Наташа-Оля

23.01.2003 11:09                   URL #1 Уважаемые коллеги! Нужна Ваша помощь! Поделитесь секретом выявления апоптоза с помощью DAPI (TUNEL не предлагать )

Manja Постоянный участник St.Petersburg

23.01.2003 12:04                   URL #2 Очень неоднозначный метод! По идее должен выявлять фрагментированные ядра, характерные для апоптоза. Очень зависит от типа клеток - насколько хорошо вы там увидите эту фрагментацию. Могут быть ситуации, когда полно апоптоза, а фрагментированных ядер вы не увидите

Наташа-Оля

23.01.2003 12:21                   URL #3 For Manja Спасибо за то, что откликнулись, если можно, пришлите пожалуйста описание методики или статью с описанием метода для любых клеток. Мы работаем с эндотелием. Знаете ли Вы что-либо о работах по выявлению апоптоза в данном типе клетке.

AFP

23.01.2003 13:10                   URL #4 Не так давно один добрый человек выложил ссылки на пропидиевую окраску. может быть Вам это поможет? Сылки выложил, Андрей. Копирайт! :-))) Методика окраски клеток пропидием на апоптоз есть, в частности, здесь http://www.molbio.princeton.edu/facility/f.../Apoptosis.html. Или здесь: http://scooter.cyto.purdue.edu/pucl_cd/flo...crf/apop.htm#PI

Manja Постоянный участник St.Petersburg

23.01.2003 14:21                   URL #5 Натахса и Оля, я не могу вам прислать статью с описанийем точной методики - возьмите любой сравочник по cell bilogy или поройтесь в сети - это базовый протокол, очене простой, клетки фиксируются спиртом, потом красятся раствором этого ДАПИ. У вас, где вы работаете, наверняка есть старшие товарищи, которые не могут не знать этой просто базовой методки.

Наташа-Оля

23.01.2003 14:28                   URL #6 for Manja Cпасибо, но если бы старшие товарищи знали (в нашем институте), то мы бы не обращались с криком о помощи

Наташа-Оля

23.01.2003 14:30                   URL #7 for AFP Спасибо за ссылки, уже воспользовались, но, увы, для DAPI это не подходит. Все равно спасибо

artemboudilov Постоянный участник

23.01.2003 14:50                     URL #8 Прямо Тяни-Толкай какой-то о двух головах. Или хайлайновский Джо-Джим.

Наташа-Оля

23.01.2003 14:56                   URL #9 for artemboudilov Ну, может быть мы и Тяни-Толкай, но обогнали вашу лыбораторию по рейтингу среди научных сайтов!!!!! А на самом деле мы - Двуликий Янус!!!

Andron Участник Manchester

23.01.2003 14:59                       URL #10 Может для начала поделитесь а в чем "листопад" выявляете, после какого воздействия. И почему вдруг на ДАПИ свет клином сошелся. Хотя красиво, понимаю. [Текст переведён с транслита]

Наташа-Оля

23.01.2003 15:14                   URL #11 For Andron Мы работаем с эндотелиальными культурами, как было написано выше. Изучаем воздействие клиностатирования. Не подскажете после какого воздействия можно получить хорошую картину с DAPI. Это нам нужно для моделирования апоптоза

Manja Постоянный участник St.Petersburg

23.01.2003 15:35                   URL #12 Наташа, Оля? В каком вы городе? Погодите, рабочий день закончится, я найду вам в сети протокол и пришлю, в крайнем случае напишу по памяти, как помню У вас ДАПИ этот сам -то есть? Желтый такой порошок?

Наташа-Оля

23.01.2003 15:45                   URL #13 for Manjа Мы находимся в Москве. Порошок есть. Пришлите, пожалуйста, протокол. Заранее Вам благодарны.

Tom1 Постоянный участник

23.01.2003 15:50                     URL #14 Значит так двуликие Вы наши аетот топик уже был тут посмотрите поиском апоптоз -там нмого чего есть. Я отсылал статьи по еатому методу незнаю сохранил их или нет если да сегодня завтра вышю мылом [Текст переведён с транслита]

Andron Участник Manchester

23.01.2003 19:35                       URL #15 Чего-то я не понимаю. Если вы спрашиваете после какого воздействия можно получить хорошую картину с ДАПИ (если это самоцель), то или жахните 10 Gy, или воздействуйте каким нибудь химиопрепаратом (етопозидом, блеомицином этц). Если это недоступно, проинкубируйте культуру при повышенной температуре (42-43 oC) 12-24 часа (без гарантии конечно). Трудно что-либо сказать без знания дизаина експериментов <img border="0" alt="[чайник]" title="" src="graemlins/teapot.gif" /> (судя по воздействию, секретные космическиые разработки ), но мне кааатся, что метод с ДАПИ может оказаться капельку грубоват (хотя он и проще пареной репы). А как насчет Акридинового оранжевого? Статью выслал, если не поможет сотрите или распечатайте и сожгите. [Текст переведён с транслита]

Andrei Постоянный участник

23.01.2003 19:54                   URL #16 This is the protocol we use: Make 1 milligram per ml stock solution of DAPI in water or in methanol ( I made in methanol and stored in -20 degrees, for 2-3 years). This stock solution is 1000x. Dilute it in coled methanol and stain your cells 15-20 minutes at room temperature. The protocol is very simple- take a plate with cells, rince 1x in PBS ( optional), aspirate all the liquid and add DAPI ( final conc, 1 microgram per ml)in methanol. After 15- 20 min room temperature, rince 2-3 times with PBS and look under the microscope. To induce apoptosis, you can try staurosporine or okadaic acid, the latter at concentrations 0.1-1 microM for 30 -60 minutes, depending on a cell type. Or, you can irradiate your cells in Stratalinker with the UV, but this may or may not work. Ionizing radiation is better.

Manja Постоянный участник St.Petersburg

23.01.2003 21:02                   URL #17 Посылаю протокол маилом; Протокол Андея, действительно, очень простой, и мы таким пользовались. Но могут быть всякие трюки, так что поразмышляйте и попробуйте, если что, то, что я вам посылаю

baymak

24.01.2003 08:23                     URL #18 А зачем Вам ДАПИ, эл. форез ДНК тоже ничего. А фрагментацию ядра можно увидеть при любом окрашивании на ДНК.

Наташа-Оля

24.01.2003 12:41                   URL #19 for Andron Спасибо за статью, акридинку мы тоже попробуем. А все-таки, чем вызывается ХОРОШАЯ картина Апоптоза??? Аааа, с чего вы взяли, что мы занимаемся "секретными космическими разработками"?

Наташа-Оля

24.01.2003 12:43                   URL #20 Спасибо всем тем, кто откликнулся!!! Мы вам очень благодарны!

24.01.2003 13:43                   URL #21 Да-с... <img src="http://animac.narod.ru/smiles/smail/rolleyes.gif" alt=" - " /> Уровень виден... (насчет Наташи-Оли). Акридинкой апоптоз красить... <img src="http://animac.narod.ru/smiles/smail/pcangry.gif" alt=" - " /> Неудивительно, что дамочка(и) такая(ие) "прорассейская(ие)"... <img src="http://animac.narod.ru/smiles/smail/nud.gif" alt=" - " />

Manja Постоянный участник St.Petersburg

24.01.2003 15:26                   URL #22 НП! Ну насчет акридинки вы зря так, есть клетки (лимфоцитарные линии, например), которые дают очень хорошую картину с акридинкой, и не надо мучаться с аннексином или еще чем-то дорогостоящим.

Andron Участник Manchester

24.01.2003 17:32                       URL #23 Окраска акридинкой проводится после in situ денатурации ДНКи, после которой разрывы красятся красным, а интактная ДНК зеленым (естественно нужна обработка РНКазой, бо РНК тоже красится красным). Метод придуман бывшим поляком (эмигрировавшим в США в 70е) тов. З. Дарцинкевичем (Darzynkiewicz Z.) и был валидирован много раз (посомотрите в PubMed). Сравнительная характеристика окрасок здесь Erenpreisa J, Freivalds T, Roach H, Alston R.Apoptotic cell nuclei favour aggregation and fluorescence quenching of DNA dyes.Histochem Cell Biol 1997 Jul;108(1):67-75 Так что зря вы так, НП. [Текст переведён с транслита]

Andron Участник Manchester

24.01.2003 17:37                       URL #24 [ From Baymak: А фрагментацию ядра можно увидеть при любом окрашивании на ДНК] Истинно. ДАПИ - это не отдельный метод как таковой <img border="0" alt="[согласен]" title="" src="graemlins/yes.gif" /> [Текст переведён с транслита]

24.01.2003 17:59                   URL #25 Акридинкой в некоторых случаях дико красятся белки.

Andron Участник Manchester

24.01.2003 18:18                       URL #26 Это такие пушистые хвостатые зверьки? [Текст переведён с транслита]

24.01.2003 19:56                   URL #27 Нет, это такие странные вещества, из которых сделаны живые существа В том числе и пушистые хвостатые зверьки

Andron Участник Manchester

24.01.2003 20:24                       URL #28 А атомы создают структуру странного вещества, из которого сделаны живые существа, в том числе пушистые хвостатые зверьки... <img border="0" alt="[ура]" title="" src="graemlins/jump.gif" /> [Текст переведён с транслита]

jaba tbilisi

27.01.2003 03:54                     URL #29 Привет Артуру Георгиевичу !

123goal 123goal Постоянный участник

10.11.2022 19:23                   URL #30 Insomnia is the inability to fall 123 gold asleep or stay asleep at night, resulting in unrefreshing or non-restorative sleep. And it’s a very nigoal ฝาก 50 รับ 100 common problem, one that takes a toll on your ทดลองเล่นสล๊อต energy, mood, and ability to function during slotxo ฝาก 10 รับ 100 ทำยอด 200 ถอนได้เลย the day. Chronic insomnia can even contribute to serious health ทางเข้าเล่นpg wallet problems. Some people struggle to get to sleep joker888 เครดิต ฟรี ไม่ ต้อง ฝาก no matter how tired they are.

123goal 123goal Постоянный участник

11.11.2022 10:34                   URL #31 Your credit can determine whether 123 gold you’re able to get loans and the rates you pay on them, as well as many other aspects of your financial life. A credit nigoal ฝาก 50 รับ 100 check may be part of getting a cell phone plan, apartment ทดลองเล่นสล๊อต or car insurance. To stay on top of your score, focus on the two biggest factors that influence it: payment history and credit utilization. Aim slotxo ฝาก 10 รับ 100 ทำยอด 200 ถอนได้เลย to pay everything on time, because just ทางเข้าเล่นpg wallet one missed payment can hurt your score, and use less than 30% of your joker888 เครดิต ฟรี ไม่ ต้อง ฝาก credit limits on each card and overall.

123goal 123goal Постоянный участник

12.11.2022 10:13                   URL #32 Have you ever wanted to go to sleep 123 gold early, only to find it impossible? Maybe you have to wake up a few hours earlier than usual on a particular nigoal ฝาก 50 รับ 100 day for an early conference call or perhaps you need to prepare for travel across time zones to limit jet lag. So you ทดลองเล่นสล๊อต want to compensate by going to bed a few hours slotxo ฝาก 10 รับ 100 ทำยอด 200 ถอนได้เลย earlier the night before in order to keep your total sleep time the same. If only it ทางเข้าเล่นpg wallet were this simple. It might be tempting to stock up on sleep medicines and joker888 เครดิต ฟรี ไม่ ต้อง ฝาก other sleep aids for a quick fix.

guest: 123vega IP-штамп: frXqkB4MpP2jQ гость

12.11.2022 11:53               URL #33 A long, beautiful stretch SUPERSLOT เครดิตฟรี of sand in Australia's สล็อต โร มา เว็บตรง tropical far north, Wangetti Beach, was Toyah ทดลองเล่นสล็อตโรม่า Cordingley's favourite beach. It is also where she died, in what ROMA SLOT has been called a "frenzied and brutal and sadistic" attack. SLOT JOKER The 24-year-old had gone to the SLOTXO beach to walk her dog on 21 October 2018, as she เครดิต ฟรี กด รับ เอง 50 บาท had done countless times before, but never came home. The PG SLOT ซื้อฟรีสปิน next morning her father found her "messed up" body half buried in sand dunes. Her JOKER ROMA เว็บตรง beloved dog was tied up nearby, unharmed. Four PG SLOT ทางเข้า years on, Australian authorities are appealing for the public's help in an international hunt to find the man they believe killed Toyah - Rajwinder Singh.

123goal 123goal Постоянный участник

14.11.2022 11:02                   URL #34 It is important to consume adequate Nigoal calories and protein to help maintain energy and muscle mass. The right amount of สล็อต calories and protein help your body 123GOAL fight infection, maintain muscle mass, and บาคาร่าคืออะไร help prevent skin breakdown. If you are underweight, the สูตรบาคาร่า goal for healthy weight gain is a slotxo gain of ½ to 2 pounds per week. This can usually be ทดลองเล่นสล๊อต accomplished by eating at nigoal least 250-500 more calories per แทงบอล day than you normally do. If your doctor or ลิงค์รับทรัพย์คืออะไร dietitian has told you that weight gain is appropriate for you.

123goal 123goal Постоянный участник

15.11.2022 10:59                   URL #35 Daily exercise helps you maintain a healthy Nigoal sleep schedule, but experts Trusted Source recommend สล็อต avoiding exercise late at 123GOAL night, if you want to sleep บาคาร่าคืออะไร well at night. That’s because your สูตรบาคาร่า body produces a lot of energy when slotxo you exercise, which can keep you ทดลองเล่นสล๊อต awake. If you’re trying to stay up all night, try 30 to 40 minutes nigoal of aerobic exercise. If you don’t want to exercise, try แทงบอล getting up and moving around. Pace back and forth ลิงค์รับทรัพย์คืออะไร for 10 minutes, take a walk outside, or do a few jumping jacks.

123goal 123goal Постоянный участник

16.11.2022 10:33                   URL #36 Getting a good night’s sleep may seem like an Nigoal impossible goal when you’re wide awake at 3 a.m., but you have สล็อต much more control over the 123GOAL quality of your sleep than you probably บาคาร่าคืออะไร realize. Unhealthy daytime habits and สูตรบาคาร่า lifestyle choices can leave you tossing and turning slotxo at night and adversely affect your mood, ทดลองเล่นสล๊อต brain and heart health, immune system, creativity, vitality, and nigoal weight. But by experimenting with the แทงบอล following tips, you can enjoy better sleep at night, boost ลิงค์รับทรัพย์คืออะไร your health, and improve how you think and feel during the day.

123goal 123goal Постоянный участник

17.11.2022 09:50                   URL #37 Eating spicy foods can Nigoal cause heartburn, which can impact สล็อต your sleep, And when you lie down, 123GOAL acid reflux often worsens. If you have sleep บาคาร่าคืออะไร apnea, your symptoms may worsen, too, if the สูตรบาคาร่า backed-up acid irritates slotxo your airway. What’s more, research ทดลองเล่นสล๊อต shows that consuming red pepper nigoal can increase your core body temperature, which is แทงบอล disruptive since core body ลิงค์รับทรัพย์คืออะไร temperature naturally drops during sleep.

123goal 123goal Постоянный участник

18.11.2022 10:53                   URL #38 Each dietary pattern impacts Nigoal different predictors of health. What was สล็อต notable about this study is it 123GOAL investigated a spectrum of plant-based บาคาร่าคืออะไร eating styles. It turns out, a strict vegan diet สูตรบาคาร่า produced the highest levels of healthy slotxo biomarkers and the lowest levels of ทดลองเล่นสล๊อต unhealthy markers. Vegetarians who nigoal include eggs, dairy and/or fish scored next best. The non-vegetarian แทงบอล group had the least favorable health ลิงค์รับทรัพย์คืออะไร markers in their blood, urine and tissue samples.

123goal 123goal Постоянный участник

19.11.2022 09:43                   URL #39 Big dinners make you temporarily Nigoal drowsy but prolong digestion, which สล็อต interferes with a good night's 123GOAL sleep. It's best to eat your biggest meal บาคาร่าคืออะไร before midafternoon and have a light สูตรบาคาร่า evening meal of 500 calories or less. Include slotxo some chicken, extra-lean meat ทดลองเล่นสล๊อต or fish at dinner to help curb middle-of-the-night nigoal snack attacks. Spicy foods can contribute to แทงบอล sleep problems: Dishes seasoned with garlic, chilies, cayenne, or other ลิงค์รับทรัพย์คืออะไร hot spices can cause nagging heartburn or indigestion. Avoid spicy foods at dinner.

123goal 123goal Постоянный участник

21.11.2022 06:26                   URL #40 If sunlight hurts your eyes and results in nigoal ฝาก 50 รับ 100 significant or frequent pain, you may have สล็อต เว็บตรงไม่ผ่านเอเย่นต์ไม่มีขั้นต่ำ photosensitivity or photophobia - extreme 123 sensitivity to light. This could be due to a medical บาคาร่า123 condition, dry eye or damage to your eyes, so you should สูตรบาคาร่าฟรี check with your eye doctor if you เว็บสล็อต pg เว็บตรง 123 feel pain in your eyes due to sunlight or bright light. People with jokerslot sensitive eyes, in general, can wear nigoal123 sunglasses to help lessen their ราคาบอล sensitivity when outdoors. Wind and sun can make eyes ลิงค์รับทรัพย์ feel more irritated and sensitive, but sunglasses can help in both cases.

123goal 123goal Постоянный участник

22.11.2022 11:08                   URL #41 Bloggers and writers will spend a nigoal ฝาก 50 รับ 100 large part of their day researching สล็อต เว็บตรงไม่ผ่านเอเย่นต์ไม่มีขั้นต่ำ before writing their content. This 123 could include looking at similar บาคาร่า123 content online, gathering statistics สูตรบาคาร่าฟรี or products to reference within เว็บสล็อต pg เว็บตรง 123 the post, or interviewing experts jokerslot for quotes. Depending on how nigoal123 involved the brand wants a creator ราคาบอล to be, the work may only involve writing the initial piece; for others, editing and ลิงค์รับทรัพย์ posting on the company’s blog or Medium account may also be part of the contract.

123goal 123goal Постоянный участник

23.11.2022 10:45                   URL #42 Once you have set goals for nigoal ฝาก 50 รับ 100 yourself, you need to figure out what things are สล็อต เว็บตรงไม่ผ่านเอเย่นต์ไม่มีขั้นต่ำ necessary to accomplish those goals. Be clear 123 about why you set this goal and how your life บาคาร่า123 will be different once this goal is achieved. You should สูตรบาคาร่าฟรี also consider the strengths and skills เว็บสล็อต pg เว็บตรง 123 that you possess that will jokerslot help you achieve your goal. Remember nigoal123 to stay focused on the goal and not on the ราคาบอล difficulties you might be having. Keep an open mind, and ลิงค์รับทรัพย์ know that you may hit barriers along the way.

123goal 123goal Постоянный участник

24.11.2022 09:13                   URL #43 The primary symptom of a weakened immune nigoal ฝาก 50 รับ 100 system is susceptibility to infection. A person with a weakened สล็อต เว็บตรงไม่ผ่านเอเย่นต์ไม่มีขั้นต่ำ immune system is likely to 123 get infections more frequently than most บาคาร่า123 other people, and these illnesses might be สูตรบาคาร่าฟรี more severe or harder to treat. These เว็บสล็อต pg เว็บตรง 123 individuals may also find themselves jokerslot dealing with an infection that a person nigoal123 with a stronger immune system would not get. People who ราคาบอล have a weak immune system can take several ลิงค์รับทรัพย์ steps to maximize their chances of staying healthy and avoiding infections.

123goal 123goal Постоянный участник

25.11.2022 05:47                   URL #44 Fat (including saturated and healthy fats) is needed nigoal ฝาก 50 รับ 100 for proper cell function, hormone สล็อต เว็บตรงไม่ผ่านเอเย่นต์ไม่มีขั้นต่ำ regulation, energy balance and the 123 transportation of certain vitamins. Fats บาคาร่า123 are the most energy dense food available. Different สูตรบาคาร่าฟรี types of fat saturated and unsaturated are processed เว็บสล็อต pg เว็บตรง 123 differently by your body. While both types of fat are part of a healthy diet, too jokerslot much saturated fat over a long period nigoal123 of time can negatively impact your heart health. Fed aims ราคาบอล to keep saturated fats ลิงค์รับทรัพย์ under 22g per day, which is around 10% of your total caloric intake.

123goal 123goal Постоянный участник

26.11.2022 11:13                   URL #45 Both diet and sleep are complex, which nigoal ฝาก 50 รับ 100 means there’s no silver bullet or single food สล็อต เว็บตรงไม่ผ่านเอเย่นต์ไม่มีขั้นต่ำ that is guaranteed to help with sleep. However, there are 123 some foods and drinks that may บาคาร่า123 make it easier to get a great night’s sleep. Dietary สูตรบาคาร่าฟรี choices affect more than just energy and เว็บสล็อต pg เว็บตรง 123 sleepiness; they can play a major role in things. For that jokerslot reason, it’s best to consult with a doctor or nigoal123 dietician before making significant changes to ราคาบอล your daily diet. Doing so helps ensure that your food choices support not just your ลิงค์รับทรัพย์ sleep but all of your other health priorities as well.

123goal 123goal Постоянный участник

28.11.2022 10:47                   URL #46 People often cut back on their sleep สล็อตเว็บตรงแตกง่ายไม่ล็อคยูส for work, for family demands, or even to ทางเข้าnigoal watch a good show on television. But if not getting 123 enough sleep is a regular part of your routine, you baccarat may be at an increased risk for สูตรบาคาร่า obesity, high blood pressure, เว็บตรงไม่ ล็อค ยู ส ไม่มี ขั้นต่ำ heart disease and stroke, poor mental health, and even PG early death. Even one night of short sleep QR Code can affect you the next day. Not หวย only are you more likely to feel sleepy, you’re more likely to be in a bad ลิงค์รับทรัพย์ mood, and be less productive at work.

123goal 123goal Постоянный участник

29.11.2022 11:42                   URL #47 The only way to prevent an allergic สล็อตเว็บตรงแตกง่ายไม่ล็อคยูส reaction is to avoid milk and milk proteins. This can be ทางเข้าnigoal difficult because milk is a common 123 ingredient in many foods. Also, some baccarat people with milk allergy can tolerate สูตรบาคาร่า milk in some forms, such as milk that's เว็บตรงไม่ ล็อค ยู ส ไม่มี ขั้นต่ำ heated in baked goods, or in some PG processed foods, such as yogurt. Talk to your health QR Code care provider about what to avoid. If you're having mild allergy หวย symptoms from eating something that ลิงค์รับทรัพย์ contains milk, taking an antihistamine medication may lessen your discomfort.

123goal 123goal Постоянный участник

30.11.2022 11:34                   URL #48 Attempting to boost the cells of your สล็อตเว็บตรงแตกง่ายไม่ล็อคยูส immune system is especially complicated ทางเข้าnigoal difficult because milk is a common 123 because there are so many baccarat different kinds of cells in the immune system that สูตรบาคาร่า respond to so many different microbes in so many ways. Which เว็บตรงไม่ ล็อค ยู ส ไม่มี ขั้นต่ำ cells should you boost, and to what number? So far, PG scientists do not know the answer. What is known is that the body is continually generating immune cells. Certainly, it produces QR Code many more lymphocytes than it can หวย possibly use. The extra cells remove ลิงค์รับทรัพย์ themselves through a natural process of cell death called apoptosis.

123goal 123goal Постоянный участник

01.12.2022 10:45                   URL #49 If your constant use of the snooze สล็อตเว็บตรงแตกง่ายไม่ล็อคยูส button and your morning zombie routine is getting old, there’s help. It begins ทางเข้าnigoal with figuring out the different reasons 123 why you can’t wake up in the morning and what to do baccarat about them. Chances are you’re not getting สูตรบาคาร่า enough sleep and need to tweak your เว็บตรงไม่ ล็อค ยู ส ไม่มี ขั้นต่ำ bedtime routine. If a sleep disorder or other PG underlying condition is to blame for your morning QR Code sleepiness, there are treatments หวย available. Going to bed and waking up at the same time every day is a must if you ลิงค์รับทรัพย์ want to get on a good sleep schedule and train yourself to wake up early.

123goal 123goal Постоянный участник

02.12.2022 07:11                   URL #50 Caffeine is a stimulant - after all, that’s สล็อตเว็บตรงแตกง่ายไม่ล็อคยูส exactly why we drink it! But drinking coffee and other ทางเข้าnigoal caffeinated drinks later in the day could be 123 causing you to take longer to fall baccarat asleep on an evening. Where possible, try to สูตรบาคาร่า avoid caffeine in the afternoon, and เว็บตรงไม่ ล็อค ยู ส ไม่มี ขั้นต่ำ especially in the evening; use it as your wake PG up aid in the morning. If you’re stuck in the QR Code habit of having a hot drink in the หวย afternoon. If you are reliant on coffee to keep you going through the day then it’s probably a good idea to cut down ลิงค์รับทรัพย์ your intake so that you’re not relying on it to keep you awake.

*	« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »