Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Blaid Постоянный участник |
Нужно определять активность ряда ферментов (супероксидисмутаза, каталаза и нек. др.) в тканях и органах млекопитающих (а именно у человека, крыс и мышей). В первую очередь, в печени и почках. Общая схема анализа: гомогенизация в том или ином подходящем буфере, умеренно высокоскоростное центрифугирование гомогената ткани (так, чтобы без ультрацентрифуги обойтись и получить только постмитохондриальную фракцию ткани) и последующее собственно определение ферментативной активности в полученном супернатанте. Вот есть у меня "подозрение", что хорошо бы в буфер для гомогенизации вводить ингибитор/ингибиторы протеаз (дабы оные не пощепили эти самые ферменты). Вот я и думаю-гадаю как же быть... Из имеющегося в наличии: 1. PMSF: хватит ли для подавления всех протеаз только его одного? вроде как не хватит (сообщается, что он активен только в отношении сериновых протеаз, да и то не всех). Да и не хочется его юзать, поскольку ядовитый он. 2. мед. препарат контрикал (действущее вещество - апротинин): апротинин - поливалентный ингибитор протеаз. Один флакон содержит 10 ООО антитрипсиновых единиц (ATpE;1 АТрЕ = 1.33 калликреиновых единиц). И вот сколько этих единиц надо вводить в буфер для гомогенизации? 3. фирменный коктейль ингибиторов (Sigma-Aldrich P8340 - Protease Inhibitor Cocktail for use with mammalian cell and tissue extracts, DMSO solution). Про него сообщается следующее: "One mL of this cocktail solution is recommended for the inhibition of endogenous enzymes found in 100 mL of lysate from 20 g of bovine liver or 10 mL of lysate from CHO cells" Но это как-то неопределённо... Не вполне ясно сколько же надо этого коктейля вводить в буфер. В общем, хотелось бы услышать мнения уважаемого и компетентного "экспертного сообщества". Спасибо! Сообщение было отредактировано Blaid - 01.02.2018 15:45 |
watchesonline89 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |