Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Solian78 |
Может кто работал, подскажите в чем и как лучше растворить imatimib, Glivec (M589,7), для обработки к562, попробовал - 100 mg до 20mM в DMSO (8,48 мл) - инкубировал 1 час на вортексе, остался осадок ~600-700 мкл, знающие люди сказали - нерастворимые компоненты, не дрейфь (закрались смутные сомненья)) профильтровал 0,22 мкм, рассеял клетки К562 по 0,5 млн в мл на 24 well plate, ч\з 24 часа потравил, раститровал с 2 мкМ до 30 nМ, ч\з 24 часа MTS assay - все живые и здоровые Думаю растворять - инкубировать в DMSO overnight при 37С, или в воде или RPMI без FBA??? Помогите, плз. ))) Спасибо!!! Сообщение было отредактировано Solian78 - 26.10.2011 18:03 |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
|
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
|
Solian78 |
(Guest @ 26.10.2011 18:16) это и смущает "Soluble in water (200 mg/ml) and DMSO (100 mg/ml)" я в 8,48 мл растворял изначально К562 переносят 5-6 nM, IC50~230nM, если постепенно приучать будут резистентны, но это совсем другая история ..... так что при 2мкМ должны по правилам жанра сдохнуть Сообщение было отредактировано Solian78 - 26.10.2011 18:00 |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(Solian78 @ 26.10.2011 17:54) это и смущает "Солубле ин щатер (200 мг/мл) анд ДМСО (100 мг/мл)" я в 8,48 мл растворя изначально К562 переносят 5-6 нМ, ИЦ50~230нМ, если постепенно приучать будут резистентны, но это совсем другая история ..... так что при 2мкМ должны по правилам жанра сдохнуть должы - через 48 часов , если не хочешь ждать - подсыпь им бутирату немго |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
|
Solian78 |
(Guest @ 26.10.2011 19:01) Спасибо - как знал, в статье было ч/з 36 часов в ауте, плашку не выкинул, мудренный опытом , завтра будет 48. Буду надеяться, хотя меня этот осадок не оставляет в покое (( |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(Solian78 @ 26.10.2011 18:10) Спасибо - как знал, в статье было ч/з 36 часов в ауте, плашку не выкинул, мудренный опытом , завтра будет 48. Буду надеяться, хотя меня этот осадок не оставляет в покое (( если есть проточник - посмотри заодно клеточный цикл |
Дядя ФАКСер Постоянный участник Nothern Maccaronia, Ticinum |
(Guest @ 26.10.2011 17:15) Верно |
Solian78 |
(Дядя ФАКСер @ 26.10.2011 19:17) Можно, мне так IC50 вывести, потом травить и смотреть экспрессию своих таргетов, разве нет? На проточнике точнее, но сначала можно MTS, а потом на проточник? там 1 мл культуры, на mts - 100 мкл, должно остаться . Сообщение было отредактировано Solian78 - 26.10.2011 18:28 |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(Solian78 @ 26.10.2011 18:23) Можно, мне так ИЦ50 вывести, потом травить и смотреть экспрессию своих таргетов, разве нет? На проточнике точнее, но сначала можно МТС, а потом на проточник? там 1 мл культуры, на мтс - 100 мкл, должно остаться . Как плазмиды готовы будут на проточник ....))) не знаю - я этим "ленивым методам" типа МТТ-МТС никогда не доверял |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(Solian78 @ 26.10.2011 18:32) "На глаз" можно поиметь приключений на свою .... И апоптоз и "ливе-деад" надежней на проточнике особенно для таких "легких линий" |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(Solian78 @ 26.10.2011 18:23) Можно, мне так ИЦ50 вывести, потом травить и смотреть экспрессию своих таргетов, разве нет? На проточнике точнее, но сначала можно МТС, а потом на проточник? там 1 мл культуры, на мтс - 100 мкл, должно остаться . иматиниб индуцирует дифференцировку К562 в еритроцыты - еритроцит мертвый или живой по МТС ? |
Guest IP-штамп: frHWt7eplAB5c гость |
(Guest @ 27.10.2011 08:30) По статьям должны дохнуть , да, к562 эритроидного происхождения , сегодня посмотрел - есть градиент по фенолу кр. значит с препаратом метаболизма меньше, поставил мини МТS, 2 мкМ иматиниб, K+ залил антисептиком, К- к562, если будет градиент с 2мкМ, поставлю полностью, реагент жалко |
Guest IP-штамп: frHWt7eplAB5c гость |
|
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(Guest @ 27.10.2011 09:59) По статьям должны дохнуть , да, к562 эритроидного происхождения , сегодня посмотрел - есть градиент по фенолу кр. значит с препаратом метаболизма меньше, поставил мини МТС, 2 мкМ иматиниб, К+ залил антисептиком, К- к562, если будет градиент с 2мкМ, поставлю полностью, реагент жалко по статьям - часть в апоптоз , часть в еритроцыты |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(Guest @ 27.10.2011 09:59) По статьям должны дохнуть , да, к562 эритроидного происхождения , сегодня посмотрел - есть градиент по фенолу кр. значит с препаратом метаболизма меньше, поставил мини МТS, 2 мкМ иматиниб, K+ залил антисептиком, К- к562, если будет градиент с 2мкМ, поставлю полностью, реагент жалко |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(Guest @ 27.10.2011 09:59) По статьям должны дохнуть , да, к562 эритроидного происхождения , сегодня посмотрел - есть градиент по фенолу кр. значит с препаратом метаболизма меньше, поставил мини МТС, 2 мкМ иматиниб, К+ залил антисептиком, К- к562, если будет градиент с 2мкМ, поставлю полностью, реагент жалко форбол из к562 делает мегакариоциты |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
(Guest @ 27.10.2011 09:59) По статьям должны дохнуть , да, к562 эритроидного происхождения , сегодня посмотрел - есть градиент по фенолу кр. значит с препаратом метаболизма меньше, поставил мини МТС, 2 мкМ иматиниб, К+ залил антисептиком, К- к562, если будет градиент с 2мкМ, поставлю полностью, реагент жалко к562 - очень удобная линия - основная линия в Хуман ЕНКОД Проекте на нее откартировано кучу трансфаков , модификаций гистонов и експрессий генов - можно нифига не делать - все уже сделано |
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
|
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
|
Дядя ФАКСер Постоянный участник Nothern Maccaronia, Ticinum |
(Guest @ 26.10.2011 17:35) "На глаз" можно поиметь приключений на свою .... И апоптоз и "ливе-деад" надежней на проточнике особенно для таких "легких линий" Именно что. Всех дел на полчаса (против 4-5 часов для MTT-MTS) |
Guest IP-штамп: frHWt7eplAB5c гость |
(Дядя ФАКСер @ 27.10.2011 10:49) я что? я не спорю, на зачем возиться, фиксировать отмывать, если и ежу понятно что эксперимент в педальное ведро, например визуально "на глаз" у вас там зарост, вы что все равно на проточник? я своим глазам верю - как-то так |
Guest IP-штамп: frHWt7eplAB5c гость |
(Guest @ 27.10.2011 10:25) к562 - очень удобная линия - основная линия в Хуман ЕНКОД Проекте на нее откартировано кучу трансфаков , модификаций гистонов и експрессий генов - можно нифига не делать - все уже сделано Не расстраивайте меня, надо же по гранту раснано очитаться ))) за бабло а так мкРНК изучаем, понятно что старо как мир |
Дядя ФАКСер Постоянный участник Nothern Maccaronia, Ticinum |
(Guest @ 27.10.2011 11:12) я что? я не спорю, на зачем возиться, фиксировать отмывать, если и ежу понятно что эксперимент в педальное ведро, например визуально "на глаз" у вас там зарост, вы что все равно на проточник? я своим глазам верю - как-то так Не надо смешивать теплое с мягким. Визуальный контроль клеточной культуры перед забором образцов никто не отменял. |
Solian78 |
(Дядя ФАКСер @ 27.10.2011 13:49) Не надо смешивать теплое с мягким. Визуальный контроль клеточной культуры перед забором образцов никто не отменял. таки я об том же, не надо мух с котлетами каждому методу свое применение, если надо грубо прикинуть, почему сразу к проточнику бежать Да, всем спасибо , особенно гостю, все получилось, пойду ic50 считать |
nigoal123 IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE гость |
|
nigoal123 IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE гость |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |