Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* обработка тканей коллагеназой перед выделением клеток
Компания Biocommerce - официальный дистрибьютер продукции компаний Miltenyi Biotec GmbH (Германия) и RanD S.r.l. (Италия).
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
solo
IP-штамп: friYUXApcTu9A
гость



 прочитанное сообщение 09.06.2005 20:48     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Кто что моэжет рассказать о принципах и методических особенностях обрабтки тканей коллагеназо , для получения из этих тканей клеток?
А то сегодня с оседи попробовали - одни клетки после инкубации, а ткань кудато исчезла?
Они ко мне, а я к Вам.

Solo.
Alex
IP-штамп: friYUXApcTu9A
гость



 прочитанное сообщение 10.06.2005 08:31     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

продолжаем диалог:

принципы:
1. ВАРИТЬ -
смотря что - как правило паренхиматозные органы, а варится соединительная ткань (коллаген) между клетками, поэтому клетки отваливаются
смотря чем - коллагеназы как известно бывают разные - разных типов A-D, разных производителей, из разных источников (чаще всего из клостридий)
как -
если невозможно перфузировать орган раствором коллагеназы через сосудистое русло по причинам: малых размеров органа и сосудов, отсутствия микроскопической техники, недостаточно зрелой ткани (например эмбриона), лени..., то орган механически измельчают (ножницы, скальпель) в растворах, "не поддерживающих межклеточные контакты" - без Ca и Mg , ЭДТА... (EBSS, HBSS-CMF, PBS, среда).
далее кусочки ткани помещаются в раствор коллагеназы (концентрации разные......), условия:
- +37С (инкубатор)
- на шейкере
- наличие Ca++ и отсутствие сыворотки в среде (растворе) коллагенизации
- время - в зависимости от концентрации (5-30 мин).
- кратность 1-2 раза (если 2, то отмывка обязательна)
----------------------------------------
2. НЕ ПЕРЕВАРИТЬ!
остановить действие коллагеназы, а то сваришь не только коллаген, но и все свои клетки
методы:
- +4C (холод)
- сыворотка
- разбавление (отмывка)
- ЭДТА


ну вот только 2 принципа, остальное тонкости - какой орган, какие цели и задачи, какая коллагеназа и т.д.
picarus
IP-штамп: friYUXApcTu9A
гость



 прочитанное сообщение 10.06.2005 09:53     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Поправки
1. В средах без кальция тоже работает, видимо, для активности фермента достаточно следов, которые имеются в самой ткани
2. заблуждение, что коллагеназу может инактивировать сыворотка. Это Alex малость попутал с трипсином. Сыворотка может только замедлить действие - "отвлекает" активность фермента на сывороточные белки. В отличие от свиного трипсина, коллагеназу получают из бактерий - им сывороточные белки пофиг
picarus
IP-штамп: friYUXApcTu9A
гость



 прочитанное сообщение 10.06.2005 10:01     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Вообще, коллагеназа - более трудная жижа, чем трипсин (по моим личным впечатлениям). Ее используют в основном для тканей с большим количеством соединительной ткани - кожа, миокард, а также для печенки (трипсин нельзя - инактивируется).
Клетки коллагеназа не жалеет, так что лучше недоварить.
solo
IP-штамп: friYUXApcTu9A
гость



 прочитанное сообщение 10.06.2005 10:15     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Спасибо всем, но продолжаю внимательно слушать.
(Перед этим не туда отправил ответ Алексу -после вчерашнего начала отмечания Дня Независимости США)
picarus
IP-штамп: friYUXApcTu9A
гость



 прочитанное сообщение 10.06.2005 10:35     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Кстати, отмываться от коллагеназы нужно очень тщательно - 3 раза центрифугированием при температуре 4 градуса.
Alex
IP-штамп: friYUXApcTu9A
гость



 прочитанное сообщение 10.06.2005 18:25     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

согласен с оратором под кодовым названием "picarus"

и без Ca++ будет работать, но чуть хуже
с сывороткой -да, не ингибирует, но опять снижает активность...
вообще специфических ингибиторов коллагеназы не знаю (это с трипсином всё ясно)...
кто-нибудь объяснит роль ЭДТА с снижении активности коллагеназы? А то есть ряд протоколов, причём при RT

пойду книжку почитаю redface.gif
Alex
IP-штамп: friYUXApcTu9A
гость



 прочитанное сообщение 15.06.2005 04:58     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Dissociation of tissue:

• Tissue is minced with a sterile scalpel or scissors.
• Wash the tissue several times in HBSS.
• The tissue fragments are soaked at +37°C. Increased efficiency is obtained using a rocker platform and supplementing the digest with 3 mM CaCl2.


Organ perfusion:

• Digest is prewarmed to +37°C and perfused at a rate preoptimized for the particular organ. Addition of 3 mM CaCl2 increases the efficiency of dissociation.
• Dispersed cells and tissue fragments are separated from larger pieces by passing the mixture through a sterile stainless steel or nylon mesh. Fresh collagenase solution can be added to the fragments if further disaggregation is required.
• Wash several times to eliminate debris and enzyme solution. A density separation step (Nycodenz) will give a cleaner suspension.
• Resuspend the pellet in the culture medium and incubate under predetermined conditions.

Copyright: Invitrogen Corporation
www.invitrogen.com

------
to Solo: a что варим та?
solo
IP-штамп: friYUXApcTu9A
гость



 прочитанное сообщение 15.06.2005 09:04     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Спасибо еще раз!
Ну что они могут варить - склеру кроличью! Коллагеновывй мешок.
А кролика жрут - потушат под белым вином с изюмом и черносливом и хавают! Представляешь?!
А шефу говорят - его всего коллагеназа растворила, капнула на него
случайно и растворила!
Участник оффлайн! AleksSH




 прочитанное сообщение 03.04.2018 22:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Подскажите кто знает- есть 1 гр коллагеназы - нужно аликватировать по 100 мг . Каким раствором лучше разводить?
Если есть что почитать по работе с коллагеназой - скиньте плииз.
Участник оффлайн! watchesonline89
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  05.01.2023 11:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

https://omegawatches89.mystrikingly.com/
https://www.deviantart.com/omegawatches89/j...pular-930508248
https://eatsleepride.com/c/383270
https://fortunetelleroracle.com/fashion/ama...s-online-737627
https://www.intensedebate.com/people/omegawatches89
https://fortunetelleroracle.com/fashion-acc...-popular-737613
https://anotepad.com/notes/ykiydhnj
https://medium.com/@omegawatches89/amazing-...ne-b4863ed55af0
https://omegawatches90.mystrikingly.com/
https://62e8ce2ae5d50.site123.me/blog/repli...ve-items-online
https://62e8da780bf7c.site123.me/
https://padlet.com/omegawatches89/9ibenzfwbcer7k71
https://omegawatches89.simplesite.com/452939012
https://62e8da780bf7c.site123.me/blog/excit...-replica-online
https://62e8ce2ae5d50.site123.me/blog/advan...replica-watches

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Клеточные технологии · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 23:00
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft