Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* SDS-page
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Rob
Участник



 прочитанное сообщение 07.08.2017 19:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Добрый день. Прогнал SDS gel в двух кондициях. Концентрация 1mg/mL. Как убрать смер? Надо получить чистые линии.
Спасибо за помощь.

скачать файл ____.pdf
размер: 165.51к
кол-во скачиваний: 183


Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 07.08.2017 19:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Маркер у вас вполне валидный, хотя мог бы быть по острее.
Значит дело в пробах.

а) Наиболее вероятная причина проблемы - банальный перегруз по пробам. Вы слишком много наносите общего белка для такого небольшого количества зон. У вас фактически одна зона. Если бы у вас весь общий белок распределялся между несколькими десятками зон, то тогда такая нагрузка на дорожку по общему белку была бы оправдана. При таком бедном спектре нагрузку можно уменьшить в 10-100раз.

б) Пробы развалились при приготовлении или хранении.
Участник оффлайн! Rob
Участник



 прочитанное сообщение 07.08.2017 19:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Благодарю.
Делал разведение дополнительное, как Вы и предложили, в10 раз. На геле ничего не было видно.
Белки храняться на -80С
Участник оффлайн! Rob
Участник



 прочитанное сообщение 07.08.2017 19:28     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Образцы грелись 10 минут при 95С, потом открутил при 12rpm 15минут и загрузил.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 07.08.2017 20:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Хранение белка при -80С не гарантирует его от деградации. к тому же проба могла деградировать еще до заморозки.

Странно что у вас ничего не видно при 10х разведении, хотя если зоны так же размыты(деградированы) - это вероятно. Попробуйте сделать раститровку проб по нагрузке. С шагом ~1,5-2х, но похоже это не поможет. Как вернуть деградировавшую пробу в исходное состояние, я думаю, не знает никто.

Какой у вас сэмпл буфер? А именно какая концентрация SDS в нем?
Участник оффлайн! Rob
Участник



 прочитанное сообщение 07.08.2017 22:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

К сожалению, концентрация SDS не указана. http://www.adipogen.com/ag-10t-0020/loading-buffer-5x.html. Буфер разводится в 5 раз

Повторил эксперимент, загрузил 0.05mg/mL. Картинка выглядит лучше, но все еще есть смер.
Если уменьшить температуру нагрева образцов с 95С до, к примеру, 70С? Это может помочь?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 08.08.2017 07:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Не-не-не! Снижать температуру не надо. Я бы в пробу SDS добавил до 1-2%, а кипятить можно и 15-20 минут. Деградация происходит как раз не во время кипячения, а при более низких температурах. А SDS повысить, потому что если его недостаточно, тоже может быть шмер. А то что используемый вами 5х буфер содержит мало SDS ясно из того, что он 5х. 5х буфер, в котором нормальное количество SDS, при комнатной температуре представляет собой творожисто-гелевую смесь, а не жидкий раствор.

Сообщение было отредактировано MMM - 08.08.2017 07:57

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Rob
Участник оффлайн! Rob
Участник



 прочитанное сообщение 08.08.2017 13:33     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Может в таком случае, попробовать добавить 4х буфер?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 08.08.2017 14:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

У вас нет SDS в лабе? Это нехорошо.
Там в буфере есть еще сам буфер и чем он концентрированнее тем хуже для фореза. Так что компенсационный SDS лучше добавлять в конечный раствор.
Участник оффлайн! Rob
Участник



 прочитанное сообщение 08.08.2017 19:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Нашелся SDS.
Перегоню образцы.

А может быть такой шмер результатом гликозелирования белка?
Спасибо.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 09.08.2017 08:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(Rob @ 08.08.2017 20:34)
Ссылка на исходное сообщение  
А может быть такой шмер результатом гликозелирования белка?


Может, но маловероятно там, в шмере обычно хоть какие-то зоны видны, а у вас сплошная мазня.
Участник оффлайн! Rob
Участник



 прочитанное сообщение 11.08.2017 01:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Вы оказались абсолюно правы!
При добавлении SDS 1.5% гель стал выглядить просто чудесно. Ну и концентрацию уменьшил тоже.
Благодарю
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 11.11.2017 23:38     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

На коммерческих стоковых раствора акриламид/бис пишут "gas stabilised".
Это чем и как именно его "стабилизируют"?
Guest
IP-штамп: frms6N2MIKC3Y
гость



 прочитанное сообщение 12.11.2017 02:37     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

очевидно обезгаживают и разливают в атмосфере азота-аргона-гелия, что дешевле скорее всего.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.11.2017 06:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

Угу! Если они так делают, то мозги у них не очень. Во-первых таким образом они повышают вероятность самопроизвольной полимеризации в банке, а во-вторых как гидролизовался водой акриламид, так и будет гидролизоваться и со временем хранения риски получить гель плохого качества из такого акриламида возрастают. Та же хрень происходит и в прекаст гелях, только уже не с акриламидом, а с полиакриламидом.
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 12.11.2017 13:10     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

(MMM @ 12.11.2017 07:56)
Ссылка на исходное сообщение  Угу!  Если они так делают, то мозги у них не очень.
У меня тоже вызвало сомнение, что "для стабилизации убирают ингибитор полимеризации".
Думал наоборот что барбатируют воздухом, али вовсе кислородом.

У меня кстати получилось забавно: я сток акриламидовый не в холодильнике а в комнате держал и год за годом - как бы ничего страшного не происходило. Засыпал я туда смешанный ионобменник и через пару месяцев - вся внезапно заполимеризовалось.
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.11.2017 15:28     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

Я думаю, что они дегазируют, чтобы после непредсказуемых температурных режимов транспортировки и хранения пузырьки в геле не образовывалимь.
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 13.11.2017 01:35     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

Ну т.е. версий, что означает "gas stabilised" в итоге 2:
1. Фирма дегазирует готовый стоковый раствор, что бы избавить от этой необходимости конечного потребителя. При этом если затем взболтать это дело - дегазация "тютю" + возрастает вероятность самопроизвольной полимеризации
2. Раствор продувают, чем то, может быть воздухом, может газовой смесью, обогащенной кислородом, что бы избежать самополимеризации.

Неужели никто не знает единственный верный ответ?
В случае со "стабилизированным хлороформом" - туда например добавляют что ли этанол, что бы пресечь образование фосгена...
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 13.11.2017 12:12     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

(metrim @ 13.11.2017 02:35)
Ссылка на исходное сообщение  Ну т.е. версий, что означает "gas stabilised" в итоге 2:
1. Фирма дегазирует готовый стоковый раствор, что бы избавить от этой необходимости конечного потребителя. При этом если затем взболтать это дело - дегазация "тютю" + возрастает вероятность самопроизвольной полимеризации
2. Раствор продувают, чем то, может быть воздухом, может газовой смесью, обогащенной кислородом, что бы избежать самополимеризации.

Неужели никто не знает единственный верный ответ?
В случае со "стабилизированным хлороформом" - туда например добавляют что ли этанол, что бы пресечь образование фосгена...

Элементарно - используют закон Генри и инертный газ N2, без всяких эксикаторов.
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 18:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

https://wanelo.co/replicarolexwatches
https://musescore.com/fakerolexwatches
https://www.racked.com/users/Replicarolexwatches
https://sketchfab.com/Rolexrelicawatches
http://www.video-bookmark.com/bookmark/433...eplica-watches/
https://www.slideserve.com/ReplicawatchesUK...pt-presentation
https://www.theverge.com/users/Replicarolexwatches
https://www.yumpu.com/en/document/read/6532...lica-watches-uk
https://online.flippingbook.com/view/152275247/
https://www.instapaper.com/p/8767342
https://www.bigblueview.com/users/Replicarolexwatches
https://weheartit.com/watcheshutuk
https://sites.google.com/view/replicarolexwatches24/home
https://www.indiehackers.com/post/hints-on-...atch-113aef73a9
http://replicawatchesuk.esportsify.com/for...ica-rolex-watch
nigoal123
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  09.12.2021 11:39     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

The language should be แทงบอล active rather than passive สล็อต123 we carried out an analysis nigoal123 rather than 123game an analysis was carried out คาสิโนออนไลน์ It’s also important to use relevant keywords

and technical language to help หวย potential readers find your paper. เว็บ 123 These are the words or phrases เว็บ 123 a researcher might use when แทงบอลออนไลน์ searching for a paper on this topic. สล็อต123 You can find out more in our

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 07:08
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft