Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Guest IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
(Yeaster @ 23.08.2006 13:17) В условиях задачи не указано еще некоторые параметры - распложение сайтов рестрикции, наличие star-activity у рестриктазы в данном буфере. Но так ли это важно? Принципиально задача сводится к проверке понимания взаимосвязи между количеством ДНК, ее размером и количеством фермента. Дополнительные параметры необходимо учитывать уже в практическом применении в онкретной ситуации.
Что до влияния объема реакционной смеси на скорость ферментативной реакции - то вопрос сложный и теоретически результат, на мой взгляд, непредсказуем. Вдвое скорость, конечно, не возрастет. Но, с одной стороны, вы сокращаете объем вдвое и уменьшаете промежуток времени, необходимый для встречи в растворе ДНК и фермента, но при этом возрастает вязкость раствора и к тому же увеличивается концентрация компонентов буфера, в котором хранится рестриктаза, что может негативно сказаться на скорости реакции. Так что задача вполне понятная. Ну, может быть стоит дополнить ее некоторыми ограничениями, чтобы снять спорные моменты. Еще раз спасибо Ольге. |
Guest IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
(Ольга Л. @ 23.08.2006 15:37) Хорошо, хорошо, давайте по-порядку.
Я думаю с первым вопросом мы разобрались. Теперь по-поводу второго. Суть вопроса заключалась в том, что если уменьшить объем реакции вдвое, то уменьшится ли время реакции вдвое? Ответ - нет. Соглашусь, объяснение я дала не совсем корректное. Время работы молекулы рестриктазы состоит из следующих этапов: 1. Распознавание сайта рестрикции на молекуле ДНК 2. Присоединение фермента к найденному сайту 3. Разрезание сайта 4. Отсоединение фермента от ДНК. Я полагаю, что 2-4 этапы у нас константные, т.к. состав буфера и температура не меняются. Остается 1-й этап. С одной стороны, если концентрацию сайтов увеличить, то ферменту будет легче найти нужный и времени на это потребуется меньше. С другой стороны, при увеличении количества ДНК повышается вязкость раствора (то, о чем писали Urry и Yeaster), ферменту становится "труднее пробираться" между нитями ДНК, движение молекул в растворе замедляется и время реакции увеличивается. Т.о. если постепенно уменьшать количество реакционной смеси, то вначале мы получим ускорение реакции (но не линейное), потом будет некая точка перегиба (если представить себе график), после чего - снижение скорости реакции. Кроме того, каждая молекула фермента способна провести определенное количество раундов гидролиза, после чего разваливается/инактивируется. Надеюсь, такое объяснение публику устроит больше. Помимо всего прочего, вот одно из определений ед. активности: За одну единицу активности эндонуклеазы рестрикции принимают количество фермента, необходимое для полного гидролиза в течении одного часа одного микрограмма ДНК при оптимальной температуре и в оптимальном реакционном буфере. Заметьте, здесь указано количество субстрата и не указан объем реакционной смеси, т.е. речь не идет о концентрации (можете обвинить авторов в безграмотности ). И вот еще полезное замечание Volume: Viscous DNA solutions inhibit enzyme diffusion and can reduce enzyme activity. DNA concentrations that are too dilute can fall below the Km of the restriction enzyme and also affect enzyme activity. Volume considerations must take into account final ionic strength and must result in glycerol concentrations no higher than 5-10% in order to avoid star activity. Reaction volumes of 10-50µl per microgram of DNA are recommended. |
토토사이 IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
No group will have more than one team from the same region, except for Europe. The cap on European teams per group is two, since there will be 13 countries from that continent in the tournament. |
토토사이 IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
No group will have more than one team from the same region, except for Europe. The cap on European teams per group is two, since there will be 13 countries from that continent in the tournament. |
토토사이 IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
No group will have more than one team from the same region, except for Europe. The cap on European teams per group is two, since there will be 13 countries from that continent in the tournament. |
토토커뮤 IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
The already-qualified teams will be divided into four "pots" with eight teams each, based on their FIFA world ranking positions. In all, the 32 teams will be paired into eight groups of four, and the groups will feature a team from each of the four pots. |
토토커뮤 IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
The already-qualified teams will be divided into four "pots" with eight teams each, based on their FIFA world ranking positions. In all, the 32 teams will be paired into eight groups of four, and the groups will feature a team from each of the four pots. |
메이저놀 IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
The other seven countries in Pot 3 are: Senegal (No. 20), Iran (No. 21), Japan (No. 23), Morocco (No. 24), Serbia (No. 25), Poland (No. 26) and Tunisia (No. 35). |
안전놀이 IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
Korea will be placed in Pot 3 of the draw for this year's FIFA World Cup based on the latest world rankings released Thursday, meaning that they will end up with a pair of top-20 countries in the group stage in November. |
사설토토 IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
There is no such thing as a "best case scenario" for South Korea when it comes to Pot 1. Qatar are the lowest-ranked team in that pot at No. 51, but South Korea can't be paired with them since both are from Asia. |
먹튀검증 IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
Checking in at No. 29, South Korea ended up in Pot 3, which included 16th- to 23rd best-ranked qualifiers. |
보증업체 IP-штамп: frn0O2izofeVU гость |
South Korea stayed at No. 29 in the FIFA rankings. As of Thursday, 28 teams have qualified for the Nov. 21-Dec. 18 tournament in Qatar, with the host country automatically in the competition. The draw is scheduled for 7 p.m. Friday in Doha, or 1 a.m. Saturday in Seoul time. The remaining three spots will be filled with winners of the European playoffs and the intercontinental playoffs in June. |
slotsite IP-штамп: frXkFtWqamLPg гость |
|
safetoto IP-штамп: fr2C7E9GRqhh6 гость |
|
guest: Lee IP-штамп: frv7qWV7tQCrg гость |
|
bitcoincasino IP-штамп: fr0H9q/iMQ8ec гость |
|
마하캔디 IP-штамп: fr0H9q/iMQ8ec гость |
|
majorsite IP-штамп: frR0jpm7d87M6 гость |
|
비아그라 IP-штамп: frR0jpm7d87M6 гость |
|
baccaratcommunity IP-штамп: frnfVbLhkGMuw гость |
|
비아그라 IP-штамп: frnfVbLhkGMuw гость |
|
KEONHACAI IP-штамп: frlOk.fjiu0po гость |
|
casinosite IP-штамп: frR0jpm7d87M6 гость |
|
열공캔디 IP-штамп: frR0jpm7d87M6 гость |
|
guest: totosite IP-штамп: frmq2Fm1pbDvc гость |
|
betsabu IP-штамп: frDkzbXxv3pNk гость |
|
bombertoto IP-штамп: frEFqQd9wsQJw гость |
|
muksabu IP-штамп: frDkzbXxv3pNk гость |
|
totooffice IP-штамп: frDkzbXxv3pNk гость |
|
Guest IP-штамп: frDkzbXxv3pNk гость |
(Gal @ 14.07.2008 18:53)
|
muksabu IP-штамп: frDkzbXxv3pNk гость |
|
totooffice IP-штамп: frDkzbXxv3pNk гость |
|
Ufa1688 Постоянный участник |
|
UFAAUTO789 IP-штамп: frVTPha5ozRVY гость |
|
ufabet1688 IP-штамп: fre75GD6tmd/6 гость |
|
pgslot168z IP-штамп: frCS2ELRc4cF6 гость |
|
UFABET168GO IP-штамп: frVTPha5ozRVY гость |
|
ufabet1688 IP-штамп: fre75GD6tmd/6 гость |
|
ufabet1688 IP-штамп: fre75GD6tmd/6 гость |
|
guest: betflix IP-штамп: fre75GD6tmd/6 гость |
|
nafees IP-штамп: frq1KqCz2t8ck гость |
|
nafees IP-штамп: frq1KqCz2t8ck гость |
|
nafees IP-штамп: frq1KqCz2t8ck гость |
|
nafees IP-штамп: frq1KqCz2t8ck гость |
|
nafees IP-штамп: frq1KqCz2t8ck гость |
|
hgfhghfhbvh Постоянный участник |
|
one cargo IP-штамп: fre75GD6tmd/6 гость |
|
« Предыдущая тема · Сборник задач · Следующая тема » |