molbiol.ru -> Taq полимераза безматричный синтез

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Taq полимераза безматричный синтез

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

OlegB

05.11.2004 17:44

URL #1

Благородные Доны, подскажите, кто знает, где вы покупаете в России Taq полимеразу без ДНК (ПЦР с универсальными бактериальными праймерами – 16S, 23S)

А
Постоянный участник
Россия

05.11.2004 19:45

URL #2

А что, есть с ДНК?

Den
Постоянный участник

05.11.2004 19:47

URL #3

А при чем здесь безматричный синтез?

А
Постоянный участник
Россия

05.11.2004 20:28

URL #4

А м.б. ДНК в других компонентах?

OlegB

09.11.2004 18:49

URL #5

Безматричный синтез - это когда ДНК не добавил а ПЦР продут получил (сленг это такой, не путать с зас-ром, пардон с контаминацией

. А ДНК хозяйская практически всегда в партиях полимераз есть, а если удалось очистится, то активность в разы падает. Короче такая проблема существует, если вы пытаетесь поднять ПЦР продукт универсальными праймерами для бактерий.

09.11.2004 19:01

URL #6

"Безматричный синтез - это когда ДНК не добавил а ПЦР продут получил"
Ааа, ну бум знать

Только в вашем-то случае, матрица присутствует, хотя и паразитная. Такая проблема есть в основном с самопальнымой Taq, которую просто сульфатом аммония осаждают. Если ввести His-таги и почистить на никелевых колонках, это надо будет постараться "безматрицный синтез" осуществить

[Текст переведён с транслита]

[Текст переведён с транслита]

[Текст переведён с транслита]

OlegB

10.11.2004 13:45

URL #7

Не, разговор как раз про никелевые коммерческие TAqPol, про "варенку" вообще речь не ведется

10.11.2004 14:05

URL #8

А Вы уверены что это из-за Taq ?!
Че то мы постоянно 16S делаем на обычном препарате Taq(Moscow)из ГНИИгенетика (по-моему им его Патрушев поставляет)и ничего!

OlegB

10.11.2004 14:30

URL #9

Полимераза, полимераза. Во, а дайте телефончик или майл производителя или продавца плз!

SergeiK

10.11.2004 15:12

URL #10

Есть в Иркутске компания НТИ. Они возят из ГНИИгенетика Московскую в том числе.

OlegB

10.11.2004 16:47

URL #11

Ладно, уговорил речистый...

10.11.2004 19:35

URL #12

Ого скока вас страждущих!
И что, так ни кто и не догадался как от этого "безматричного синтеза избавиться?

10.11.2004 20:38

URL #13

Автор - OlegB:
Полимераза, полимераза. Во, а дайте телефончик или майл производителя или продавца плз!

--- ferment@genetika.ru
--- phone: 7 095 3150065

YANGBOTAN

11.11.2004 21:13

URL #14

А что такое "Taq" объясните, пожалуйста? Я сего не знаю.

Viktoria1510
Постоянный участник
USA

11.11.2004 22:41

URL #15

Лично я избавлялась обработкой Taq ДНКазой с последующим избавлением от нее с помощью реагента от Ambion. Мне помогло для моего гена.

11.11.2004 22:45

URL #16

А от магния Вы как потом избавляетесь? или не избавляетесь? И что за реагент от Амбиона, раньше они вроде советовали просто прогревать?

12.11.2004 20:25

URL #17

To Victoria1510
Логично.
А можно просто меньше полимеразы брать и циклов поменьше. Конечно, это если активность хорошая.
Но... А если это загрязнение? Искать где оно, заказывать новые реагенты... Время.
Да и возни сколько.
ВНИМАНИЕ!!!
АТТРАКЦИОН НЕВИДАННОЙ ЩЕДРОСТИ!!!
или
КАК ИЗБАВИТЬСЯ ОТ ЗАГРЯЗНЕНИЯ dsDNA
алчным коммерсантам читать, а тем более употреблять категорически запрещается!
Делаете мастер-mix: всё кроме матрицы. Берёте Sau3A и туда её!!! 20-30 мин на 37°C, 15 мин на 70°C и ВСЁ!!! Нет Sau3A - берите любую другую четвёрку, но смотрие чтоб одноцепочечную ДНК не ела - Rsa, да что угодно.
©VLAD2©
Я это очень давно придумал и не от хорошей жизни само собой, однако до сих пор время от времени пользуюсь

12.11.2004 23:21

URL #18

Гениально!

Тогда уж лучше несколько рестриктаз брать. Кстати, а почему одноцепочечную ДНК резать нельзя? Это штоб не злить духов стремлением к перфекционизму?

Viktoria1510
Постоянный участник
USA

13.11.2004 05:08

URL #19

Я пользовалась вот этим http://www.ambion.com/catalog/ProdGrp.html...15&fkProdGrp=48
Он и двух валентные катионы убирает вроде бы.

15.11.2004 20:00

URL #20

To <->
"Кстати, а почему одноцепочечную ДНК резать нельзя?
В совокупности со смайликом "подмигивание" - не понял, это шютка юмора или так и до некоторых не дошло?
На всякий случай поясняю:
Что бы по этому поводу не писали, но некоторые рестриктазы одноцепочечную ДНК режут. Другие - наоборот, точно не режут.
мастер-mix содержит в том числе и праймеры. Они однцепочечные. Их резать не надо. Они еще пригодятся.
"несколько рестриктаз брать" можно, но не нужно. Для прдотвращкния ПЦР достаточно разрезать "матрицу" один раз.

15.11.2004 21:17

URL #21

Автор - <опять пришёл>:
To <->
\"Кстати, а почему одноцепочечную ДНК резать нельзя?
В совокупности со смайликом \"подмигивание\" - не понял, это шютка юмора или так и до некоторых не дошло?
На всякий случай поясняю:
Что бы по этому поводу не писали, но некоторые рестриктазы одноцепочечную ДНК режут. Другие - наоборот, точно не режут.
мастер-mix содержит в том числе и праймеры. Они однцепочечные. Их резать не надо. Они еще пригодятся.

Эээ... пардон, пропустил, что Вы ПЦРную смесь рестриктазите, думал голый фермент. Тогда уж лучше ДНКазить, без праймеров, хотя может и неважно.
"Для прдотвращкния ПЦР достаточно разрезать "матрицу" один раз"
Может конкретно для рибосомальных генов и неважно, но строго говоря, может и нескольких не хватить, как фишка ляжет.

2 Viktoria1519: Спасибо! Интересный реагент, любопытно из чего состоит.

Andrew
Постоянный участник
Москва

16.11.2004 14:27

URL #22

Хм! А я думал, что безматричный синтез это выступающие буквы на концах...

16.11.2004 20:07

URL #23

Все так думали. Ассоциированая активность терминальной трансферазы. Или терминально-трансферазная активность?
А оказалось это у них слэнг такой.
Они его по-ходу сами выдумывают, сами его и говорят.
Типа диалект. Скоро в словари внесут.

16.11.2004 20:12

URL #24

А до прочерка даже на третьи сутки не доходит. "Богатый опыт" борьбы с контаминациями видать сказывается.
Ну а как праймеры продуктом ПЦР загязнены, тогда что?
Новые заказывать? М
ожно и старыми обойтись
"но строго говоря" как раз таки одного хватит. Попробуй на досуге.

OlegB

18.11.2004 17:20

URL #25

kiss господа

18.11.2004 17:44

URL #26

"Ну а как праймеры продуктом ПЦР загязнены, тогда что? "
А если бы он вез патроны? :-))) Речь шла о контаминации фермента бактериальной ДНК, причем тут праймеры-то?
Насчет "одного раза", четверка режет ДНК в среднем каждые 256 букв, может и меньшие и сильно большие фрагменты нарезать. Вы попробовали, у Вас сработало - рад за Вас, но это не общий случай.

[Текст переведён с транслита]

vadimchik152a
Постоянный участник

06.09.2022 21:51

URL #27

Не следует, однако, забывать, что дальнейшее развитие различных форм деятельности позволяет выполнить важные задания по разработке существенных финансовых и административных условий. https://starity.hu/profil/337789-vlad41m9/

vadimchik152a
Постоянный участник

11.09.2022 21:44

URL #28

Хотя на самом деле уже очевидно, что новая модель организационной деятельности ни коим образом не противоречит нашей теории, а скорее наоборот, способствует улучшению форм воздействия. https://starity.hu/profil/338869-dmitrij18c1/

vadimchik152a
Постоянный участник

02.10.2022 19:22

URL #29

Таким образом новая модель организационной деятельности ни коим образом не противоречит нашей теории, а скорее наоборот, способствует улучшению форм воздействия. https://www.unanimedworld.com/profile/nikita01u/profile

Ufa1688
Постоянный участник

03.10.2022 19:28

URL #30

Seaman Recruit Ryan ufa1688 Mays was acquitted on ราคาบอล charges of willful hazarding สล็อตออนไลน์ of a vessel and aggravated UFA1688 arson, the Navy said in a statement ลิงค์รับทรัพย์ following a court martial แฮนดิแคป in which a judge ruled บอลสเต็บ there was not enough evidence ufabet เข้า สู่ระบบ that Mays set the fire that destroyed ufa1688auto the USS Bonhomme Richard ufa1688 auto ทางเข้า more than two years ago.

vadimchik152a
Постоянный участник

04.10.2022 23:44

URL #31

Значимость этих проблем настолько очевидна, что начало повседневной работы по формированию позиции укрепляет нас, в нашем стремлении улучшения позиций, занимаемых участниками в отношении поставленных задач. https://www.nicolewilde.com/profile/leonid00p/profile

vadimchik152a
Постоянный участник

05.10.2022 01:01

URL #32

Повседневная практика показывает, что рамки и место обучения кадров укрепляет нас, в нашем стремлении улучшения новейших вариантов поиска решений. https://www.childrenaction.org/profile/maks88d/profile

vadimchik152a
Постоянный участник

20.02.2023 00:42

URL #33

Товарищи, дальнейшее развитие различных форм деятельности играет важную роль в формировании правильных направлений развития. https://www.techsling.com/author/vjacheslav83k/

vadimchik152a
Постоянный участник

05.03.2023 23:36

URL #34

On the other hand beginning of everyday work on forming of position not which character does not conflict with our theory, and rather vice versa, assists the improvement of correct directions of development. https://timeswriter.com/members/dmitrij87l7/profile/

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.