molbiol.ru -> Остановка гидролиза белков протеазами

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Остановка гидролиза белков протеазами -- для количественной масс-спектрометрии --

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

greyxxxx

09.08.2019 14:35

URL #1

Всем привет и здравствовать!)
Подскажите, пожалуйста, как остановить переваривание белков протеазами (трипсином, протеиназой К) в буферном растворе (в пробирке) для последующего количественного анализа ВЭЖХ-МС? Необходимо как можно меньше модифицировать гидролизаты белков с одной стороны и посмотреть разницу по времени инкубации (для одного часа и для суток).

FritzBox5

09.08.2019 14:49

URL #2

(greyxxxx @ 09.08.2019 15:35)

купит ингибиторы протеаз смес в таблетках

FritzBox5

09.08.2019 14:53

URL #3

(greyxxxx @ 09.08.2019 15:35)

если срочно активированый угол

FritzBox5

09.08.2019 14:57

URL #4

(greyxxxx @ 09.08.2019 15:35)

https://www.eapteka.ru/goods/drugs/gasroent...y_farmstandart/

FritzBox5

09.08.2019 15:00

URL #5

(greyxxxx @ 09.08.2019 15:35)

https://www.eapteka.ru/goods/intimnye_tovary/

FritzBox5

09.08.2019 15:12

URL #6

(greyxxxx @ 09.08.2019 15:35)

https://yandex.ru/search/?lr=115251&text=el...097581551078828

FritzBox5

09.08.2019 15:25

URL #7

(greyxxxx @ 09.08.2019 15:35)

https://yandex.ru/search/?lr=115251&text=el...266621526201111

greyxxxx

09.08.2019 19:37

URL #8

Спасибо!) А можете посоветовать еще ингибиторы протеаз?)

metrim
Постоянный участник
Москва

09.08.2019 20:17

URL #9

Для ВЭЖХ-МС вам как раз наоборот лучше бы трепсинолиз что бы нормально прошел, иначе как вы анализировать что собрались ?

MMM
Постоянный участник

09.08.2019 20:40

URL #10

Стандартный ингибитор сериновых протеаз это PMSF, но он теоретически должен реагировать с сериновыми и цистеиновыми остатками аминокиислот. Хотя это не должно быть тотальным взаимодействием потому что он берется в малых количествах и частично гидролизуется водой.

Не модифицирующий ингибитор benzamidine, но он не очень эффективен.
Апротонитн сам по себе белок, что тоже не очень хорошшо хватает уже и внесенного трипсина как фонового белка

Сообщение было отредактировано MMM - 09.08.2019 21:00

Поблагодарили (1): greyxxxx

greyxxxx

09.08.2019 20:58

URL #11

(metrim @ 09.08.2019 21:17)

Нам бы хотелось посмотреть разницу в продуктах гидролиза через определенные промежуки времени. Поэтому хотим сделать несколько пробирок со смесью протеаз и белков в одинаковых соотношениях. И в строго отведенное время капать ингибитор в соответствующую пробирку.

greyxxxx

09.08.2019 21:02

URL #12

(MMM @ 09.08.2019 21:40)

Спасибо! Думали как раз в том же ключе.) Хотелось бы, чтобы ингибитор останавливал протеолиз, но в то же время не модифицировал остатки аминокислот. Может есть какие-то надежные ингибиторы, протоколы - как пользоваться ими?)

Asterix
Постоянный участник

10.08.2019 01:03

URL #13

А почему бы просто не замораживать фракции в нужные промежутки времени... И потром анализировать , одну за другой.

greyxxxx

10.08.2019 13:50

URL #14

(Asterix @ 10.08.2019 02:03)

А почему бы просто не замораживать фракции в нужные промежутки времени... И потом анализировать , одну за другой.

Вот да, но... образцы часто нужно сконцентрировать или высушить перед ВЭЖХ-МС. Хотя отдельно не проверяли, подозреваем, что после разморозки протеазы будут продолжать работать, пока будем заниматься пробоподготовкой. Кроме того часто удобно ставить сразу несколько образцов в лоток нанопотокового хроматографа на ночь. То есть пока один образец разгоняется, следующие ждут своего часа.

Asterix
Постоянный участник

10.08.2019 14:45

URL #15

Ну так лиофилизуйте из замороженного состояния, делов-то. А как сухой образец растворите в своем органическом растворителе для пробоподготовки никто в нем точно не выживет.

Поблагодарили (1): greyxxxx

watchesbiz
Постоянный участник

10.11.2021 18:47

URL #16

http://www.authorstream.com/Replicawatches24/
https://about.me/Replicawatches24
https://moz.com/community/users/17050093
https://trello.com/rolexrelicawatches/activity
https://replicarolexwatches.dreamwidth.org/365.html
https://visual.ly/users/watcheshutuk/portfolio
https://www.viki.com/users/watcheshutuk_549/about
https://www.academia.edu/s/14bdb7d4fe?source=link
https://www.slideshare.net/Nowseore/guide-o...ex-watch-online
https://audiomack.com/rolexrelicawatches
https://soundcloud.com/replicarolexwatches
https://www.bagtheweb.com/u/fakerolexwatches/profile
https://www.flipsnack.com/ReplicawatchesUK/...ca-watches.html
https://www.4shared.com/office/zA4L7Rmzea/G...hase_a_Fak.html?
https://codepen.io/Rolexrelicawatches/full/abBEzaQ

nigoal123
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость

11.11.2021 11:43

URL #17

State the main ideas of the article. สล็อต123 Identify the most important แทงบอล details that support the main ideas. คาสิโนออนไลน์ Write your summary in your own words บาคาร่า123 avoid copying phrases and sentences from Nigoal123 your work is worth publishing. Check หวย the article unless they’re direct quotations goal 123 game Express the underlying meaning of the article margins and เว็บ 123 referencing styles. Online journals have increased the nigoal not just the superficial details.

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.