Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* бактериальные системы экспрессии (E.coli) -- какие Вы предпочитаете --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


опрос: какие промоторы, по Вашему мнению, наиболее удобны для экспрессии рекомбинантных белков в E.coli  (Всего голосов: 49)   
Т7 промотор    35 (71%)
lac промотор и варианты    10 (20%)
термоиндуцибельный    0 (0%)
иное    4 (8%)
   Гости не могут участвовать в голосовании

Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 24.04.2007 18:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

поделитесь своими соображениями, помимо простого голосования, почему одна системы лучше другой, какой уровень экспрессии Вы достигали, растворимость белка, как часто видимой (без иммунологических методов) экспрессии не достигалось, какие конкретно плазмиды наиболее удобны для манипуляций и все, что придет на ум по этому поводу. Спасибо
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 24.04.2007 22:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Клонировали на pUC под лак ген гидролазы с собственным промотором. Активность фермента при индукции ИПТГ примерно такая же, как в исходном организме, где он в единственной копии. Отсюда мораль - >90% экспрессии идёт в помойку. weep.gif
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.04.2007 10:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

так промотор же собственный, может, и мешался к тому же. Ситуация нестандартная- а если бы просто засунуть гидролазу под пиюсишный lac?
Участник оффлайн! Павел
Постоянный участник
Новосибирск



 прочитанное сообщение 25.04.2007 11:22     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

klav, а что Вы хотели индуцировать IPTG? альфа-пептид в pUC?
А вообще, универсальных систем экспрессии нет. Но я чаще предпочитаю экспрессию под T7 промотором в штамммах (DE3). на втором месте - термоиндукция, после этого индукция под промоторами lac и комбинированными iptg-индуцируемыми.
Растворимость белка -вопрос еще тот. Бывают просто необъяснимые вещи. Например, экспрессия EcoDam метилазы в чистом виде дает на выходе полностью растворимый продукт, с хорошим выходом. А добавка полигистидинового тэга полностью переводит продукт в тельца. Экспрессия, впрочем, также высока.
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.04.2007 11:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

это да, бывает, гистидины все же заряжены
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 25.04.2007 18:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

pGEX-4T и BL21
pQE для 6-His
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.04.2007 11:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

а pET?
Участник оффлайн! klav
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 26.04.2007 13:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

(curious67 @ 25.04.2007 11:44)
Ссылка на исходное сообщение  так промотор же собственный, может, и мешался к тому же. Ситуация нестандартная- а если бы просто засунуть гидролазу под пиюсишный lac?

У нас был и такой тоже вариант. По разнице активностей +/- собственный промотор увидели, что Рлак и собственный объединяют усилия :-).
2 Павел :
У нас вставка гидролазы в полилинкере, который внутри альфа пептида. (pUC19) Так что если стоп транскрипции на вставке сильный, при индукции ИПТГ альфа пептида быть не должно.
Участник оффлайн! Павел
Постоянный участник
Новосибирск



 прочитанное сообщение 26.04.2007 16:10     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

не совсем так. альфапептида не будет при любой вставке. Если она маленькая, то альфапептид возможно будет активный, но не факт. выводы делать ТАК некорректно

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): klav
Участник оффлайн! Esya
Постоянный участник
PA, USA



 прочитанное сообщение 28.04.2007 02:27     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

я бы только pET и советовала бы, копийность низкая, есть lacI, если предохраняться, то течет минимально, что иногда важно, если неважно, то все равно какая система
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 28.04.2007 23:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

все бы ничего, но есть и проблемы с pET- секвенируется довольно погано, выделяется в нормальных кол-вах только вручную, а китами плохо, да и клонирование+ экспрессия в 2 стадии (перетрансформация в спец. штамм) раздражает, особенно, если параллельных клонов несколько

Сообщение было отредактировано curious67 - 28.04.2007 23:26
Участник оффлайн! Esya
Постоянный участник
PA, USA



 прочитанное сообщение 29.04.2007 02:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

зато съэкономите время на траубшутинг, когда фигня токсична и быстро деградирует и малорастворима, а сейчас других белков и не осталось почти

и у меня никаких особых проблем с их выделением и секвенированием не наблюдалось, того что китом с мини выделяется достаточно для теста - есть или нет вставка, а потом - миди и вполне хватит на все нужды - да и количество лизируемых бактерий легко увеличить раза в 3, до pUC не дотянетесь, но выход нормальный
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 29.04.2007 21:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

зато съэкономите время на траубшутинг, когда фигня токсична и быстро деградирует и малорастворима, а сейчас других белков и не осталось почти

а куда они все девались? Были хорошие, а сейчас плохие пошли? Да нет, все понятно, конечно.
А если серьезно, то по моему мнению, c pQE, скажем, работать поприятнее.
Участник оффлайн! Veshka
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 29.04.2007 22:35     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

Нет проблем с выделением и сиквенсом pET Кстати, "вручную" - намного проще, чем китом.

Обычно я с ходу ставлю продукт концевым отрезанием в pET. Что касается альтернативных систем, то они бывают и ничего, но выход, выход....
Участник оффлайн! Esya
Постоянный участник
PA, USA



 прочитанное сообщение 29.04.2007 23:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

у pQE - нет (не было) lacI - копий до хрена, течет (-кла), зараза smile.gif

Если честно, я не китами ДНК (нуклеиновые кислоты) не выделяю из принципа (хотя умею по всякому и даже принцип действия знаю smile.gif), провайдед в лабе есть деньги. Вот в прошлой денег не было (вернее жадности было больше чем денег) - клянусь, на китах экономили, растворчики сами готовили, а только колонки покупали - в результате вечные проблемы с сиквенсом, повторы и деньги и время. Мне больше нравится знать, что если она не прорезалась, не про секвенировалась - то это не от меня, а в принципе и репу на эту тему не чесать.
Участник оффлайн! AVP
Постоянный участник
New Jersey



 прочитанное сообщение 29.04.2007 23:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

(Veshka @ 29.04.2007 15:35)
Ссылка на исходное сообщение Что касается альтернативных систем, то они бывают и ничего, но выход, выход....


что PL и PR промоторы ... не дают желаемого выхода? (только давайте не будем рассматривать частные случаи)... shuffle.gif
Участник оффлайн! Esya
Постоянный участник
PA, USA



 прочитанное сообщение 29.04.2007 23:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

вообще то, Саш, с Т7 - обычно больше и надежнее
Участник оффлайн! AVP
Постоянный участник
New Jersey



 прочитанное сообщение 29.04.2007 23:31     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

(Esya @ 29.04.2007 16:23)
Ссылка на исходное сообщение  вообще то, Саш, с Т7 - обычно больше и надежнее


обычно они мало у кого есть в руках... wink.gif
Участник оффлайн! Esya
Постоянный участник
PA, USA



 прочитанное сообщение 30.04.2007 05:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

Что??? Мы даже в деревне в них клонировали.
Участник оффлайн! AVP
Постоянный участник
New Jersey



 прочитанное сообщение 30.04.2007 08:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

(Esya @ 29.04.2007 22:29)
Ссылка на исходное сообщение  Что??? Мы даже в деревне в них клонировали.


а помимо деревенских мест приходилось работать? shuffle.gif

ноги то у этого вопроса как раз и ростут из деревни... wink.gif
Участник оффлайн! Veshka
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 30.04.2007 11:20     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

Набор удобных векторов сэтими промоторами мне неизвестен. Смому лепить - я уже это проходил 10 лет назад, надоело. И самое главное - если мне не врёт склероз, оба лямбдовских промотора рассчитаны на термочувствительные репрессоры. А термоиндуцировать можно небольшой процент белков - остальные повапятся в тельца, что не гуд. Или клетки подохнут. К тому же регулировать их ну никак невозможно, в Т7 хоть лизы есть...

Сообщение было отредактировано Veshka - 30.04.2007 11:21

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): AVP
Участник оффлайн! Esya
Постоянный участник
PA, USA



 прочитанное сообщение 30.04.2007 16:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

АВП - все что я здесь сама делала для экспрессии - делала в петах, в пабмед глянь, это ж серебряный стандарт, можно сказать, при отсутствии золотого - на третьем месте фармациевские, на четвертом для ленивых qiagen, а все остальное отсутствует, ну может топо-компэтибл и примнут пэты, но не в микробиологии и не в структурной
Guest
IP-штамп: frFNQ1Yb4qZoo
гость



 прочитанное сообщение 30.04.2007 17:17     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #23 множественное цитирование

феномен из жизни - в pQE30/M15 выход белка (с неотщепляемым гистагом) ~25 мг (полностью растворим) с литра культуры, 37С, стандартный протокол. Переклонировал в pET28, под отщепляемый таг - перебрал пять (DE3) штаммов, варьировал температуру и т.д. - лучший выход в BL21(DE3) Star при 16С - 4 мг с литра культуры (полностью растворим).

отсюда вопрос - и какого фига выход упал более чем в 5 раз?
вот вам и разница между Т5 и Т7 промотором...
Участник оффлайн! Esya
Постоянный участник
PA, USA



 прочитанное сообщение 30.04.2007 17:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #24 множественное цитирование

это не с промотором разница - а с копийностью плазмиды smile.gif А во вторых, я сказала, что если белок растворим и без заморочек, то его даже под собственным клонировать можно в pUC - пример аденилат киназа под собственным промотером в pEMBL - древняя pUC такая - 150 мг с литра. Подойдет вам этот пример для экспрессии субъединицы человеческой ДНК полимеразы аминокислот так в 500? Врядли.
С белками нет универсальных рецептов и идеальных подходов, есть те, которые чаще всего работают.
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.04.2007 22:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #25 множественное цитирование

С белками нет универсальных рецептов и идеальных подходов, есть те, которые чаще всего работают

это да. У меня самый положительный опыт с pQE, если страшно, что течет- есть серия pQE-80, там прекрасненько стоит lacI. T7 промтор вспоминаю как страшный сон- всегда все нерастворимое было, хотя и килограмм.
И еще.
"на четвертом для ленивых qiagen"
дело не в лени, а в том, что есть белковики, есть молбиологи, не все любят возиться с белками, иным ДНК ближе
Участник оффлайн! Veshka
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 01.05.2007 02:10     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #26 множественное цитирование

Собственно вопрос и нужно было ставить так - кто в чём любит экспрессировать белки, когда они в нужном виде не экспрессируются. smile.gif

Что касается pQE - действительно в некоторых случаях в моих руках она лучше Т7. Это те случаи, когда из-под Т7 мне не удавалось получить ни грамма. Было и обратное.

Сообщение было отредактировано Veshka - 01.05.2007 02:11
Участник оффлайн! Atropos
Постоянный участник
abroad



 прочитанное сообщение 01.05.2007 17:36     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #27 множественное цитирование

(Guest @ 30.04.2007 18:17)
Ссылка на исходное сообщение 
отсюда вопрос - и какого фига выход упал более чем в 5 раз?

Я недавно под одним и тем же T7 промотором поменял 6xHIS-содержащий таг из 22 АМК на другой из 24 АМК (как раз от pET28), и после индукции IPTG выход упал раз в 30-50 (хотя на чашках без IPTG в обоих случаях активный фермент нарабатывается в сходных и весьма заметных количествах). frown.gif Тоже интересно, с чего это так вдруг.

Сообщение было отредактировано Atropos - 01.05.2007 17:37
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.05.2007 11:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #28 множественное цитирование

(Atropos @ 01.05.2007 18:36)
Ссылка на исходное сообщение  Я недавно под одним и тем же T7 промотором поменял  6xHIS-содержащий таг из 22 АМК на другой из 24 АМК (как раз от pET28), и после индукции IPTG выход упал раз в 30-50 (хотя на чашках без IPTG в обоих случаях активный фермент нарабатывается в сходных и весьма заметных количествах). frown.gif Тоже интересно, с чего это так вдруг.

это-то как раз и не удивительно- структура 5'-конца РНК изменилась, рибосомам неудобно из-за вторичной структуры, или время полужизни РНК упала
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.05.2007 18:06     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #29 множественное цитирование

оследнее время попробовал pBAD для "токсичных " белков понравилось....
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.05.2007 19:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #30 множественное цитирование

да-да, совсем не течет, это правда. Из pBAD-TOPO запросто делается нормальный вектор под рестриктазы, и вперед
Guest
IP-штамп: frHvyGooYAnV2
гость



 прочитанное сообщение 06.06.2008 15:13     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #31 множественное цитирование

Имею опыт работы только с системой векторов pQE30-32 и клетками M15[pREP4]. При индукции IPTG выход белка достаточно высокий - до 15 мг/литра культуры. Правда, практически во всех случаях белок уходит в тельца включения. Экзерсисы со снижением концентрации IPTG и температуры не помогли.
В общем, если нужно много белка и вполне устраивает очистка в денатурирующих условиях - pQE хороший вариант.
PS Белки удается экспрессировать и в других, не M15[pREP4], хозяйских клетках - TOP10, JM107.
Участник оффлайн! enisseisk




 прочитанное сообщение 07.06.2008 10:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #32 множественное цитирование

тоже работаю в основном с pQE 30/40, - гораздо больше нравится чем pET... smile.gif

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): The problem
Участник оффлайн! spectator




 прочитанное сообщение 07.06.2008 11:28     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #33 множественное цитирование

что скажете о PinPoint™ Xa Protein Purification System (Promega)
http://www.promega.com/catalog/catalogprod...productleaf_318
Guest
IP-штамп: frT94qSJLu4.M
гость



 прочитанное сообщение 09.06.2008 11:08     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #34 множественное цитирование

А не подскажете какую лучше векторную систему использовать для вирусных ферментов, например, протеиназ и проч.?
guest: Inalhe
IP-штамп: frv8Mvfo5WhfE
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  19.08.2008 09:43     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #35 множественное цитирование

T7
Участник оффлайн! The problem
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.08.2008 21:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #36 множественное цитирование

(spectator @ 07.06.2008 11:28)
Ссылка на исходное сообщение  что скажете о PinPoint™ Xa Protein Purification System (Promega)
http://www.promega.com/catalog/catalogprod...productleaf_318


ничего хорошего из Галилеи
guest: Vika
IP-штамп: fr3mxwI9lNtaw
гость



 прочитанное сообщение 23.09.2008 19:51     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #37 множественное цитирование

(curious67 @ 02.05.2007 18:08)
Ссылка на исходное сообщение  да-да, совсем не течет, это правда. Из pBAD-TOPO запросто делается нормальный вектор под рестриктазы, и вперед


Подскажите, пожалуйста, какие штаммы можно использовать для экспресии с pBAD вектора?
Guest
IP-штамп: frL2oriqkXcQg
гость



 прочитанное сообщение 29.09.2008 09:27     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #38 множественное цитирование

штаммы - с t7 полимеразой, например bl21de3 +plys-ы и тд

отличие рbad-а от т7 -в опероне. те то, что в случае t7 промотера включается лактозой (потому и течет) или ее неметаболизируемым аналогом иптг, в случае pbad-a включается арабинозой, которой в клетке нету, поэтому этот промотер и не течет.
Участник оффлайн! The problem
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.02.2009 13:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #39 множественное цитирование

позвольте-позвольте, причем здесь Т7-лизогены, если промотор арабинозный- куда же сядет Т7-полимераза? В том то и дело, что для pBAD нужны обычные штаммы типа DH5, XL, TOPO. Учите матчасть
Участник оффлайн! Veshka
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 12.02.2009 15:55     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #40 множественное цитирование

Бомба замедленного действия - овернайт-экспресс рулит....
Участник оффлайн! frNFBHcL2JSwo
Постоянный участник
IP-штамп: frNFBHcL2JSwo



 прочитанное сообщение 15.04.2009 08:44     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #41 множественное цитирование

кьюриос проснулся из зимней спячки...
Участник оффлайн! Tuco Ramires
Постоянный участник
Rio Grande



 прочитанное сообщение 16.04.2009 16:48     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #42 множественное цитирование

НУ почему, почему нет векторов с таким же MCS, как у pET-ов, но чтоп вместо T7 был T5?? А так удобно было бы: залигировал параллельно в тот и другой, вштырил конструкты в BL21(DE3) и SG13009 соответственно - и выбираешь, где круче smile.gif
Участник оффлайн! petr
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.04.2009 17:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #43 множественное цитирование

Ну если клонирование в лабе поставлено нормально, почему бы не переставить промотор самим? оно ж совсем не сложноsmile.gif
Участник оффлайн! Tuco Ramires
Постоянный участник
Rio Grande



 прочитанное сообщение 22.04.2009 14:48     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #44 множественное цитирование

(petr @ 18.04.2009 18:56)
Ссылка на исходное сообщение  Ну если клонирование в лабе поставлено нормально, почему бы не переставить промотор самим? оно ж совсем не сложноsmile.gif


Эт верно :-) Я бы скорее наоборот сделал: выкинул бы из, скажем, pQE80 все, что между EcoRI и HindIII (RBS, гистидины и полилинкер) и засунул бы слепленный из двух отожженых олигов pET-полилинкер с предшествующим ему RBS-ом. Все уже продумано даже smile.gif Но это же олиги надо заказывать и т.п....
Участник оффлайн! Miss Marple
Участник
Москва vs. Европа



 прочитанное сообщение 07.05.2009 12:39     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #45 множественное цитирование

[pT7T3 18U2cis rolleyes.gif ] - у нас в ней все белочки с незапамятных времен заклонированы, штамм [TG1], индуцируем фагом и ИПТГ, белок вываливается в телца включения. Некоторые другие белки мы в [Sf9] производим.
Участник оффлайн! angel eyes The bad

Россия, Е-бург



 прочитанное сообщение 07.05.2009 20:47     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #46 множественное цитирование

"....белок вываливается в телца включения"
Вот счастье то ....

Сообщение было отредактировано angel eyes (The bad) - 07.05.2009 20:48
Участник оффлайн! Tuco Ramires
Постоянный участник
Rio Grande



 прочитанное сообщение 08.05.2009 00:34     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #47 множественное цитирование

angel eyes (The bad)
Сколько бандитов, охочих до могилки Арчи Стентона, шастает на форуме eek.gif Воистину, имя им - легион wink.gif
Участник оффлайн! RJ Dio
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 08.05.2009 14:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #48 множественное цитирование

TG1... Понятно. Все от сохи, точнее, от царя Гороха. Обычно такого рода люди pUC произносят как "пук", а рестрикцию называют "переваром"

Сообщение было отредактировано RJ Dio - 08.05.2009 14:04
Участник оффлайн! flip-flop




 прочитанное сообщение 13.05.2009 21:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #49 множественное цитирование

А у кого-нибудь есть готовая плазмида для in-vitro транскрипции с крысиной каспазой-3?? Можете поделиться, please!
guest: Miss Marple
IP-штамп: frvGveEk9h7B.
гость



 прочитанное сообщение 14.05.2009 15:34     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #50 множественное цитирование

(angel eyes (The bad) @ 07.05.2009 20:47)
Ссылка на исходное сообщение  "....белок вываливается в телца включения"
Вот счастье то ....

Другим способом наш белочек не получить.
Зато рецептор к нему мы с удовольсвием выделяем как секретируемый белок Sf9 tongue.gif Так что, не каждый Горох ещё такое делает.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 07:20
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft