Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
OlegB |
|
А Постоянный участник Россия |
|
Den Постоянный участник |
|
А Постоянный участник Россия |
|
OlegB |
|
OlegB |
|
|
Че то мы постоянно 16S делаем на обычном препарате Taq(Moscow)из ГНИИгенетика (по-моему им его Патрушев поставляет)и ничего! |
OlegB |
|
SergeiK |
|
OlegB |
|
|
И что, так ни кто и не догадался как от этого "безматричного синтеза избавиться? |
|
Автор - OlegB: --- ferment@genetika.ruПолимераза, полимераза. Во, а дайте телефончик или майл производителя или продавца плз! --- phone: 7 095 3150065 |
YANGBOTAN |
|
Viktoria1510 Постоянный участник USA |
|
|
|
|
Логично. А можно просто меньше полимеразы брать и циклов поменьше. Конечно, это если активность хорошая. Но... А если это загрязнение? Искать где оно, заказывать новые реагенты... Время. Да и возни сколько. ВНИМАНИЕ!!! АТТРАКЦИОН НЕВИДАННОЙ ЩЕДРОСТИ!!! или КАК ИЗБАВИТЬСЯ ОТ ЗАГРЯЗНЕНИЯ dsDNA алчным коммерсантам читать, а тем более употреблять категорически запрещается! Делаете мастер-mix: всё кроме матрицы. Берёте Sau3A и туда её!!! 20-30 мин на 37°C, 15 мин на 70°C и ВСЁ!!! Нет Sau3A - берите любую другую четвёрку, но смотрие чтоб одноцепочечную ДНК не ела - Rsa, да что угодно. ©VLAD2© Я это очень давно придумал и не от хорошей жизни само собой, однако до сих пор время от времени пользуюсь |
|
|
Viktoria1510 Постоянный участник USA |
Он и двух валентные катионы убирает вроде бы. |
|
"Кстати, а почему одноцепочечную ДНК резать нельзя? В совокупности со смайликом "подмигивание" - не понял, это шютка юмора или так и до некоторых не дошло? На всякий случай поясняю: Что бы по этому поводу не писали, но некоторые рестриктазы одноцепочечную ДНК режут. Другие - наоборот, точно не режут. мастер-mix содержит в том числе и праймеры. Они однцепочечные. Их резать не надо. Они еще пригодятся. "несколько рестриктаз брать" можно, но не нужно. Для прдотвращкния ПЦР достаточно разрезать "матрицу" один раз. |
|
Автор - <опять пришёл>: Эээ... пардон, пропустил, что Вы ПЦРную смесь рестриктазите, думал голый фермент. Тогда уж лучше ДНКазить, без праймеров, хотя может и неважно.To <-> \"Кстати, а почему одноцепочечную ДНК резать нельзя? В совокупности со смайликом \"подмигивание\" - не понял, это шютка юмора или так и до некоторых не дошло? На всякий случай поясняю: Что бы по этому поводу не писали, но некоторые рестриктазы одноцепочечную ДНК режут. Другие - наоборот, точно не режут. мастер-mix содержит в том числе и праймеры. Они однцепочечные. Их резать не надо. Они еще пригодятся. "Для прдотвращкния ПЦР достаточно разрезать "матрицу" один раз" Может конкретно для рибосомальных генов и неважно, но строго говоря, может и нескольких не хватить, как фишка ляжет. 2 Viktoria1519: Спасибо! Интересный реагент, любопытно из чего состоит. |
Andrew Постоянный участник Москва |
|
|
А оказалось это у них слэнг такой. Они его по-ходу сами выдумывают, сами его и говорят. Типа диалект. Скоро в словари внесут. |
|
Ну а как праймеры продуктом ПЦР загязнены, тогда что? Новые заказывать? М ожно и старыми обойтись "но строго говоря" как раз таки одного хватит. Попробуй на досуге. |
OlegB |
|
|
А если бы он вез патроны? :-))) Речь шла о контаминации фермента бактериальной ДНК, причем тут праймеры-то? Насчет "одного раза", четверка режет ДНК в среднем каждые 256 букв, может и меньшие и сильно большие фрагменты нарезать. Вы попробовали, у Вас сработало - рад за Вас, но это не общий случай. [Текст переведён с транслита] |
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
Ufa1688 Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |