Rambler's Top100
Lo-Fi Version* Virtual  Russian keyboard  Russian  
Molbiol.ru | Project | Protocols | Programs | Literature
Web | Companies | Marketplace | Labor exchange

Today's active topics  [ Log In* | Register* ]  
   



Forum: 
 

Click to add to Selected Topics* Конкретный вопрос
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Options: I want to be curator* · Track this topic* · Email this topic · Print this topic*
Topic view:* Outline · [ Standard ] · Linear+


 
Reply to this topicStart new topicStart Poll
User is offline!




 old post 19.09.2001 18:43     Report Post         Personal message  Send an e-mail
Quote Post Put in the news column  URL #1 multiquote

Привет всем участникам, так сказать...
У меня довольно конкретный вопрос по поводу мол.биологии - я сам пока во всех этих науках не очень - поэтому прошу совета:
Задача:
у меня есть некая бактерия (Rhodobacter capsulatus), в бактерии есть некий фермент (Complex I - то есть первый путкт их дыхательной цепи) - всего 14 субъединиц и все находятся в одном опероне.
Цель:
сделать вектор этого оперона и вставить его в бактерию - (в E.coli не получится - пробовали) - то есть обратно в Rhodobacter capsulatus. В результате концентрация фермента возрастет (4-6 раз достаточно) и можно будет его мучить ЭПРом. Естественной концентрации недостаточно, даже для новомодных суперЭПРных машин.
Длина оперона - 19K. Сделали ПЦР половинок, потом рестрикции серединных концов по SacI - в настоящий момент есть ети две половинки по 9.5К, их предполагается лигировать и получить целый фрагмент. Потом его надо засунуть в некую плазмиду и потом в клетку. К сожалению у етого родобактера толстая стенка наружняя и электропорацией это сделать довольно сложно (как специалисты говорят). Поэтому придется, видимо, использовать др. метод с клетками хелперами.
Вопросы:
1. По какому принципу выбирать и где взять подходящую плазмиду ? Насколько я понимаю необходимо чтобы могла жить в Родобактере (а), делала мало копий себя (б) и подходила по сайтам рестрикции (NdeI c начала и XbaI с конца) (в), вероятно, надо еще и чтоб был промотор, так как в непонятно, есть собственный промотор в опероне или нет. Какие еще могут быть требования ?
2. Связываться с клетками хелперами и второй плазмидой как-то не оч. хочется - потому возможно ли засунуть плазмиду все таки путем электропорации ??
Хорошо бы конкретный совет или ссылку киньте на ресурс...
заранее благодарен
shure
User is offline!




 old post 20.09.2001 21:00     Report Post         Personal message  Send an e-mail
Quote Post Put in the news column  URL #2 multiquote

Наводящие вопросы:
Непонятно - вам нужен штамм Rhodobacter-суперпродуцент фермента или собственно фермент в склянке? Что значит "в колях не получится - пробовали"? Экспрессия? Тогда какой вектор? Может быть, попробовать экспрессировать по частям и ассоциировать их in vitro?
User is offline!




 old post 21.09.2001 21:11     Report Post         Personal message  Send an e-mail
Quote Post Put in the news column  URL #3 multiquote

Привет...
Спаспибо за ответ
по порядку
<BLOCKQUOTE><font size="1" face="Verdana, Arial">quote:<HR>вам нужен штамм Rhodobacter-суперпродуцент фермента или собственно фермент в склянке<HR></BLOCKQUOTE>
Нам нужен препарат фермента, чтоб в перспективе его изучать ЭПР-спектроскопией. В данной бактерии (по сравнению с другими и митохондриями) концентрация фермента в мембране мала, для того, чтоб разрешить потом спектр. Повысив концентрацию фермента даже в 3-5 раз, на современных машинах это можно сделать. Возражение насчет выделения и исследования в "чистом" виде: во-первых выделить подобный фермент пытались и не один раз, но в процессе выделения теряются некоторые свойства (чувствит. к специф. ингибиторам, в определенной степени могут диссоциировать редокс-компоненты (которых там оч. много)). Да и в принципе, так как фермент функционален только в составе мембраны - то это накладывает ограничения на выделение - либо целые клетки, либо т.н. суббактериальные частицы. Идея о очистке ферментаи встраивании его в фосфолипидные везикулы не нова и долго и тщательно проверялась, пока не оч. успешно.
<BLOCKQUOTE><font size="1" face="Verdana, Arial">quote:<HR>Что значит "в колях не получится - пробовали"? Экспрессия? Тогда какой вектор?<HR></BLOCKQUOTE>
Скажу честно, этого не знаю. Пробовал не я и только отдельные субъединицы - говорят образуются inclusion bodies...
<BLOCKQUOTE><font size="1" face="Verdana, Arial">quote:<HR>Может быть, попробовать экспрессировать по частям и ассоциировать их in vitro??<HR></BLOCKQUOTE>
Не уверен, но это мало пользы принесет IMHO... Довольно сложный комплекс, железосерные кластеры, флавин...
Спасибо...
с уважением shure
User is offline!




 old post 25.09.2001 22:20     Report Post         Personal message  Send an e-mail
Quote Post Put in the news column  URL #4 multiquote

Для облегчения электропорации можно попробовать подобрать режим подращивания в богатой среде, чтоб клеточная стенка не успевала утолщаться. У колей есть разные методы, надо взглянуть в старые книги, когда эффективность была небольшой и изголялись по черному. В общем снимать на порацию где-то на 13-12 ОД от плато роста. Среду побогаче, клеток поменьше и вперед.
User is offline!




 old post 26.09.2001 15:10     Report Post         Personal message  Send an e-mail
Quote Post Put in the news column  URL #5 multiquote

спасиббо...
это более менее понятно, да...
totosite
IP-stamp: frif60/G4Seok
guest



 old post Post on English  18.12.2020 07:39     Report Post       
Quote Post Put in the news column  URL #6 multiquote

How can you think of this?토토커뮤니티사이트I thought about this, but I couldn't solve it as well as you.토토커뮤니티I am so amazing and cool you are. I think you will help me. I hope you can help me.토토사이트
totosite
IP-stamp: frif60/G4Seok
guest



 old post Post on English  18.12.2020 07:40     Report Post       
Quote Post Put in the news column  URL #7 multiquote

I want to talk to you about your writing. If you think so too, come to me.토토사이트
totosite
IP-stamp: frif60/G4Seok
guest



 old post Post on English  18.12.2020 07:41     Report Post       
Quote Post Put in the news column  URL #8 multiquote

I was thinking a lot before reading this article.토토커뮤니티But reading this article solved all the problems.토토커뮤니티사이트So I expressed my gratitude to my blog. My blog is "토토사이트"
totosite
IP-stamp: frif60/G4Seok
guest



 old post Post on English  18.12.2020 07:42     Report Post       
Quote Post Put in the news column  URL #9 multiquote

Your writing is perfect!! You gave me great joy!! Please come to my site and give your opinion. 토토사이트
totosite
IP-stamp: frif60/G4Seok
guest



 old post Post on English  18.12.2020 07:43     Report Post       
Quote Post Put in the news column  URL #10 multiquote

Read my article and let us know your opinion.토토사이트I want to solve this problem. I think you can solve it enough.토토사이트
User is offline! kimkibang
Advanced Member



 old post Post on English  30.01.2021 13:28     Report Post         Personal message  Send an e-mail
Quote Post Put in the news column  URL #11 multiquote

this is one very interesting post. I like the way you write and I will bookmark your blog to my favorites.토토커뮤니티
User is offline! kimkibang
Advanced Member



 old post Post on English  30.01.2021 13:32     Report Post         Personal message  Send an e-mail
Quote Post Put in the news column  URL #12 multiquote

Nice information, valuable and excellent design, as share good stuff with good ideas and concepts.메이저사이트
User is offline! watchesbiz
Advanced Member



 old post Post on English  28.09.2021 05:38     Report Post         Personal message  Send an e-mail
Quote Post Put in the news column  URL #13 multiquote

https://wanelo.co/replicarolexwatches
https://musescore.com/fakerolexwatches
https://www.racked.com/users/Replicarolexwatches
https://sketchfab.com/Rolexrelicawatches
http://www.video-bookmark.com/bookmark/433...eplica-watches/
https://www.slideserve.com/ReplicawatchesUK...pt-presentation
https://www.theverge.com/users/Replicarolexwatches
https://www.yumpu.com/en/document/read/6532...lica-watches-uk
https://online.flippingbook.com/view/152275247/
https://www.instapaper.com/p/8767342
https://www.bigblueview.com/users/Replicarolexwatches
https://weheartit.com/watcheshutuk
https://sites.google.com/view/replicarolexwatches24/home
https://www.indiehackers.com/post/hints-on-...atch-113aef73a9
http://replicawatchesuk.esportsify.com/for...ica-rolex-watch
User is offline! watchesonline89
Advanced Member



 old post Post on English  24.12.2022 12:19     Report Post         Personal message  Send an e-mail
Quote Post Put in the news column  URL #14 multiquote

https://62e8ce2ae5d50.site123.me/
https://www.vingle.net/posts/4647029
https://eatsleepride.com/c/383272
https://anotepad.com/notes/prkpsawt
https://demo.wowonder.com/1665548793521727_195426
https://linktr.ee/omegawatches89
https://omegawatches89.gumroad.com/p/reason...replica-watches
https://omegawatches93.mystrikingly.com/
https://writer.zoho.com/writer/open/k3enw04...fea14e95e0ee806
https://www.edocr.com/v/rakkz4oq/omegawatch...-replica-online
https://diigo.com/0pigfx
https://62e8ce2ae5d50.site123.me/blog/reaso...replica-watches
https://www.worldranklist.com/preview/bookm...s-Online-Store-
https://omegawatches89-95.webselfsite.net/contact
https://form.jotform.com/223252982096057

*





Name:

 Enable Smilies · Show Smilies Pop Up Window
Icons designation:

   Say THANKS to the author — say THANKS to the author
   Delete Post — delete
   Edit Post — edit
   Put in the news column — put in the news column
   Quote Post — quote the post
   multiquote  not included/multiquote included — quote several posts
   Report SPAM — mark spam message
   Report Post — report post to the moderator
   User is online!/User is offline! — author online/offline
   Photo — photo of the author

   - other designations -
 
   *
« Next Oldest · Molecular and cellular biology · Next Newest »
Fast ReplyReply to this topicStart new topic

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Helicon · Dia-m · InterLabService · Beckman Coulter · SkyGen · OPTEC · BIOCAD · Evrogen · Syntol · Bioline · Sartorius · Khimexpert · SibEnzyme · Tecan · Danies · NPP «TRIS» · Bialexa · FizLabPribor · Genotek · ATG Service Gene · Biogen-Analitika
Your forum  ·  editor@zbio.net  ·  Time is now: 29.03.24 17:45
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft