Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Требуется помощь с экспериментом
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Альберт2604




 прочитанное сообщение 05.07.2014 22:53     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Уважаемые дамы и господа! Очень требуется понимание, советы и поддержка!

Меня зовут Альберт, мне 23 года, я закончил мед.университет в этом году. Сейчас я собираюсь пойти в интернатуру по внутренним болезням (общая терапия), НО параллельно с этим/или через год после окончания интернатуры/ я поступаю в аспирантуру на кафедру Клинической фармакологии, иммунологии и аллергологии. Но написанием кандидатской диссертации я займусь уже в интернатуре. Мы еще точно не определились с темой, нам мешает цена вопроса. Мы еще точно не знаем сколько будет стоить провести исследование. Я должен полностью составить план исследования и его стоимость.


Цель исследования: создать экспериментальную модель заболевания "Х" человека у животного (мыши), доказать in vivo эффективность коротких РНК. Т.е. мы уже знаем как создать модель этого заболевания. При этом заболевании будет повышено содержание в крови антител. Обозначим эти антитела "Х". Таким образом, по уменьшению уровня антител "Х" мы будем оценивать эффективность siRNA. У нас имеются в наличии методы для оценки уровня антител "Х". С этим все просто. Эти антитела "Х" in vivo экспрессируются плазматическими клетками. Их кодируют сразу несколько генов. Мы идентифицировали наиболее "лучший" ген-мишень, который будет одинаков во всех субтипах белка "Х" (это константный участок тяжелой цепи - он одинаков у всех антител данного класса).


Но следующие вопросы мне видятся очень сложными, поэтому я прошу у Вас помощи:

1. Где нам заказать дизайн siRNA к гену-мишени? Или как его провести самим? (есть компьютерные программы, но какую выбрать?)

2. Допустим мы "сдизайнили" три варианта siRNA... Где нам заказать их синтез?

3. Как я понял из некоторых публикаций, модифицированные двуцепочечные siRNA более эффективны, чем одноцепочечные... А где нам заказать их модификацию и синтез? (нам нужны уже готовые к использованию siRNA, так как у нас нет специалистов, знающих технологию работы с плазмидами и т.п.)

4. Допустим, нам удалось получить модифицированные двуцепоченые siRNA...(допустим, мы из заказали). Вводим их в кровь мышам с заболеванием "Х"... siRNA ведь водорастворимые? А нам нужно получить их большие концентрации в плазматических клетках. У нас в университете есть лаборатории занимающиеся наноконтейнерами и липосомами, стоит ли нам использовать эти средства доставки двуцепочечных siRNA или же лучше ввести нативные siRNA?

Буду рад любой критике и любой помощи.
Участник оффлайн! Flyamer
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 06.07.2014 09:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

1,2 и 3, наверное, можно заказать в Еврогене.
4 - использовать, свободная РНК в крови моментально расщепится.
Guest
IP-штамп: frW0uqO/N5.7k
гость



 прочитанное сообщение 06.07.2014 12:58     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Вы серьёзно собрались ингибировать синтез антител с определённой аффинностью, используя siRNA на КОНСТАНТНЫЙ участок тяжёлой цепи? Вы понимаете, что в если у Вас получится, Вы выключите синтез всех иммуноглобулинов данного класса? Вам кажется, что это разумно?

Всего благодарностей: 3Поблагодарили (3): Дядя ФАКСер, Pharmaсol, lenchic
Участник оффлайн! Flyamer
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 06.07.2014 12:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Я, честно говоря, вообще не понял описание дизайна эксперимента...
Участник оффлайн! Альберт2604




 прочитанное сообщение 06.07.2014 14:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Guest, да, действительно, мы хотим ингибировать синтез антител всего данного класса in vivo.

Flyamer, в Еврогене делают лентивирусы для РНК-интерференции, http://evrogen.ru/services/RNA-i/service-rna-i.shtml , по окончанию работ они выдают ДНК лентивируса и 10 мл готовых лентивирусных частиц...
Но вот полученную от Еврогена ДНК нужно будет, как я понял, потом "вставить" в культуру клеток и из этой культуры мы уже сможем сами получать нужные количества лентивирусных частиц.. Только проблема в том, что у нас нет специалиста который сможет это сделать

Я, может быть, не совсем понятно изъяснил суть эксперимента...

1. Смоделировать болезнь, при которой будет изменяться уровень антител данного класса (это мы сможем сделать)
2. Метод оценки уровня этих антител у нас есть.

3. ВЫКЛЮЧИТЬ продукцию этих антител с помощью siRNA - это мы сами не можем сделать - для этого нам нужно:
А) смоделировать три-пять вариантов siRNA к гену-мишени!
Б) ЗАКАЗАТЬ их синтез, заказать их химическую модификацию для придания устойчивости, и чтобы их сделали двуцепочечными... - где это все заказать - ключевой вопрос.
В) придумать систему доставки siRNA в плазматические клетки. Это мы тоже можем сделать сами...

хотя можно попробовать их с лентивирусными частицами, но мы не знаем как их нарабатывать...
Guest
IP-штамп: frW0uqO/N5.7k
гость



 прочитанное сообщение 06.07.2014 15:49     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Альберт2604, и Вас ничего не смущает? Если это IgG и аутоиммунное заболевание, то чем Ваш подход лучше иммуносупрессивной терапии? Если IgE и аллергическое заболевание, то после сенсибилизации IgE уже связаны с базофилами, и ингибирование их синтеза не поможет. Почему Вы выбрали такой странный и далёкий от применения в клинике метод?
Участник оффлайн! Альберт2604




 прочитанное сообщение 06.07.2014 16:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Guest, хочу отметить, что это не прикладное, а фундаментальное исследование т.е. мы хотим исследовать саму возможность использования данного метода терапии в иммунопатологии
в случае с IgG - иммунодепрессанты не селктивны и обладают множеством нежелательных эффектов, я думаю, было бы замечательно использовать новый, безопасный подход в терапии (ну или хотя бы попробовать это сделать)
в случае с IgE - ингибирование IgE поможет, потому что на рынке есть препарат - Омализумаб - он представляет собой антитела к СВОБОДНЫМ IgE (к тем IgE, которые еще не успели связаться с тучными клетками и базофилами), этот препарат эффективен, но тоже обладает побочными эффектами. Этим я хочу сказать, что ингибирование свободного IgE эффективно.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): yamiren
Участник оффлайн! Flyamer
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 06.07.2014 16:38     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Попробуйте с Еврогеном пообщаться, может, они за дополнительную плату это все проделают.

Давить продукцию целого класс Ig это сильно!
Участник оффлайн! Panaev
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 07.07.2014 05:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

(Flyamer @ 06.07.2014 17:38)
Ссылка на исходное сообщение  
Давить продукцию целого класс Ig это сильно!


Это вы ещё с военными медиками не общались.
"Мы считаем, что лучше иссекать!" Вольно.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Atropos

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 21.01.20 23:07
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft