Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Коллеги, прошу помощи в связи с проблемами с ПЦР
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
guest: Юлия
IP-штамп: frOoJPTS6Yg9.
гость



 прочитанное сообщение 30.06.2013 17:59     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Уважаемые коллеги, прошу помощи.
С некоторых пор в лаборатории не идет научная часть ПЦР. Причем по всем направлениям разом. На наборах ИЛС анализы идут, а наукость на прймерах-прочем не идет. праймеры есть новые, есть проверенные, есть те, с которыми уже не первый год работаем, есть те, с которыми работали и заказали свежие. Простоколы новые, старые, отработанные, сто раз проверенные - всякие. На человеческие гены, на вирусы и бактерии, на днк-овые и рнк-овые, на 16s. Короче - ничего не амплифицируется. Вода MQ, пробовали и на ампулированной. Полимераза ферментосовская с родными буферами - открывали новые наборы. Пробовали на терциках и роторджине. Делали хотстарт на воске и на вазелине. Выделение на рибо-преп, хлороформно-солевым, с переосаждением.
Кое-как начинает работать человеческая ДНК после выделения хлороформно-солевым с переосаждением на ацетате натрия. При это на кьюбите концентрация 9-17 мкг/мл.
Другая человеческая ДНК с концентрацией 83-100 мкг/мл не работает.
бактериально-вирусная 0,6-1,5 мкг/мл - тоже не работает.
Все смотрим на агарозе и на акриламиде с планами на последующее секвенирвоание. Раньше, как уже писала, все работало и все секвенировали.
Сейчас все повылетало. Вроде как все проверили.
Спасите-помогите. пожалуйста.
Что еще может быть???
Участник оффлайн! ernesta88
Постоянный участник
москва



 прочитанное сообщение 30.06.2013 19:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Полимераза ферментосовская с родными буферами - открывали новые наборы.
________
4-е года назад у меня было такое с новыми наборами ферментас - вся полимераза была дохлой. Попробуйте взять другую полимеразу чтоб проверить в полимеразе ли дело.

вот тут кажется даже тема была нащет некачественных наборов ферментас - вот имхо в ферментасполимеразе скорее всего и дело - поставьте с другой полимеразой, - приборы тут не при чем - вы ж сами говорите что на наборах ПЦР идет, а с этими нет.

если вы из мск то купить полимеразу в сибэнзиме за копейки можно за 1 день. у еврогена тоже никогда не подводили полимеразы,
Guest
IP-штамп: frQCpGSFifrEU
гость



 прочитанное сообщение 30.06.2013 21:56     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Тушите свет, идите в отпуск

Если на наборе одного производителя/одной партии/в одном холодильнике полежавшем что-то не идет - это еще не "не идет пцр"
вот когда 2-3 альтернативных набора не фурычат - это оно
А зачем такие мучительные наборы?
Guest
IP-штамп: frDDJret4PE4A
гость



 прочитанное сообщение 01.07.2013 08:49     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Другая человеческая ДНК с концентрацией 83-100 мкг/мл не работает.

Ну если Вы кладёте 5-15мкл с такой концентраций - то ничего и не будет работать - раз бы в 10-100 развести.

А вообще - картинки гелей нужно выкладывать - часто по гелю можно сказать, что не так.
Участник оффлайн! ernesta88
Постоянный участник
москва



 прочитанное сообщение 01.07.2013 09:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

вообще еще правда есть момент - топикстартер т-отжига не подбирал или подбирал? - порой весьма полезно поставить градиент но в 1 очередь полимеразу поменять
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 01.07.2013 12:18     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(guest: Юлия @ 30.06.2013 17:59)
Ссылка на исходное сообщение  Уважаемые коллеги, прошу помощи.
С некоторых пор в лаборатории не идет научная часть ПЦР. Причем по всем направлениям разом. На наборах ИЛС анализы идут, а наукость на прймерах-прочем не идет. праймеры есть новые, есть проверенные, есть те, с которыми уже не первый год работаем, есть те, с которыми работали и заказали свежие. Простоколы новые, старые, отработанные, сто раз проверенные - всякие. На человеческие гены, на вирусы и бактерии, на днк-овые и рнк-овые, на 16s. Короче - ничего не амплифицируется. Вода MQ, пробовали и на ампулированной. Полимераза ферментосовская с родными буферами - открывали новые наборы. Пробовали на терциках и роторджине. Делали хотстарт на воске и на вазелине. Выделение на рибо-преп, хлороформно-солевым, с переосаждением.
Кое-как начинает работать человеческая ДНК после выделения хлороформно-солевым с переосаждением на ацетате натрия. При это на кьюбите концентрация 9-17 мкг/мл.
Другая человеческая ДНК с концентрацией 83-100 мкг/мл не работает.
бактериально-вирусная 0,6-1,5 мкг/мл - тоже не работает.
Все смотрим на агарозе и на акриламиде с планами на последующее секвенирвоание. Раньше, как уже писала, все работало и все секвенировали.
Сейчас все повылетало. Вроде как все проверили.
Спасите-помогите. пожалуйста.
Что еще может быть???



Делали хотстарт на воске и на вазелине smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 01.07.2013 12:27     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(guest: Юлия @ 30.06.2013 17:59)
Ссылка на исходное сообщение  Уважаемые коллеги, прошу помощи.
С некоторых пор в лаборатории не идет научная часть ПЦР. Причем по всем направлениям разом. На наборах ИЛС анализы идут, а наукость на прймерах-прочем не идет. праймеры есть новые, есть проверенные, есть те, с которыми уже не первый год работаем, есть те, с которыми работали и заказали свежие. Простоколы новые, старые, отработанные, сто раз проверенные - всякие. На человеческие гены, на вирусы и бактерии, на днк-овые и рнк-овые, на 16с. Короче - ничего не амплифицируется. Вода МЯ, пробовали и на ампулированной. Полимераза ферментосовская с родными буферами - открывали новые наборы. Пробовали на терциках и роторджине. Делали хотстарт на воске и на вазелине. Выделение на рибо-преп, хлороформно-солевым, с переосаждением.
Кое-как начинает работать человеческая ДНК после выделения хлороформно-солевым с переосаждением на ацетате натрия. При это на кьюбите концентрация 9-17 мкг/мл.
Другая человеческая ДНК с концентрацией 83-100 мкг/мл не работает.
бактериально-вирусная 0,6-1,5 мкг/мл - тоже не работает.
Все смотрим на агарозе и на акриламиде с планами на последующее секвенирвоание. Раньше, как уже писала, все работало и все секвенировали.
Сейчас все повылетало. Вроде как все проверили.
Спасите-помогите. пожалуйста.
Что еще может быть???



Пробовали на терциках и роторджине - включите в лабе кондишн на всякий случай smile.gif
Участник оффлайн! Nett
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 01.07.2013 12:47     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Задача номер 1: проверить фермент вместе с прилагающимся буфером.
Прогнать не идущее на интерлабе, если есть отдельно полимераза, либо одолжить у соседей какой-нибудь "не-ферментас"

ps: терцик обычно мало чувствителен к +30С
pps: А в чём прелесть ручного хотстарта, если ХС-полимераз существует море на любой вкус и карман?

Сообщение было отредактировано Nett - 01.07.2013 12:47
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 01.07.2013 12:55     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

(Nett @ 01.07.2013 12:47)
Ссылка на исходное сообщение  Задача номер 1: проверить фермент вместе с прилагающимся буфером.
Прогнать не идущее на интерлабе, если есть отдельно полимераза, либо одолжить у соседей какой-нибудь "не-ферментас"

пс: терцик обычно мало чувствителен к +30С
ппс: А в чём прелесть ручного хотстарта, если ХС-полимераз существует море на любой вкус и карман?



терцик обычно мало чувствителен к +30С - типа не работает и при +20 ? smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 01.07.2013 13:07     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

(Nett @ 01.07.2013 12:47)
Ссылка на исходное сообщение  Задача номер 1: проверить фермент вместе с прилагающимся буфером.
Прогнать не идущее на интерлабе, если есть отдельно полимераза, либо одолжить у соседей какой-нибудь "не-ферментас"

пс: терцик обычно мало чувствителен к +30С
ппс: А в чём прелесть ручного хотстарта, если ХС-полимераз существует море на любой вкус и карман?


ппс: А в чём прелесть ручного хотстарта, если ХС-полимераз существует море на любой вкус и карман?

если "химические" полимеразы - то активируются при 95 град - тоест циклер должен уверенно держат 95 град 5-15 минут
Участник оффлайн! Nett
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 01.07.2013 13:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(Guest @ 01.07.2013 14:07)
  если "химические" полимеразы - то активируются при 95 град - тоест циклер должен уверенно держат 95 град 5-15 минут

В чём проблема? За ротор не скажу, тот же терцик этому вроде бы обучен
Парадоксально, но "конфорки" в жару работают так же, как и в +20 confused.gif
Если лаба делает поточные анализы (и наборы работают) - дело явно не в жаре
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 01.07.2013 13:55     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

(Nett @ 01.07.2013 13:32)
Ссылка на исходное сообщение  В чём проблема? За ротор не скажу, тот же терцик  этому вроде бы обучен
Парадоксально, но "конфорки" в жару работают так же, как и в +20  confused.gif
Если лаба делает поточные анализы (и наборы работают) - дело явно не в жаре

На наборах ИЛС анализы идут, а наукость на прймерах-прочем не идет smile.gif

наборы обычно короткие фрагменты с добитыми праймерами -
что такое "наукость" - не очен понятно - может 10 Кб smile.gif
Участник оффлайн! Nett
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 01.07.2013 14:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

Так у них "проверенные праймеры"
Тем более "человечьи" в бактерио-вирусной лабе тоже обычно в виде контроля (явно не на 10 кБ)

Ждём результатов от смены полимеразы, полагаю
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 01.07.2013 14:34     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

(Nett @ 01.07.2013 14:29)
Ссылка на исходное сообщение  Так у них "проверенные праймеры"
Тем более "человечьи" в бактерио-вирусной лабе тоже обычно в виде контроля (явно не на 10 кБ)

Ждём результатов от смены полимеразы, полагаю

Все смотрим на агарозе и на акриламиде с планами на последующее секвенирвоание. Раньше, как уже писала, все работало и все секвенировали.

smile.gif

сиквинировать чиловеческие контроли в санепидстанции - это круто smile.gif
Guest
IP-штамп: frQCpGSFifrEU
гость



 прочитанное сообщение 01.07.2013 23:47     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

Какая в санетитьстанции намучная часть? Да ещё с секвенированием?
Углублённое изучение ОМЧ? smile.gif
Участник оффлайн! Shenna




 прочитанное сообщение 02.07.2013 14:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

Большое спасибо за комментарии и советы.
Отвечу на всплывшие вопросы. Может, правда поможет.
Это не санэпидстанция, разумеется. Одна из лабораторий НИИ Пастера в СПб.
Анализы и наборы ИЛС - так как делаем анализы, направляемые к нам поликлиникой института. Поэтому и говорю, что с работой на наборах все в порядке.
Наукость - ибо много у нас разных направлений. Секвенируем потихоньку некоторые гены/участки генов/участки геномов гепатита В, парвовируса В19, тифа, клепсиеллы, коклюша, паротита, лепотспиры. Плюс некоторые человеческие гены - BTK, IL-28B. В общем, разнообразие. 10 кб нету, в основном 250-1500 п.о.
Полимеразу проверяли - ставили на ферментосе наборы илс - идут прекрасно. Ставили на илсовской полимеразе "наукость" - фиг, не идет.
Вряд ли дело в приборах, так как при одновременной постановке на всех приборах одного и того же - дружно не срабатывает реакция. Вряд ли могли все сразу навернуться.
Ручной хотстарт был сделан при обычной полимеразе, не хотстартовой.
Температуры отжига подбирались - есть вполне проверенные и работавшие "системы", которые тоже внезапно не работают.
Градиент делали, с разными вариациями шагов.
На гелях либо чистота и тишина, соответственно выкладывать нечего. Либо легкий шмер (хотя в данном случае скорее флер) на первую треть дорожки - причем только на акриламиде.
Есть предположение, что косяк стрясся с матрицами, все же. На форезе сама матрица вполне наличествует, на наборах, повторюсь, работают. Так как, действительно, наборы рассчитаны на коротенькие кусочки, а для "наукости" нужны подлиннее, причем на 250 некоторые матрицы работают, хоть и фиговенько, то размышляем на тему развалившейся ДНК. Странно, что развалились все разом.
Да, они хранятся в одном холодильнике.
Но, вроде как, холодильник не отключался, да и даже если отключался, ДНК при единичном отключении и при комнатной температуре не сдохнет. Вроде как.

А в отпуск хотелось бы, но, увы до него еще 1-3 недели - у кого как. А пока надо как-то работать. smile.gif
Участник оффлайн! R.J. Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.07.2013 14:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

возьмите СТАНДАРТНУЮ ДНК, выделенную НЕ вами, типа лямбды или NEBовской Hela, поставьте ПЦр и посмотрите, идет или нет и на каких ферментах. Шаг второй- выкиньте неработающий фермент. Шаг третий- перейдите на Ваши матрицы и праймеры, вычлените неработающие комбинации. Какая к черту "наукость"- вот так неологизм, впервые слышу такое нелепое слово- так вот, какая к черту "наукость", если вы не может сделать работу над ошибками самостоятельно
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 02.07.2013 14:35     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

(Shenna @ 02.07.2013 14:14)
Ссылка на исходное сообщение  Большое спасибо за комментарии и советы.
Отвечу на всплывшие вопросы. Может, правда поможет.
Это не санэпидстанция, разумеется. Одна из лабораторий НИИ Пастера в СПб.
Анализы и наборы ИЛС - так как делаем анализы, направляемые к нам поликлиникой института. Поэтому и говорю, что с работой на наборах все в порядке.
Наукость - ибо много у нас разных направлений. Секвенируем потихоньку некоторые гены/участки генов/участки геномов гепатита В, парвовируса В19, тифа, клепсиеллы, коклюша, паротита, лепотспиры. Плюс некоторые человеческие гены - БТК, ИЛ-28Б. В общем, разнообразие. 10 кб нету, в основном 250-1500 п.о.
Полимеразу проверяли - ставили на ферментосе наборы илс - идут прекрасно. Ставили на илсовской полимеразе "наукость" - фиг, не идет.
Вряд ли дело в приборах, так как при одновременной постановке на всех приборах одного и того же - дружно не срабатывает реакция. Вряд ли могли все сразу навернуться.
Ручной хотстарт был сделан при обычной полимеразе, не хотстартовой.
Температуры отжига подбирались - есть вполне проверенные и работавшие "системы", которые тоже внезапно не работают.
Градиент делали, с разными вариациями шагов.
На гелях либо чистота и тишина, соответственно выкладывать нечего. Либо легкий шмер (хотя в данном случае скорее флер) на первую треть дорожки - причем только на акриламиде.
Есть предположение, что косяк стрясся с матрицами, все же. На форезе сама матрица вполне наличествует, на наборах, повторюсь, работают. Так как, действительно, наборы рассчитаны на коротенькие кусочки, а для "наукости" нужны подлиннее, причем на 250 некоторые матрицы работают, хоть и фиговенько, то размышляем на тему развалившейся ДНК. Странно, что развалились все разом.
Да, они хранятся в одном холодильнике.
Но, вроде как, холодильник не отключался, да и даже если отключался, ДНК при единичном отключении и при комнатной температуре не сдохнет. Вроде как.

А в отпуск хотелось бы, но, увы до него еще 1-3 недели - у кого как. А пока надо как-то работать. smile.gif




Странно, что развалились все разом. - smile.gif

магнитная буря над Питером smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 02.07.2013 14:48     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

(R.J. Dio @ 02.07.2013 14:20)
Ссылка на исходное сообщение  возьмите СТАНДАРТНУЮ ДНК, выделенную НЕ вами, типа лямбды или НЕБовской Хела, поставьте ПЦр и посмотрите, идет или нет и на каких ферментах. Шаг второй- выкиньте неработающий фермент. Шаг третий- перейдите на Ваши матрицы и праймеры, вычлените неработающие комбинации. Какая к черту "наукость"- вот так неологизм, впервые слышу такое нелепое слово- так вот, какая к черту "наукость", если вы не может сделать работу над ошибками самостоятельно


я обычно выбрасую все полимеразы и сразу Такару smile.gif

http://www.clontech.com/takara/US/Products..._DNA_Polymerase
Участник оффлайн! Nett
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.07.2013 14:50     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

Не было там бурь smile.gif

Юлия, здравствуйте
Занесите пару-тройку лептоспир "на родину" на 5 этаж, посмотрим, что за беда стряслась с матрицей
и "человечины" на пять реакций тоже можно, если есть

Сообщение было отредактировано Nett - 02.07.2013 14:51
Участник оффлайн! R.J. Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 03.07.2013 10:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

(Guest @ 02.07.2013 15:48)
Ссылка на исходное сообщение  я обычно выбрасую все полимеразы и сразу Такару smile.gif

http://www.clontech.com/takara/US/Products..._DNA_Polymerase

ну, у каждого свои тараканы
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 03.07.2013 11:04     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

(R.J. Dio @ 03.07.2013 10:58)
Ссылка на исходное сообщение  ну, у каждого свои тараканы


евроген далеко smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 03.07.2013 11:20     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #23 множественное цитирование

(R.J. Dio @ 03.07.2013 10:58)
Ссылка на исходное сообщение  ну, у каждого свои тараканы

http://www.evrogen.ru/products/PCR-kits/InBlood.shtml

smile.gif
Guest
IP-штамп: frWKcU.b0hdB2
гость



 прочитанное сообщение 03.07.2013 14:37     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #24 множественное цитирование

Глаза боятся, а руки из ж о п ы, пардон. Ъ
Guest
IP-штамп: frQCpGSFifrEU
гость



 прочитанное сообщение 03.07.2013 19:38     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #25 множественное цитирование

Вот и сдавай ананализы, когда хлороформ с солью да сломавшийся холодильник frown.gif да еще и руки оттуда
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 03.07.2013 20:51     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #26 множественное цитирование

У вас не работает полимераза. Ферментас силен не полимеразами, а рестриктазами.
Раз просите помощи, примите от меня работающую полимеразу в составе мастермикса. smile.gif
Guest
IP-штамп: frWKcU.b0hdB2
гость



 прочитанное сообщение 03.07.2013 21:50     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #27 множественное цитирование

(R.J. Dio @ 02.07.2013 14:20)
Ссылка на исходное сообщение  возьмите СТАНДАРТНУЮ ДНК, выделенную НЕ вами, типа лямбды или NEBовской Hela, поставьте ПЦр и посмотрите, идет или нет и на каких ферментах. Шаг второй- выкиньте неработающий фермент. Шаг третий- перейдите на Ваши матрицы и праймеры, вычлените неработающие комбинации. Какая к черту "наукость"- вот так неологизм, впервые слышу такое нелепое слово- так вот, какая к черту "наукость", если вы не может сделать работу над ошибками самостоятельно

Это по олбански. smile.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 03.07.2013 21:54     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #28 множественное цитирование

(Guest @ 03.07.2013 22:50)
Ссылка на исходное сообщение  Это по олбански. smile.gif

Это был я.
Guest
IP-штамп: frQCpGSFifrEU
гость



 прочитанное сообщение 03.07.2013 22:48     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #29 множественное цитирование

чё, 100-200 пар в интеровском наборе поднимет, а 250 в "намучном"-обломится прибалтское чудо?
Guest
IP-штамп: frQCpGSFifrEU
гость



 прочитанное сообщение 03.07.2013 22:49     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #30 множественное цитирование

сиквенировать на потоке и жмотиться на ферменты - моветон smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 04.07.2013 08:44     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #31 множественное цитирование

(Guest @ 03.07.2013 22:48)
Ссылка на исходное сообщение  чё, 100-200 пар в интеровском наборе поднимет, а 250 в "намучном"-обломится прибалтское чудо?


ну не знаю - в 1993 у меня ферментас 1000 бп делал за 15 минут - 2.5 юнита на 20 миклов

smile.gif

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=pantina+tips
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 04.07.2013 08:53     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #32 множественное цитирование

(-Ъ- @ 03.07.2013 20:51)
Ссылка на исходное сообщение  У вас не работает полимераза. Ферментас силен не полимеразами, а рестриктазами.
Раз просите помощи, примите от меня работающую полимеразу в составе мастермикса. smile.gif


насколко помню первую ПЦР в СССР поставили в Питере , а не в Москве smile.gif

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3240329
Участник оффлайн! R.J. Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 04.07.2013 10:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #33 множественное цитирование

(Guest @ 04.07.2013 09:44)
Ссылка на исходное сообщение  ну не знаю - в 1993 у меня ферментас 1000 бп делал за 15 минут - 2.5 юнита на 20 миклов

smile.gif

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=pantina+tips

в 1993 Ферментас (НПО Фермент) еще на СНГ работал, а потом уже решил, что он Европа, и можно в Россию сливать всякое говно
Ну вот, не по логике, а вопреки ,
в глазах всего мира мы стали другие.
И даже в носу не при всех ковыряем,
И даже толчки за собою смываем.
Практически где-то - уже мы Европа,
Но где это - где-то - не знает никто тут...
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 04.07.2013 12:56     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #34 множественное цитирование

(Guest @ 04.07.2013 09:44)
Ссылка на исходное сообщение  ну не знаю - в 1993 у меня ферментас 1000 бп делал за 15 минут - 2.5 юнита на 20 миклов

smile.gif

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=pantina+tips

А чего у Кабоева не брал?

Сообщение было отредактировано -Ъ- - 04.07.2013 13:32
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 04.07.2013 12:57     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #35 множественное цитирование

(Guest @ 04.07.2013 09:53)
Ссылка на исходное сообщение  насколко помню первую ПЦР в СССР поставили в Питере , а не в Москве smile.gif

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3240329

Ну сколько можно!? mad.gif
Участник оффлайн! R.J. Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 04.07.2013 13:47     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #36 множественное цитирование

вряд ли Питер, судя по авторам
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 04.07.2013 14:37     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #37 множественное цитирование

(R.J. Dio @ 04.07.2013 14:47)
Ссылка на исходное сообщение  вряд ли Питер, судя по авторам

Гатчина, ЛИЯФ им. Константинова. А Третьяков - тот самый жирный тролл молбиол форума. smile.gif
Yuri K
IP-штамп: frO84jFrTPiQA
гость



 прочитанное сообщение 09.07.2013 17:15     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #38 множественное цитирование

Хорошая привычка, это держать в глубокой заморозке "золотой стандарт" работающих реагентов в качестве контроля, по которому случись чего всегда можно определить, что именно сдохло.

В ПЦР лаборатории все должно быть разаликвочено на порции, которые используются по одной, остальное в заморозке. Такая система позволяет как контролировать возможную контаминацию, так и легко справляться с периодическим издыханием чего-то. При этом вы никогда не расходуюте до последней аликвоты очередной лот, скажем, праймеров, пока не убедитесь, что новый лот праймеров тоже работает.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): dk
Guest
IP-штамп: frQCpGSFifrEU
гость



 прочитанное сообщение 09.07.2013 18:00     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #39 множественное цитирование

Хыхы. То лаборатория, а то интерлаб напополам с "намукостью"
Сдается мне, студент отправлен на каникулы

Да, про 2.5 юнита - и без неспецифики?
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 10.07.2013 10:28     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #40 множественное цитирование

(Guest @ 09.07.2013 19:00)
Ссылка на исходное сообщение  Хыхы. То лаборатория, а то интерлаб напополам с "намукостью"
Сдается мне, студент отправлен на каникулы

Да, про 2.5 юнита - и без неспецифики?

Можно ставить и с 5 юнитами, если не жалко. Вся "наукость" smile.gif в том как утихомирить прорву фермента в маленьком объеме, чтоб было без неожиданностей и тянул хоть 100 циклов в присутствии ингибиторов.
Ну если они они горбатые - другое дело...
Участник оффлайн! КсюшаНСК




 прочитанное сообщение 04.08.2013 06:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #41 множественное цитирование

Та же хрень была.
Как только темперетура в комнате приблизилась к 30 градусам наши стандартные ПЦР перестали работать. ИЛС-совские работали, с ихними ферментами или хотстарполимеразами все отлично работало. Жара спала и все опять пошло.
Участник оффлайн! R.J. Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 04.08.2013 09:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #42 множественное цитирование

Тут и скачки влажности, и непонятный режим внутри морозильника с бесконечным намораживанием- лето, одно слово

Сообщение было отредактировано R.J. Dio - 04.08.2013 10:00
Guest
IP-штамп: frQCpGSFifrEU
гость



 прочитанное сообщение 05.08.2013 00:26     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #43 множественное цитирование

у вас х%ровые "ваши стандартные" полимерзы smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 05.08.2013 07:55     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #44 множественное цитирование

(R.J. Dio @ 04.08.2013 09:59)
Ссылка на исходное сообщение  Тут и скачки влажности, и непонятный режим внутри морозильника с бесконечным намораживанием- лето, одно слово


говорю же - магнитные бури smile.gif
Guest
IP-штамп: frQCpGSFifrEU
гость



 прочитанное сообщение 05.08.2013 07:56     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #45 множественное цитирование

руки из попы smile.gif становятся на жаре
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 06.08.2013 09:44     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #46 множественное цитирование

(Guest @ 05.08.2013 08:55)
Ссылка на исходное сообщение  говорю же  - магнитные бури smile.gif

Правильно, это бури, поля, леса. И магний ведет себя неадекватно (по версии моего знакомого с барабашками в каждом углу и в голове тоже). frown.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 06.08.2013 10:22     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #47 множественное цитирование

(Guest @ 05.08.2013 07:56)
Ссылка на исходное сообщение  руки из попы smile.gif становятся на жаре

В жаркую погоду имеют преимущество автомобили с кондиционером. По данным ADAC, температура в салоне должна поддерживаться на уровне 21 - 23 градусов. Многие автомобилисты понижают температуру ниже 20 градусов, однако чрезмерное охлаждение воздуха увеличивает расход топлива и выбросы углекислого газа. Разница между внутренней и наружной температурой не должна превышать шести градусов. Кроме того, в жаркие дни рекомендуется хорошо проветрить до поездки нагретый автомобиль, открыв двери.

Из-за сильной жары снова возникли проблемы на немецких автомагистралях. На шоссе A3 между Дьез и Лимбург образовалось вздутие асфальта. Об этом сообщила дорожная полиция в пятницу, 2 августа.

На повреждённом участке движение было ограничено одной полосой в связи с ремонтными работами образовалась большая пробка. По данным полиции, в четверг, 1 августа, на шоссе A1 недалеко от Хетцерат в направлении Саарбрюккен из-за высокой температуры возникло повреждение дорожного полотна. В настоящее время в пострадавших районах движение восстановлено.

smile.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 06.08.2013 12:36     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #48 множественное цитирование

У вас в Германии вздутие от жары, а у нас в России пучение от мороза. umnik.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 06.08.2013 13:02     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #49 множественное цитирование

(-Ъ- @ 06.08.2013 12:36)
Ссылка на исходное сообщение  У вас в Германии вздутие от жары, а у нас в России пучение от мороза. umnik.gif


обманывать нехорошо smile.gif

http://www.wetter.com/russische_foederatio.../RU0MC0002.html
Guest
IP-штамп: frpe75NzPynak
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  06.08.2013 13:21     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #50 множественное цитирование

http://izvestia.ru/news/554429#ixzz2b7yXEGTe

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 23:53
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft