molbiol.ru -> лизис

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* лизис

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

KiraKoroleva

Санкт-Петербург

31.05.2018 14:12

URL #1

Подскажите методику мягкого лизиса E. coli для выделения рекомб белка в полупромышл масштабах

Как еще можно эффективно лизировать клетки в отсутствии френч-пресса и соникатора?

ksm
Постоянный участник

31.05.2018 14:17

URL #2

размораживание/замораживание
https://www.nature.com/articles/nbt1294-1357
особенно лизоцим-продуцирующие
http://www.actabp.pl/pdf/3_2007/671s.pdf

Tom1
Постоянный участник

31.05.2018 15:39

URL #3

https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/78248
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/78990

Такie реагентy + лизоцим + бензонаса.
и будет счастье...
пользуем их для получения милиграммовых количеств белков из колей и дрожжей.
http://wolfson.huji.ac.il/purification/PDF...IERCE_B_PER.pdf
https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/...act_Reag_UG.pdf

Поблагодарили (1): KiraKoroleva

ksm
Постоянный участник

31.05.2018 15:48

URL #4

(Tom1 @ 31.05.2018 16:39)

B-PER is basically two components:

1. ~0.5% octyl-beta-thioglucopyranoside
2. 25 mM TRIS pH 7.5

...
https://www.mail-archive.com/ccp4bb@jiscmai...k/msg34184.html

Сообщение было отредактировано ksm - 31.05.2018 15:48

Tom1
Постоянный участник

31.05.2018 16:01

URL #5

(ksm @ 31.05.2018 05:48)

B-PER is basically two components:

1. ~0.5% octyl-beta-thioglucopyranoside
2. 25 mM TRIS pH 7.5
...
https://www.mail-archive.com/ccp4bb@jiscmai...k/msg34184.html

Шустрый аки електровеник...)))))

ksm
Постоянный участник

31.05.2018 16:29

URL #6

ой, не смущайте!
вы, часом, не проверяли, белки активность в нем сильно теряют?

Tom1
Постоянный участник

31.05.2018 16:39

URL #7

(ksm @ 31.05.2018 06:29)

ой, не смущайте!
вы, часом, не проверяли, белки активность в нем сильно теряют?

пока проблем не было....
белки были протеазы ТЕВ и ТВМВ, парочка нуклеаз, куча цитохромов, антитела и полноразмерные и фабы, несколько киназ, 3 фосфотазы и много какие исчо....
это из личного опыта....
рядом тоже много чего выделяли и проблем не было...

Поблагодарили (1): ksm

KiraKoroleva

Санкт-Петербург

31.05.2018 16:50

URL #8

(Tom1 @ 31.05.2018 16:39)

Подскажите, пожалуйста, в каком количестве добавляете бензоназу?

Tom1
Постоянный участник

31.05.2018 17:11

URL #9

(KiraKoroleva @ 31.05.2018 06:50)

Подскажите, пожалуйста, в каком количестве добавляете бензоназу?

я получал где-то 3мг/мл добавлял 20-30мкл на 100мл суспензии клеток т.е. где-то 18-20 грамм осадка замороженного.

Tom1
Постоянный участник

31.05.2018 17:13

URL #10

(KiraKoroleva @ 31.05.2018 06:50)

Подскажите, пожалуйста, в каком количестве добавляете бензоназу?

Б-пер/Вай-пер 3/1.
лизоцим 1 мг/мл
соль по вкусу)))
буфер тоже по " вкусу".
осадок гомогенизировал на електрическом гомзике на льду 25-30 минут ....

watchesbiz
Постоянный участник

20.11.2021 17:50

URL #11

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/
http://simp.ly/p/nxGlWb
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24
https://8tracks.com/replicawatchesuk

watchesonline89
Постоянный участник

26.12.2022 11:19

URL #12

https://telegra.ph/Advantages-Of-Replica-Watches-08-03
https://issuu.com/home/published/_6_.docx
https://www.gta5-mods.com/paintjobs/watchesswiss
https://omegawatches89.onweb.it/
https://padlet.com/omegawatches89/je3eq9ol3xzmb9bp
https://www.pinterest.com/omegawatches89/
https://knowyourmeme.com/users/omegawatches89
https://bitcointalk.org/index.php?topic=76487.new#new
https://omegawatches89.blog.hu/
https://knowyourmeme.com/forums/general/top...f-so-why?page=1
https://penzu.com/p/c6f21f5d
https://www.reddit.com/user/omegawatches89/...are_so_popular/
https://www.vingle.net/posts/4647076
https://penzu.com/p/c68b65cc
https://diigo.com/0pige9

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.