Molbiol.ru | Project | Protocols | Programs | Literature Web | Companies | Marketplace | Labor exchange Today's active topics [ Log In* | Register* ] Forum: | |
|
Непонятно - вам нужен штамм Rhodobacter-суперпродуцент фермента или собственно фермент в склянке? Что значит "в колях не получится - пробовали"? Экспрессия? Тогда какой вектор? Может быть, попробовать экспрессировать по частям и ассоциировать их in vitro? |
|
Спаспибо за ответ по порядку <BLOCKQUOTE><font size="1" face="Verdana, Arial">quote:<HR>вам нужен штамм Rhodobacter-суперпродуцент фермента или собственно фермент в склянке<HR></BLOCKQUOTE> Нам нужен препарат фермента, чтоб в перспективе его изучать ЭПР-спектроскопией. В данной бактерии (по сравнению с другими и митохондриями) концентрация фермента в мембране мала, для того, чтоб разрешить потом спектр. Повысив концентрацию фермента даже в 3-5 раз, на современных машинах это можно сделать. Возражение насчет выделения и исследования в "чистом" виде: во-первых выделить подобный фермент пытались и не один раз, но в процессе выделения теряются некоторые свойства (чувствит. к специф. ингибиторам, в определенной степени могут диссоциировать редокс-компоненты (которых там оч. много)). Да и в принципе, так как фермент функционален только в составе мембраны - то это накладывает ограничения на выделение - либо целые клетки, либо т.н. суббактериальные частицы. Идея о очистке ферментаи встраивании его в фосфолипидные везикулы не нова и долго и тщательно проверялась, пока не оч. успешно. <BLOCKQUOTE><font size="1" face="Verdana, Arial">quote:<HR>Что значит "в колях не получится - пробовали"? Экспрессия? Тогда какой вектор?<HR></BLOCKQUOTE> Скажу честно, этого не знаю. Пробовал не я и только отдельные субъединицы - говорят образуются inclusion bodies... <BLOCKQUOTE><font size="1" face="Verdana, Arial">quote:<HR>Может быть, попробовать экспрессировать по частям и ассоциировать их in vitro??<HR></BLOCKQUOTE> Не уверен, но это мало пользы принесет IMHO... Довольно сложный комплекс, железосерные кластеры, флавин... Спасибо... с уважением shure |
|
|
|
это более менее понятно, да... |
totosite IP-stamp: frif60/G4Seok guest |
|
totosite IP-stamp: frif60/G4Seok guest |
|
totosite IP-stamp: frif60/G4Seok guest |
|
totosite IP-stamp: frif60/G4Seok guest |
|
totosite IP-stamp: frif60/G4Seok guest |
|
kimkibang Advanced Member |
|
kimkibang Advanced Member |
|
watchesbiz Advanced Member |
|
watchesonline89 Advanced Member |
|
« Next Oldest · Molecular and cellular biology · Next Newest » |