Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
SkyGen Участник Москва |
Под доступностью мы понимаем цены близкие или равные европейским, собственный склад реактивов и оборудования, доставку за 1-3 дня в любой крупный город России. Иными словами, мы делаем все возможное, чтобы поставить Вам качественную продукцию, недорого и быстро. Мы начали с New England Biolabs и у нас получилось! Мы верим в то, что чтобы быть близким к Вам, недостаточно просто выставлять счета и осуществлять доставку. «Логистических» и «каталожных» компаний много и все они известны. Нам же важно глубоко разобраться в теме и быть поддержкой для Вас. Для этого мы публикуем новости, обзоры и высоко ценим любые замечания и критику. Каждый продукт мы «пропускаем» через себя. Анализируем плюсы и минусы, представляем, как и где он будет работать, консультируемся с Вами. И, как результат, создаем методички, семинары и презентации. Мы стараемся угнаться за Вами в научном познании мира, мы стараемся учиться и расти вместе с Вами. Даже уйдя из науки, мы все равно остались в душе искателями и открывателями. Пусть наша работа будет полезна Вам - и в этом мы видим свою реализацию. Мы являемся официальными дистрибьюторами New England Biolabs, QIAGEN, Agilent Technologies, Oxford Nanopore Technologies, 10x Genomics, Macherey-Nagel, NIMAGEN, IDT, Thermo Scientific, SIGMA-ALDRICH, ChemGenes, Bio Molecular Systems, Gilson. У нас есть сервисная служба. Мы осуществляем обслуживание, калибровку и поверку дозаторов, лабораторных весов и ПЦР-амплификаторов различных производителей, а также занимаемся организацией валидации оборудования IQ/OQ. Сообщение было отредактировано SkyGen - 12.02.2018 15:54 |
SkyGen Участник Москва |
Мы продолжаем расширять нашу линейку для колоночного выделения нуклеиновых кислот из самых разных образцов. Сегодня мы хотим обратить внимание всех, кто работает с микроРНК, тотальной РНК, а также с образцами тканей в парафине на новинки для колоночного выделения: Преимущества линейки наборов для выделения РНК от ISOLATE II 1. Безопасность: простой протокол, без использования токсичных химикатов (без фенола) 2. Достоверные результаты: возможность очистить как микро РНК, так и малые РНК (длиной до 200 нуклеотидов) без разрушения, вызываемых использованием фенола 3. Быстрый протокол: без трудоемкого этапа разделения фаз и осаждения спиртом 4. Надежность: без инициируемого фенолом разрушения образцов 5. Использование для дальнейших экспериментов: РНК готова к дальнейшему использованию в большинстве экспериментов. Было показано, что малые РНК с малым содержанием GC могут быть селективно потеряны при очистке с использованим фенола (Kim et al., Molecular Cell 46(6): 2012). Таблица 1. Типы образцов, из которых возможно выделять микро РНК, РНК, ДНК и протеины при помощи наборов для выделения ISOLATE II Давайте подробнее остановимся на каждом из рассматриваемых наборов. Типы выделяемой РНК: 1. большие фрагменты мРНК 2. вирусная РНК 3.рибосомальная РНК (rRNA) 4. малые РНК, такие как микроРНК (miRNA) и короткие интерферирующие РНК (siRNA) Откуда выделяется РНК? 1. кровь/плазма/сыворотка 2. слюна 3. цереброспинальная жидкость (CSF) 4. семенная жидкость 5. вирусы Откуда выделяется вирусная РНК? Кроме перечисленных выше типов образцов, также из культивируемых клеток и тканей. Принцип выделения: Колоночное выделение с использованием аффинного полимера, связывающего РНК разного размера (используется новый тип silica, к которой преимущественно присоединяются малые РНК). Набор не использует фенол и хлороформ. Образцы подвергаются лизису в присутствии гуанидиниум тиоционата, и хаотропных солей, которые деактивируют эндогенные РНКазы и позволяют выделить неповрежденную РНК. Затем, геномная ДНК захватывается колонками и удаляется. Добавляется этанол, и РНК переносится в колонку для выделения РНК. Далее, тотальная РНК задерживается колонкой и может быть избавлена от примесей при промывании. Полученная высокочистая РНК может быть использована в следующих экспериментах: 1. реал-тайм ПЦР (qPCR) 2. реакция обратной транскрипции 3. синтез кДНК 4. секвенирование следующего поколения 5. Nothern blotting Набор обеспечивает выделение и очистку геномной ДНК и тотальной РНК (включая микроРНК) из образцов тканей в парафине. Зафиксированные в парафине ткани характеризуются образованием связок между нуклеиновыми кислотами и белками, и друг с другом. Фиксация также часто характеризуется фрагментацией ДНК с течением времени. Набор позволяет частично избавиться от модификаций, вызванных формалином, увеличивая качество и выход нуклеиновых кислот. Разделительный матрикс в составе колонок позволяет отделять РНК и ДНК от других компонентов клеток. Набор не требует использования хлороформа и фенола. На первом этапе избавляются от парафина при помощи промывки ксиленом и этанолом, далее образцы разлагаются с использованием Протеиназы К и специального буфера. Растворимый лизат собирается для очистки РНК, а оставшийся образец разлагается для выделения ДНК. Лизирующий буфер и этанол добавляются в лизат, содержащий ДНК и РНК и переносят в микроколонки для выделения РНК и ДНК. Связанные нуклеиновые кислоты промываются. Очищенные РНК и ДНК могут использоваться для широкого спектра экспериментов. Набор был разработан для выделения обогащенной микроРНК (размер составляет <200 нуклеотидов), выделение происходит из следующих образцов: 1. культивируемые клетки 2. ткани млекопитающих 3. бактерии 4. кровь 5. другие биологические жидкости Какие типы малых РНК выделяются: 1. регуляторные молекулы РНК (такие например как микроРНК (miRNA) 2. короткие интерферирующие РНК (siRNA), 3. транспортные РНК (tRNA) 4. РНК из 5Sсубъединицы (rRNA) Малые РНК, имеющие длину 20-25 нуклеотидов, вовлечены в регуляцию генной экспрессии при помощи связывания с мессенджер РНК (mRNA) Принцип выделения РНК прикрепляется к колонки при помощи аффинного связывания,при этом при помощи размера пор возможно разделить РНК по размеру. Тотальная РНК, в растворе этанола проходит через связывающую колонку, где большие фрагменты РНК остаются связанными, а малые смываются в супернатант. Далее супернатант, содержащие малые РНК проходит через колонку для выделения малых РНК, где связываются малые молекулы. Набор позволяет выделить и очистить с высоким качеством одновременно следующие три компонента, из одного образца 1. тотальную РНК (включая малые РНК), 2. геномную ДНК 3. белки Выделение может проводиться из следующих образцов: 1. культивируемые клетки 2. ткани млекопитающих 3. биологические жидкости (включая слюну, мочу, семенную жидкость и кровь) 4. бактерии 5. дрожжи, 6. грибы 7. растения Особенно набор подходит для исследователей, которые выделяют макромолекулы из особенно ценных, труднодоступных образцов (таких как результаты биопсии), - потому что это позволяет не проводить фракционирование образца. Также, анализ становится более достоверным, вследствие того, что РНК, ДНК протеины получаются из одного и того же образца. Протокол предотвращает деградацию РНК (при помощи перемешивания образца с гуанидинумом тиоцианатом. Геномная ДНК захватывается и отделяется при помощи ДНК колонки. Оставшийся супернатант погружается в колонку для выделения РНК/протеинов. Далее тотальная РНК (включая микроРНК) связывается с поверхностью колонки, в то время как протеины остаются в растворе. Протеины, оставшиеся в промывном растворе - могут быть нанесены непосредственно на SDS-PAGE гель, для визуального анализа, или очищаться. Набор не содержит фенол и хлороформ. Возможно исследовать одновременно геном, транскриптом и проводить протеомные исследования в одном образце. Очищенная РНК может быть использована для реал-тайм ПЦР, ПЦР с обратной транскрипцией, Nothern Blotting, экспериментах по секвенированию и экспрессии. Полученная ДНК может быть использована для ПЦР, реал-тайм ПЦР, NGS секвенирования, генотипирования. Белки могут быть использованы для SDS-PAGE, Westertn Blotting, 2-D гелей, масс-спектрометрии. Заключение Мы надеемся, что новая альтернатива представленным на рынке методам и продуктам для выделения РНК (и микроРНК) позволит упросить и удешевить проведение экспериментов с использованием РНК. По всем возникающим вопросам, пожалуйста, обращайтесь по электронной почте info@skygen.com! Сообщение было отредактировано SkyGen - 31.03.2015 19:30 Сообщение предложено в колонку новостей, раздел "Информация, связанная с нашей профессией" 01.04.2015 10:07 |
страницы (8): 1 2 3 > » |