Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Antibody -- purification --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
guest: Vyach
IP-штамп: frWKf2AKRVu2Q
гость



 прочитанное сообщение 08.07.2006 01:14     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Уважаемые коллеги!
Есть следующая проблема: имеется лиофилизированная сыворотка ( с титром Ат~1:50). Для иммунки она соответственно не годится, нужно чистить.
Тут есть два варианта либо сыворотку пустить в аффинную хроматограцию, либо провести стандартное высаливание сульфатом аммония и последующим лиализом, но тогда можно потерять сами АТ, т.к. их количество слишком мало.
ЧТО ЖЕ ДЕЛАТЬ??? КАК БЫТЬ!!!
guest: yMHuK
IP-штамп: frydUUByF2C9E
гость



 прочитанное сообщение 08.07.2006 04:48     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

А много ли антигена? А то, может, антиген привязать, да на колонке почистить?
Guest
IP-штамп: froVJtvAFK.QQ
гость



 прочитанное сообщение 08.07.2006 10:16     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Антигена мало (макс. 1мг в мл) и он не очень чистый.
т.е. Вы предлагаете растворить сывототку в буфере и на колоночку?
А на чем лучше на сефадексе или сефарозе? и чем их можно проактивировать?
Участник оффлайн! Fritz
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 08.07.2006 11:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

2 Vyach: Вы титр сыворотки в ИФА или ДРИД определяли? Соответственно если она вам для ИФА нужна,тогда надо ПЭГом осадить,а потом на CM-Sepharos'e отделить осадитель и контаминирующие белки (т.е. все кроме IgG уйдет в "проскок"). Соберете 2 пик,поставьте ЭФ-контроль,концентрируйте на Амиконе и т.п. и провертье титр,тем методом,для которого сыворотку планировали применять.
Guest
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 08.07.2006 15:32     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

-- Для иммунки она соответственно не годится.
Что такое "иммунка"? И откуда такое безаппеляционное мнение о пригодности?
--- сыворотку пустить в аффинную хроматограцию
-Вы все о грации, а мы тут про антитела базарим. smile.gif-

В этом случае вы избавитесь от альбумина и от большинства неспецифичных антител в сыворотке.

--- провести стандартное высаливание сульфатом аммония и последующим лиализом,
В этом случае вы избавитесь в основном от альбумина и не избавитесь от неспецифических антител.

---но тогда можно потерять сами АТ, т.к. их количество слишком мало.

Слишком мало это сколько?

Потерять можно и на аффиной колонке. Например антитела не выдержат экстремальных рН.

---антигена мало (макс. 1мг в мл)
а по мне так воз и маленькая тележка, или у вас его несколько мкл.

---и он не очень чистый.
Примеси в антисывороткой окрашиваются? Если нет, то читоту можно считать достаточной для аффиной очистки.

---т.е. Вы предлагаете растворить сывототку в буфере и на колоночку?
Мил. чел. мы тебе предложить ничего не можем ибо тему ты излагаешь мутно, подробности давай. Растворять сыворотку для аффинки часто совсем не обязательно.

---А на чем лучше на сефадексе или сефарозе? и чем их можно проактивировать?
Сефадекс для этого совершенно не годится, уж лучше целлюлоза. А активировать тем что есть, бромциан, эпоксиактивация , цианурхлорид гидроксисукцинимидные эфиры, периодаты и тд .
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 08.07.2006 16:50     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

1.Практически полностью согласен с последним оратором...
2.если титр в самом деле при ЕЛИСЕ в педаль такую сыворотку .......
ну если уж извращаться то имхо в начале белокА или белок Г( не понятно откуда антитела) сефароза, ну а потом аффинная хроматография ..... хотя повторюсь если такой титр легче и проще и правильней в педаль и получить новую анти-сыворотку.....
3.Растворять сыворотку для аффинки часто совсем не обязательно.
не понятно что сухую сыворотку на колонку сыпать??????
.Да Париж не знал такого разврата.....wink.gif
Участник оффлайн! Mac-1
Постоянный участник
оттуда



 прочитанное сообщение 10.07.2006 07:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

при титре сыворотки 1:50 у вас финальная концентрация АТ в районе 1 мкМ. Т.е. 10 е-6 М. Т.е почти вся ваша реакция - низкоафинная неспецифика. Том1 прав - проще все это сразу вылить, примерно с таким же успехом можно чистить любую сыворотку.
А если положение пиковое, ничего больше нет, но "очень хочется", а сыворотки много (очень много), и лишнего времени - тоже много, то можно попытатся выделить АТ на АГ. Если АГ у вас очень мало (несколько десятков мкг), то его проще всего биотинилировать (есть киты для этого, например у Пирса) и посадить на стрептавидин-агарозу (многие компании продают) - в этом случае "эффективность посадки" вашего АГ будет близка к 100% (против 10-50% при стандартной посадке 1 мг/мл на бромциан- или эпокси-активириванную агарозу).
А если выделять ИГ на Протеин А/Г или осаждением - то проще взять центрикон на 50 кДа и сконцентрировать сыворотку раз в 20-50 - в этом случае, даже при полной удаче (ничего не потеряете), у вас после рабочего разведения будет финальная концентрация ИГ все те же 1 мкМ = неспецифика, зато времени и усилий это займет на порядок меньше. wink.gif
Участник оффлайн! Ale-x
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.04.2008 18:27     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

(Guest @ 08.07.2006 15:32)
Ссылка на исходное сообщение  ---А на чем лучше на сефадексе или сефарозе? и чем их можно проактивировать?

Сефадекс для этого совершенно не годится, уж лучше целлюлоза. А активировать тем что есть, бромциан, эпоксиактивация , цианурхлорид  гидроксисукцинимидные эфиры, периодаты и тд .


Кто-нибудь знает, почему сефадекс не годится для активации? Только размеры пор лимитируют, или есть какие-то химические причины?
Участник оффлайн! laska56
Участник



 прочитанное сообщение 02.04.2008 18:54     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Что за антиген? Схема иммунизации?
Участник оффлайн! Fritz
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  03.04.2008 18:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Sephadex-vrode iz dextrana, a sepharose iz agarozy, proshe aktivirovat poslednuju!)))
Участник оффлайн! Ale-x
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 03.04.2008 18:59     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(Fritz @ 03.04.2008 18:54)
Ссылка на исходное сообщение  Sephadex-vrode iz dextrana, a sepharose iz agarozy, proshe aktivirovat poslednuju!)))


Это почему? Декстран лучше окисляется, у него гидроксильных групп больше smile.gif
Участник оффлайн! Fritz
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  06.04.2008 22:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Mne dumaetsja,shivki tam ne takie stabilnije i pri okislenii,sorbent prosto nachnet valitsja.
Guest
IP-штамп: frNFBHcL2JSwo
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  06.04.2008 23:01     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

Fritz, zhmite pozhalujsta na knopku "Translit", a to glaza bolyat vashu galimat'ju chitat'
Участник оффлайн! Fritz
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.04.2008 12:31     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

2 Guest: Koli bolyat,ne chitajte!
Участник оффлайн! Ale-x
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 08.04.2008 10:45     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

(Fritz @ 06.04.2008 22:58)
Ссылка на исходное сообщение  Mne dumaetsja,shivki tam ne takie stabilnije i pri okislenii,sorbent prosto nachnet valitsja.


Нет, сорбент не валится, т.е. по крайней мере не растворяется, но я боюсь, не будет ли белок пришиваться преимущественно по коротким продуктам распада. Никто не пробовал?

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 07.12.19 20:19
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft