Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
watchesonline89 | Отправлен 25.12.2022 10:34 |
watchesbiz | Отправлен 11.11.2021 10:50 |
MMM | Отправлен 08.06.2019 08:57 |
(anti anti @ 07.06.2019 19:51) Тогда как пероксидаза из сыворотки сможет зацепиться за мембрану или какую другую поверхность? К тому же пользоваться сывороткой, а не аффинно-очищенными АТ - это моветон. |
|
anti anti | Отправлен 07.06.2019 18:51 |
не не никаких молок, только казеинат натрия, буфер нормальный вроде, с бса | |
MMM | Отправлен 07.06.2019 15:51 |
Если вы нормально забили мембрану и используете хороший ,буфер, препятствующий неспецифическому связыванию, то - нет. Кстати, при забивке молоком фон может теоретически давать лактопероксидаза, но я с этим никогда не сталкивался. |
|
anti anti | Отправлен 07.06.2019 12:46 |
Спасибо МММ что откликнулись, чтоб я без вас делал! Человеческая сыворотка - как источник антител. Но не суть, вот смотрите, ставим блот или ифа или вообще дот блот без эф разделения, не важно что сорбируем(какой-либо антиген) на пластик/мембрану, далее капаем сыворотку => капаем конъюгат с HRP => капаем ТМБ и детектируем сигнал и может ли так получится что мембрана посинела/проба окрасилась из-за эндогенной пероксидазы сыворотки а не HRP конъюгата? | |
MMM | Отправлен 07.06.2019 12:27 |
А откуда на блоте человеческая сыворотка. Если это ЭФ-проба, то там все пероксидазы хорошо так проварились. Но даже если мы допустим, что они частично ренатурировали, то фона они давать не могут, а должны давать артефактные дополнительные бэнды. | |
anti anti | Отправлен 07.06.2019 10:58 |
Асалам алейкум братья! Вопрос такой: могут ли конкурировать за субстрат эндогенные пероксидазы человека (из сыворотки) и пероксидаза хрена (из конъюгата) и путём восстановления перекиси и окрашивания хромогена в ИФА или вестерне давать фон? | |
Посмотреть тему (откроется в новом окне) | |