molbiol.ru -> RNA-форез

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* RNA-форез

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

antihistone
Участник

30.04.2003 18:17

URL #1

Кто знает простую электрофорезную систему для проверки интактности РНК? Уж слишком нудно для контроля проб гонять свежие формальдегидные гели.

wild type mutant
Постоянный участник

30.04.2003 18:27

URL #2

Обычный ТАЕ, только RNAse-fee

[Текст переведён с транслита]

antihistone
Участник

30.04.2003 18:50

URL #3

Круто!!! А каков буфер для нанесения?

wild type mutant
Постоянный участник

30.04.2003 18:55

URL #4

6 x Puffer

0.25% Bromphenolblau
(oder 0.25% Xylencyanol)
30% Glycerin (oder 15% Ficoll400)
in H2O

RNAse frei

tryptase

France

30.04.2003 19:27

URL #5

Деиствительно, для грубои прикидки достаточно gel of agarose (0.8-1.2%) в TBE тампоне, например. Я никаких дополнительних RNase-free обработок не делаю. Главное - наносить бистро, поскорее начать мигрировать. Считаетсия, что когда RNA уже in gel, RNase не стоит опасаться.

P.S. Byfer dlja nanesenia - mojno Orange G :
30% w/v sucrose
0.35% orange G
in H2O

VLAD2
Участник

30.04.2003 20:18

URL #6

Ой, шо ето? Чей тампон?
И чем ентот "Апельсин Г" принципиально отличается от синьки?
А вот еще интересно, а из формамиду можно наносить?

antihistone
Участник

30.04.2003 21:19

URL #7

"Обычный ТАЕ, только RNAse-fee" с 6 x Puffer (0.25% Bromphenolblau (oder 0.25% Xylencyanol) 30% Glycerin (oder 15% Ficoll400) in H2O - у меня неработает (тестировал только-что).

Potap
Участник

30.04.2003 21:54

URL #8

Честно говоря, лучше не ленится, ибо если РНК структурирована, а она чаще всего именно такая, вы такую веселую картинку увидите... В принципе, если очень хочется, можно гонять в 1X TBE, но денатурировать РНК 5 мин. в буфере для нанесения с 70% формамидом (65С).

Князь тишины

30.04.2003 21:59

URL #9

Ну уж вы дали. 1хТВЕ, 7М мочевина, в буфере для нанесения 20 мМ ЭДТА, прокипятить 2 мин, быстро в лед. Сразу наносить. Что за проблемы-то?

AVS
Постоянный участник
UK - Russia

01.05.2003 16:18

URL #10

свежие формальдегидные гели

Что это, может, полиакриламидные

petr
Постоянный участник

01.05.2003 17:47

URL #11

Князь тишины

РНКу кипятить? Она ж повалится! Достаточно прогреть 5 мин на 70оС.

Князь тишины

01.05.2003 23:55

URL #12

Неправда. В кислом буфере, при трисе 8, к примеру, с компенсированными двухвалентными катионами, Mg, главным образом, не валится. Я кипятил 5 мин в 100 мМ трисе 7,6; 10 мМ ЭДТА, 500 мМ NaCl, и ни капли не потерял.

tupoi
Постоянный участник

02.05.2003 11:06

URL #13

Лучше все же не кипятить, а погреть при 90 градусах. Я несколько раз по ошибке кипятил, и в половине случаев был развал.

Князь тишины

02.05.2003 11:46

URL #14

От РНК зависит. И от целей. У меня РНК структурирована, - сил нет. А полоски нужно различить очень тщательно. Иногда чтобы расплавить полностью, приходится такую ерунду придумывать... А в стандартных условиях - всегда образцы РНК плавлю в кипящей бане 2 мин. Никогда не валится.

Shurik
Участник

02.05.2003 14:50

URL #15

to Князь

Это с каких пор рН 8 или даже 7,6 считается кислым?

Князь тишины

02.05.2003 15:05

URL #16

Ага, не считается, оговорился

)

Кислее девятки, имел в виду, сорьки.

wild type mutant
Постоянный участник

02.05.2003 19:53

URL #17

Автор - antihistone:
\"Обычный ТАЕ, только RNAse-fee\" с 6 x Puffer (0.25% Bromphenolblau (oder 0.25% Xylencyanol) 30% Glycerin (oder 15% Ficoll400) in H2O - у меня неработает (тестировал только-что).

В каком смысле не работает?

У меня все время работало - если не деградировало

[Текст переведён с транслита]

antihistone
Участник

02.05.2003 22:25

URL #18

Нанося несколько образцов, один из которых точно "подвален" я вижу только сдвиг одного единственного бенда (ибо вся РНА бежит одним бендом), причем наблюдается сильная диффузия этого бенда. Если в качестве ра-ра для нанесения берется глиоксалевая смесь от Амбиона и проба прогревается 55 град - 60 мин, после 30-45 мин, форез дает класическую картинку с обееми рРНА бендами, которые через 60 мин тоже сильно диффундируют ( в обоих случаях разговор о ТАЕ агарозе).

wild type mutant
Постоянный участник

02.05.2003 22:39

URL #19

Знаю-знаю, было и у меня такое пару раз - повалились РНКовые маркеры, выделяю РНК, гоню с ними - все бежит одной полосой, основная масса вещества внизу ввиде капли, гоню ту же РНК с нормальными маркерами - все отлично.
Ето все РНАzы, а тем более, если вы заранее знаете, что одна проба поваленная - я не знаю, они наверно распространяются на все пробы. Форезную камеру обработать, TAE на DEPC-воде, все должно получаться.

[Текст переведён с транслита]

nigoal123
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость

06.12.2021 11:39

URL #20

Your conclusion should แทงบอล be an interpretation สล็อต123 of your results, nigoal123 where you summarise all 123game of the concepts that you. คาสิโนออนไลน์ introduced in the main body

of the text in order of most. หวย Make it easier for them to get เว็บ 123 a good impression about your writing เว็บ 123 to least important. แทงบอลออนไลน์ by entertaining them. สล็อต123 No new concepts are to be introduced in this section.

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.