in that domain of biology. The information is then managed and edited by the Reactome staff at CSHL and the EBI, and entered into a relational database. They are then reviewed by other biological researchers for consistency and accuracy. Following peer-review, the information is published to the web.

Reactome supersedes an earlier project called The Genome Knowledgebase and incorporates all the information previously available in its predecessor. Reactome sports a radically redesigned user interface in which the entire set of human pathways known to the database are represented as a series of constellations in a "starry sky." The starry sky can be used to navigate through the universe of human reactions and is invaluable to visualize connections between pathways, some of which will be surprising to biologists who are not familiar with pathways outside their domain of research.

/ Web-ресурсы,  #54178  /

Веб-адрес: http://www.reactome.org/cgi-bin/frontpage?DB=gk_current

Область: Свойства ферментов, Справочная информация, поиск, Другое (мол. биология), Химия

Язык и уровень: Специальный (анг)

значится так:

1. гель не грела, размораживала при комнатной температуре
2. продукт - не повтор

растворы готовы, продукт тоже, завтра будет часть номер два

хотя необходимость отпала, так как купили кучу GelOut.... :D

руки оторвала, так что теперь в институте на одного безрукого больше стало

в общем дело ясное, что дело темное ))

to AVP спасибо за Вашу отзывчивость,

специально для Вас повторю форез еще раз как только найду того, кто электрод выдернул и оторву руки :D

растворы готовлю...
прогоню еще в крутой агарозе...

продолжение следует

давайте попробуем поговорить без млинов....

1. да, МНЕ трудно было прогнать нормальный форез - и даже не буду пытаться объяснить в чем причина, если бы было нетрудно, то был бы нормальным... маркер фих174 DNA/BsuRI, фрагмент должен быть чуть больше 700 bp

2. метод заключается в следующем - кусочек агарозы замораживается, оттаивается, фугуется раз, супернатант отбирается в другую пробирку, фугуется два - готово....

3. после переосаждения был небольшой белый осадок, который полностью растворился в воде

хотите сказать, что дело в остатках агарозы???

интересное влияние остатков агарозы

да-да, что за эндонуклеаза так клево поработала???

8/

реагенты сменю .... попробую....

Уважаемые, коллеги. Помогите разобраться со следующим странным явлением - ПЦР-ный продукт длиной около 700 bp был выделен из геля несколькими способами:
1. выделение из геля китом GelOut - 1-5 старты
2. замарозка-разморозка геля + переосаждение - 6-8 старты
3. размарозка-размарозка - 9, 10 старты

[0 - маркер длины]

После первых двух методов картинка осталась прежней - один продукт 700 bp.
Однако при очистке с переосаждением появился еще один банд

........и поет..........

найдите сиквенс плазмиды в базе данных - их куча всяких разных, где эти гены указаны.... Что за плазмида-то???