Rambler's Top100
 		Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* titracija antitel
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

 
 Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! L
Участник
 прочитанное сообщение Сообщение на английском  22.08.2005 19:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
ljudi protochniki citometrchiki voznik ka u menja vopros vot takoj. kakuju koncentraciju antitel vzjat dlja eksperimenta posle titrovanija? tu kotoraja nasishchaet markerov na kletok (to est dajot maksimalnii signal) ili tu kotoraja prosto otdeljaet pozitivnuju populjaciju ot negativnix? vot v flowjo oni pishut chtob nujno vzjat pervuju, no na praktike takaja koncentracija inogda dajot takje nespecificheskii signal to est pojavljaetsja shift negativnoj populacii (oni stanovjatsja low positive)... zaranee blagodarju...
Участник оффлайн! Remez
Постоянный участник
Москва
 прочитанное сообщение 22.08.2005 23:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование
Когда говорят "насыщающая концентрация антитела", то действительно имеют в виду концентрацию, дающую сигнал близкий к насыщению, поскольку связывание выходит на плато насыщения асимптотически, то есть для реального насыщения нужна бесконечно большая концентрация антитела. Если разделение позитивного и негативного пика хорошее, то конечно Вы можете работать с далеко ненасыщающей концентрацией, но будьте готовы к тому, что небольшие изменения в условиях инкубации (время, температура и т.д.) потенциально могут приводить к заметному варьированию сигнала, которое не будет связано с изменением уровня антигена на клетках. На практике многие коньюгаты АТ-фикоэритрин дают такой большой сигнал, что зачастую они продаются и рекомендуются к применению в ненасыщающих концентрациях.
Участник оффлайн! Fritz
Постоянный участник
Москва
 прочитанное сообщение 23.08.2005 08:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование
2 Remez: Прошу простить, что не написал Вам персональное письмо, но хотел спросить. Антитела к человеческому иммуноглобулину G, назыв-ся в "Сорбенте" CH1-направлены именно к этому домену, если не секрет? :-)
Участник оффлайн! Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum
 прочитанное сообщение 23.08.2005 10:44     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование
(L @ 22.08.2005 17:30)
Ссылка на исходное сообщение  ljudi protochniki citometrchiki voznik ka u menja vopros vot takoj. kakuju koncentraciju antitel vzjat dlja eksperimenta posle titrovanija? tu kotoraja nasishchaet markerov na kletok (to est dajot maksimalnii signal) ili tu kotoraja prosto otdeljaet pozitivnuju populjaciju ot negativnix? vot v flowjo oni pishut chtob nujno vzjat pervuju, no na praktike takaja koncentracija inogda dajot takje nespecificheskii signal to est pojavljaetsja shift negativnoj populacii (oni stanovjatsja low positive)... zaranee blagodarju...

Если антитела от нормального производителя- то читайте TDS
Участник оффлайн! Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum
 прочитанное сообщение 23.08.2005 10:50     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование
(L @ 22.08.2005 17:30)
Ссылка на исходное сообщение  tu kotoraja nasishchaet markerov na kletok (to est dajot maksimalnii signal) ili tu kotoraja prosto otdeljaet pozitivnuju populjaciju ot negativnix?

На практике- приемлемая разница между Means - 10 раз ( разделение сабсетов).
На насыщении работать никогда не стоит:
1) не знаешь: какой уровень экспрессии может быть
2) Сложности с компенсацией при многоцветке (особенно, если флуорофор с высоким QYeld)+ паразитная "засветка"
3) Повышается уровень неспецифики.
Участник оффлайн! L
Участник
 прочитанное сообщение 23.08.2005 11:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование
(Remez @ 22.08.2005 21:48)
Ссылка на исходное сообщение  но будьте готовы к тому, что небольшие изменения в условиях инкубации (время, температура и т.д.) потенциально могут приводить к заметному варьированию сигнала, которое не будет связано с изменением уровня антигена на клетках.


absoljutno s vami soglasen uje bilo takoe sluchai v praktike... smile.gif


Если антитела от нормального производителя- то читайте TDS


nu u menja antitela ot pharmingen no ni slova o koncentracijax tolko govorjat sami naidite dlja vas optimalnuju...
Участник оффлайн! L
Участник
 прочитанное сообщение 23.08.2005 11:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование
[quote=Remez,22.08.2005 21:48]Ссылка на исходное сообщение  но будьте готовы к тому, что небольшие изменения в условиях инкубации (время, температура и т.д.) потенциально могут приводить к заметному варьированию сигнала, которое не будет связано с изменением уровня антигена на клетках.
[/quote]

da soglasen s vami bilo takoe uje na praktike smile.gif

[quote=]Если антитела от нормального производителя- то читайте TDS[/quote]

no ot pharmingena u menja Ab i ni slovo o titracii tolko govorjat sami naidite optimalnuju... smile.gif
spasibo za vashu pomosh... smile.gif
Участник оффлайн! Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum
 прочитанное сообщение 23.08.2005 11:23     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование
(L @ 23.08.2005 09:08)
Ссылка на исходное сообщение  absoljutno s vami soglasen uje bilo takoe sluchai v praktike... smile.gif
nu u menja antitela ot pharmingen no ni slova o koncentracijax tolko govorjat sami naidite dlja vas optimalnuju...

А вот это странно...
Что за антитела? Поподробнее можете рассказать? ( потому что сам постоянно работаю с BD-Pharmingen)
Участник оффлайн! L
Участник
 прочитанное сообщение 23.08.2005 13:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование
(Дядя ФАКСер @ 23.08.2005 09:23)
Ссылка на исходное сообщение  А вот это странно...
Что за антитела? Поподробнее можете рассказать? ( потому что сам постоянно работаю с BD-Pharmingen)


samie obiknovennie... nu u nix vsegda napisano <=1ug/1million cells i potom since application vary each investigator must determine dilutions appropriate for individual use... a eto standartnaja fraza i antitela vsjoravno je nujno titrovat... osobenno esli 96well format ispolzuesh dlja staininga a ne falcon tubes... smile.gif
Участник оффлайн! Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum
 прочитанное сообщение 23.08.2005 16:20     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование
Зачем титровать?
Вы ж не ИФА делаете smile.gif
Участник оффлайн! L
Участник
 прочитанное сообщение 23.08.2005 17:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование
(Дядя ФАКСер @ 23.08.2005 14:20)
Ссылка на исходное сообщение  Зачем титровать?
Вы ж не ИФА делаете smile.gif

shutite chtoli...
Участник оффлайн! Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum
 прочитанное сообщение 23.08.2005 20:19     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование
Не шучу- ибо проточкой давно занимаюсь.
Я понимаю, если у вас кастом-мейд антитело - и требуется посмотреть его афинность (ну и величину сигнала, специфичность и т.д.) на известных маркерах. Тут да- тировка необходима.
А с BD-шными антителами...Для того TDS и написан, что б подобной monkey job народ не занимался. К тому же- если вы многоцветку делаете- то используя не стандартизированные концентрации и протоколы може те с калибровками и компенсациями резво наколоться ( особенно при числе цветов больше 3)


P.S. И все же: не могли бы поподробнее: что за клетки у вас, какие маркеры смотрие. Вообще, у BD есть очень хорошие киты с разведенными в нужной концентрации антителами для multicolor analysis (T, Treg, DC, Stem etc...)
Участник оффлайн! L
Участник
 прочитанное сообщение 24.08.2005 17:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование
(Дядя ФАКСер @ 23.08.2005 18:19)
Ссылка на исходное сообщение  Не шучу- ибо проточкой давно занимаюсь.
Я понимаю, если у вас кастом-мейд антитело - и требуется посмотреть его афинность (ну и величину сигнала, специфичность и т.д.) на известных маркерах. Тут да- тировка необходима.
А с BD-шными антителами...Для того TDS и написан, что б подобной monkey job народ не занимался. К тому же- если вы многоцветку делаете- то используя не стандартизированные концентрации и протоколы може те с калибровками и компенсациями резво наколоться ( особенно при числе цветов больше 3)
P.S. И все же: не могли бы поподробнее: что за клетки у вас, какие маркеры смотрие. Вообще, у BD есть очень хорошие киты с разведенными в нужной концентрации антителами для multicolor analysis (T, Treg, DC, Stem etc...)



nu ne bili u menja poka chto podobnie problemi s mnogocvetkoj ni v kompensacijax ni stainingax xotja vsegda koncentraciju menshe chem polojeno ispolzuju (titruju antitela daje ot BD) tak kak naprimer anti mouse Ia/Ie-PE labeled (Cat No 557000) ja ispolzuju 1/6000 diluted v 20ul final volume to est 0.008ug/1million cells i prekrasno rabotaet do etogo ispolzoval dvoe bolshe i nespecificheskii signal bil a eta koncentracija 130raz menshe chem BD rekomenduet. ottuda vopros nujno li titrovat ili net... a vot imenno TDS i govorit chtob vse doljni naiti svoju zolotuju seredinu. smile.gif v nachale dumal ne titrovat no takie problemi voznikli chtob... osobenno posle togo kak s falkon tubes na 96well format staining perekluchilsja tam prjamo na pellet dobavljaesh antitelo i nujno 10raz menshe chem na falcon... a vot cveta u menja paka chto max 4 tak kak starenkii milenkii FACScalibur u nas i vsjo... smile.gif
i smotrju ja kletki mishinnie... v tumor immunology ja rabotaju... smile.gif i eti kiti toje znakomi... prosto uvidel v Flowjo chtob nujno ispolzovat saturacionnuju koncentraciju posle titracii i xotel sprosit i pereproverit u znajushix ljudei a mojet nepravilno ja rabotaju... ved sam viuchil j ja FACS bez uchebnikov i mojet kakieta probeli v znanii... poetomu otkril etot post... smile.gif anyway ogromnoe vam spasibo vsem... i osobenno za vashu zabotu Дядя ФАКСер vi vsegda detalno otvechaete voprosov kasajushixsja FACS smile.gif...
Участник оффлайн! Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum
 прочитанное сообщение 24.08.2005 19:00     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование
да не за что.
На самом деле, для подобных тем есть раздел "Обмен опытом", а в нем - подраздел "Multicolor flow cytometry".
Welocme to the club! beer.gif

P.S. Надеюсь, Fc block и сыворотку при стейнинге используете?
А то странно, что у вас при работе с конценрациями антител , в 10-100 раз меньше рекомендуемых, вылезает изрядная неспецифика.

P.P.S. К тому же, рекомендуемые концентации всегда даются на 10^6 possibly posititve cells.
Участник оффлайн! Glebber
Постоянный участник
London, UK
 прочитанное сообщение 25.08.2005 00:16     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование
мля, ну и флуд развели.

брать надо ту концентрацию, которая дает лучшее разрешение и меньший фон. иначе говоря, берете и считаете, где лучше соотношение между MFI у positive and negative polulations.
Участник оффлайн! L
Участник
 прочитанное сообщение 25.08.2005 11:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование
(Дядя ФАКСер @ 24.08.2005 17:00)
Ссылка на исходное сообщение  да не за что.
На самом деле, для подобных тем есть раздел "Обмен опытом", а в нем - подраздел "Multicolor flow cytometry".
Welocme to the club! beer.gif

P.S. Надеюсь, Fc block и сыворотку при стейнинге используете?
А то странно, что у вас при работе с конценрациями антител , в 10-100 раз меньше рекомендуемых, вылезает изрядная неспецифика.

P.P.S. К тому же, рекомендуемые концентации всегда даются на 10^6 possibly posititve cells.


da znaju etot klub ja no kakto viprignul iz golovi... poetomu sjuda napisal... smile.gif
da sivorotku ispolzoval (no ne Fc block shef ne pokupaet... uprjamii eek.gif ) no ne bilo ot etogo tolka... a vot Isotype vsegda ispolzuju...
10^6 possibly positive cells. ja to dumal total cell number 10^6...
nigoal123
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость
 прочитанное сообщение Сообщение на английском  23.05.2022 12:03     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование
The secret to 123GOAL good article writing is to 11hilo understand how สล็อต123 to plan and structure a บาคาร่าออนไลน์ piece before slotxo you write it.

A well-structured ลิงค์รับทรัพย์ article allows you to use nigoal your writing skills to sexy gaming best advantage and dreamgaming communicate your ideas nigoal 50รับ100 correctly, concisely, clearly, coherently, and completely.
guest: 123
IP-штамп: frJhOCvSv9ICE
гость
 прочитанное сообщение Сообщение на английском  02.06.2022 12:22     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование
For years there 123VEGA have been FA CHAI SLOT calls for Asia - which JILI SLOT is home to some PRAGMATIC PLAY of the world's สล็อตPG biggest CO2 emitters - to ditch fossil fuels 11HILO to help tackle climate AMB CASINO change. Countries in the region - including FC SLOT its three biggest economies 88KTC China, Japan and India - were criticised last year 123GOAL for not making a bigger.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики 		Назначение кнопок:
   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -  
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 20.04.24 00:41
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024  IPS, Inc.