Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Можно ли визуализировать флюоресцентный блот с помощью самого простого гель-дока? -- не могу разобраться --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Евгеша




 прочитанное сообщение 19.01.2017 12:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Здравствуйте! Ставим блоттинг. Для визуализации в наличии только гель-док, оснащенный Epi-White и UV-Trans 302 nm. При окрашивании блота колориметрическим субстратом, не видно белков интереса, не хватает чувствительности. При использовании хемилюминесцентного субстрата видно, но нет хеми-дока. Если использовать вторичные антитела с флюорохромами, можно ли будет что-нибудь увидеть с помощью нашего гель-дока? UV-Trans для этого подойдёт?
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 19.01.2017 12:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

нет хемидока -пользуйтесь пленкой например. или ищите хемидок. а извращения всякие оставьте.
про колориметрический блот вообще первый раз слышу.
вторичные обычно конъюгнируют с красненьким и зеленьким флуорохромами, а у вас 302 нм для этидия. ну и стоят вторичные тоже нормальных денег - так зачем пытаться все делать все через одно место?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.01.2017 12:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Нет - вы ничего не увидите. Хемилюминесценция элементарно смотрится на рентгеновской пленке (только медицинской - высокой чувствительности). Ничего кроме пленки проявителя и темной комнаты с красным фотофонариком не требуется. Для наблюдения флуоресценции на блоте нужен лазерный флуоресцентный сканер - типа Typhoon 9500

Сообщение было отредактировано MMM - 19.01.2017 12:27
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.01.2017 12:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

(ship @ 19.01.2017 13:22)
про колориметрический блот вообще первый раз слышу.

Мосье никогда не красил ПХ ДАБ/Н2О2 и ЩФ BCIP/NBT???!!!! confused.gif lol.gif mad.gif


Кстати! Автор!! Возможно коньюгаты с ЩФ и субстрат BCIP/NBT вас спасут. Эта парочка раз в 10-30 чувствительнее ДАБ.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): dk
Участник оффлайн! Евгеша




 прочитанное сообщение 20.01.2017 05:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(ship @ 19.01.2017 15:22)
Ссылка на исходное сообщение 
про колориметрический блот вообще первый раз слышу.

Вот этим красим: Immun-Blot® Opti-4CN™ Colorimetric Kits от Bio-Rad

Сообщение было отредактировано Евгеша - 20.01.2017 05:52
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.01.2017 10:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(Евгеша @ 20.01.2017 06:09)
Immun-Blot® Opti-4CN™ Colorimetric Kits от Bio-Rad

Ничего особенного, обычный набор с хлорнафтолом по чувствительности наравне с диаминобензидином(ДАБ).
Участник оффлайн! Евгеша




 прочитанное сообщение 20.01.2017 11:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Подскажите, пожалуйста, где купить плёнку и проявитель? Плёнку я, допустим, нашла у термофишер, но где взять проявитель к ней и как он вообще называется? А закрепитель нужно? А красный фонарик где взять? eek.gif в магазине фототоваров? lol.gif
И как статистически обработать изображение? Засунуть его в наш гель-док?

Сообщение было отредактировано Евгеша - 20.01.2017 11:39
Участник оффлайн! plurgene
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.01.2017 12:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

http://www.sigmaaldrich.com/catalog/produc...ng=en®ion=RU
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/produc...prodRecCold10-1

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Евгеша
Участник оффлайн! plurgene
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.01.2017 12:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

https://imagej.net/Welcome

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Евгеша
Участник оффлайн! plurgene
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.01.2017 12:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

https://ru.aliexpress.com/popular/red-light-photo.html

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Евгеша
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.01.2017 13:28     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(Евгеша @ 20.01.2017 09:32)
Ссылка на исходное сообщение  Подскажите, пожалуйста, где купить плёнку и проявитель? Плёнку я, допустим, нашла у термофишер, но где взять проявитель к ней и как он вообще называется? А закрепитель нужно? А красный фонарик где взять?  eek.gif в магазине фототоваров?

http://molbiol.ru/forums/lofiversion/index.php/t1114.html
А что в современных НИИ фотолабораторий больше нет? confused.gif
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 20.01.2017 14:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

(Евгеша @ 20.01.2017 03:09)
Ссылка на исходное сообщение  Вот этим красим: Immun-Blot® Opti-4CN™ Colorimetric Kits от Bio-Rad

ну хорошо, вопрос только в том зачем это делать, если известно, что это нечувствительный метод? я реально первый раз о таком слышу, тк даже в 2000 году, в периоды максимальной бедноты у нас был ECL+ от amersham.

проявитель и фиксаж можно использовать обычный российский. красный фонарь - в фототоварах.
пленка - всегда исользовали kodak, что в РФ, что в США.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.01.2017 14:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

Женя! Вы где находитесь? У вас интернет есть? Я дам вам адрес магазина в Питере, а вы Е-бурге. В каждом федеральном центре, есть контора или больше, торгующая медицинской рентген пленкой. Находится через интернет. Сейчас в ходу пленка Kodak(только они брэнд поменяли) так же пленка AGFA(она же встречается под под шведским брэндом - Cea), Немецкая пленка под брэндом Retina и как это не странно в Татарстане Казанская пленка - ТАСМА. Проявитель и фиксаж обычно продается у тех же продавцов, которые продают пленку, обычно в виде жидких концентратов производители все теже KODAK и AGFA, но есть магазины, продающие так же и химию собственного изготовления.

Если вы умете закупать химию у продавцов реактивов типа Мосреактив и т.п. или у вас остались запасы фотореактивов с советских времен, то вы можете изготовить проявитель и фиксаж самостоятельно.

Проявитель:!!!
Kodak D-19
High contrast film developer
Water approx 50C 500 ml
Metol .............................................................2 g
Sodium Sulfite (anhydrous)......................90 g
Hydroquinone..............................................8 g
Sodium Carbonate (monohydrate*)......52.5 g
Potassium Bromide...................................5 g
Water to make 1000 ml

Mixing Instructions: Add chemicals in specified sequence.
Dilution: Use undiluted. Use between 65F/18C and 70F/21C for best results.
Usage: Starting point dev time: 6 mins.
Notes: *multiply amount by 0.833 if using Sodium Carbonate in anhydrous form.

http://www.digitaltruth.com/data/formula.php?FormulaID=117

Фиксаж:

Ну например такой:
Тиосульфат натрия ................................................250г
Сульфит натрия .....................................................20г
хлорид аммония(сульфат аммония )...............50(63)г
Уксусная кислота(пищевая эссенция 70%)...12мл

см также последнее сообщение в этой теме
http://molbiol.ru/forums/index.php?showtopic=521759&hl=#

По поводу обсчета пленки.

Если у вас в гель-доке есть белый люминесцентный экран для кумасевых гелей, то вы можете воспользоваться вашим гель-доком и Image Lab, который к гель-доку должен прилагаться.

Если у вас этого нет, вы можете пойте двумя способами:

1) соорудить подсветку снизу для просвета пленки насквозь. Как вы это сделаете это ваше дело:
-Можно снимать пленку напротив неба прикрепив ее к стеклу скочем,
-можно положить стекло на две подставки на стекло положить тонкую белую бумагу или кальку(а можете вместо бумаги использовать молочное(матовое) стекло или оргстекло(оно может плавится если лампа снизу будет его сильно греть)), а снизу подсвечивать стекло лампой.
-можно купить промышленный светильник с люминесцентными лампами(или светодиодами) и матовым экраном(на 4 трубки квадратный) и подсвечивать пленку им снизу.
-Можно купить фирменный просмотровый фотостолик
http://www.apostrof.ru/catalog_classic_line/
http://www.photosale.ru/fotomaterialy/labo...l_ap_15kh25_sm/

далее вы фотографируете пленку на просвет на любое цифровое фотоустройство,

начиная со смартфона(планшета) и заканчивая ФФ фотокамерами типа Sony A7 или A99,Canon 6D, Nikon D600(700,750)

И загоняете файл для обсчета в open soft, который вам уже посоветовали выше ImageJ(Fiji)

2)Вы используете планшетные сканеры на просвет например Epson perfection серии "V" или их предыдущие поколения. Пленка сканируется в цифровое изображение и вы опять можете обработать это изображение в программе ImageJ(Fiji)

Сообщение было отредактировано MMM - 20.01.2017 15:02

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Евгеша
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.01.2017 14:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

(ship @ 20.01.2017 15:10)
Ссылка на исходное сообщение  ну хорошо, вопрос только в том зачем это делать, если известно, что это нечувствительный метод?

Ну, во-первых в более чем 50% случаев чувствительность ECL избыточна.
Во-вторых - это во много раз дешевле.
В-третьих - Реактивы хранятся оочень долго.
В-четвертых - блот можно сканировать практически на любом дешевом планшетном сканере для документов.
В-пятых не нужна никакая фото комната, фото реактивы и рентген-пленка, Или дорогой хемидок.
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 20.01.2017 15:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

(MMM @ 20.01.2017 12:51)
Ссылка на исходное сообщение  Ну, во-первых в более чем 50% случаев чувствительность ECL избыточна.
Во-вторых - это во много раз дешевле.
В-третьих - Реактивы хранятся оочень долго.
В-четвертых - блот можно сканировать практически на любом дешевом планшетном сканере для документов.
В-пятых не нужна никакая фото комната, фото реактивы и рентген-пленка, Или дорогой хемидок.

ну для лабораторий, у которых нет денег и которые не занимаются наукой, - это отличный вариант, не спорю. либо когда люди на потоке делают одно и тоже и там гарантировано сильный сигнал и не надо ничего обсчитывать.

но что делать, если вдруг не хватило чувствительности?
Ответ как раз в этой ветке - пытаться либо както изощрятся, либо по новой заводить всю кухню, с пленкой, ECL и тп. реагент от биорад стоит не сильно дешевле ECL от миллипор. и хранятся ECL долго, лет 5 точно.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.01.2017 15:53     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

Наличие ECL не исключает использования красителей.Наличие красителей не исключает использование ECL.
Это не взаимоисключающие, а взаимодополняющие методы. Ко всему должен быть разумный подход.
Участник оффлайн! gold




 прочитанное сообщение 15.11.2017 14:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

(Евгеша @ 19.01.2017 13:03)
Ссылка на исходное сообщение  Здравствуйте! Ставим блоттинг. Для визуализации в наличии только гель-док, оснащенный Epi-White и UV-Trans 302 nm. При окрашивании блота колориметрическим субстратом, не видно белков интереса, не хватает чувствительности. При использовании хемилюминесцентного субстрата видно, но нет хеми-дока. Если использовать вторичные антитела с флюорохромами, можно ли будет что-нибудь увидеть с помощью нашего гель-дока? UV-Trans для этого подойдёт?

Добрый день! как я понимаю у вас geldoc XR+
При использовании экрана ( вроде как там фильтр и очки в комплекте)
http://www.bio-rad.com/ru-ru/sku/1708182-x...nversion-screen
можно увидеть Alexa Fluor 488 и тд (если возьмете вторичку с этой меткой).
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 18:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

https://wanelo.co/replicarolexwatches
https://musescore.com/fakerolexwatches
https://www.racked.com/users/Replicarolexwatches
https://sketchfab.com/Rolexrelicawatches
http://www.video-bookmark.com/bookmark/433...eplica-watches/
https://www.slideserve.com/ReplicawatchesUK...pt-presentation
https://www.theverge.com/users/Replicarolexwatches
https://www.yumpu.com/en/document/read/6532...lica-watches-uk
https://online.flippingbook.com/view/152275247/
https://www.instapaper.com/p/8767342
https://www.bigblueview.com/users/Replicarolexwatches
https://weheartit.com/watcheshutuk
https://sites.google.com/view/replicarolexwatches24/home
https://www.indiehackers.com/post/hints-on-...atch-113aef73a9
http://replicawatchesuk.esportsify.com/for...ica-rolex-watch
nigoal123
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  09.12.2021 11:39     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

The language should be แทงบอล active rather than passive สล็อต123 we carried out an analysis nigoal123 rather than 123game an analysis was carried out คาสิโนออนไลน์ It’s also important to use relevant keywords

and technical language to help หวย potential readers find your paper. เว็บ 123 These are the words or phrases เว็บ 123 a researcher might use when แทงบอลออนไลน์ searching for a paper on this topic. สล็อต123 You can find out more in our

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 07:39
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft