Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Адаптация CHO адгезионной стабильной линии в суспензию
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Rob
Участник



 прочитанное сообщение 03.11.2017 19:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Здравствуйте друзья!

CHO-dhfr стабильная линия, которая находиться в адгезионной кондиции нужно адаптировать в суспензию. Мои попытки это провести остаюся неудачными.
В адгезионной кондиции линия растет при 10% FBS и DMEM питательная среда, перевожу в шейкер и меняю среду на Expi-CHO и снижаю FBS до 5%. Т.к. планирую постепенно уменьшение концентрации FBS.

Буду признателен за советы.
Благодарю.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 04.11.2017 08:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Растить до конфлюэнтности на богатой среде. Среду менять, супер с плавающими над слоем клетками пересевать на неадгезионный бактериальный пластик в свежей багатой среде(центрифуга). Смотреть на рост не адгезирующих клеток в бак чашках. Там где есть рост или там где он интенсивный пересевать опять на бак пластик и так штук 10 пересевов. Да еще среду можно постепенно менять уменьшая долю DMEM и увеличивая RPMI или F12 при чем пробовать начинать это делать еще на адгезивных конфлюэнтных чашках. Потом уже, когда удасться получить более менее устойчивую суспензионную линию, переходить к обеднению среды.

А зачем такие мучения? Разве нет суспензионных линий CHO, которые можно тупо купить? confused.gif
Участник оффлайн! Rob
Участник



 прочитанное сообщение 06.11.2017 17:17     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Спасибо...да, мучения...стабильная линия получена на CHO, адаптированных в адгезионной среде.

Хочу уточнить алгоритм действий...Собираю плавающие клетки и перевожу их в колбу для суспензии. Среду не меняю и процент FBS не убавляю...Выращиваю...опять пересеваю в колбу...При этом уже не чистую среду DMEM, а смешиваю с новой средой...
Все верно?...Или может надо сразу на шейкер ставить колбу?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 07.11.2017 11:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Колба для суспензий - это мне не очень понятно. Если это стекло и оно никак не обработано, то это в общем не очень то для суспензий.

Вам хочется прямого решения - их нет у меня. Решать проблему придется самостоятельно.
Методом проб и ошибок.

Среду на среду с пониженным содержанием кальция можно менять даже на конфлюэнтной чашке. А вот содержание сыворотки менять до тех пор пока не отберется суспензионная популяция не стоит. Даже более того ее можно повышать до 15-20%, при пересеве на суспензионнную гидрофобную посуду.

При пересеве в гидрофобную культуральную посуду(как бы для суспензий) суспензию надо довести до достаточно большой концентрации(центрифуга). Среду тоже использовать с уменьшением концентрации кальция. Если вы сняли суспензию в чистой DMEM, то снижать кальций надо медленнее, а не гопом-перескоком. Если вы уже постепенно уменьшили кальций в адгезионной чашке, то при переносе в гидрофобную, лучше по кальцию ничего не менять, а менять при следующем пересеве , когда будет видно, что популяция в суспензии делится.

как то так. Еще раз: конкретное решение придется найти самому. При чем для другой линии оно может не сработать. И еще может быть неприятность - в процессе адаптации к суспензии можно потерять, генную модификацию, обеспечивающую продукцию целевого белка.
Участник оффлайн! Rob
Участник



 прочитанное сообщение 07.11.2017 20:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Супер советы...Спасибо огромное....
Напрашивается вопрос, а может стоит делать линию уже в суспензионной среде. Вот как тогда проводить селекцию....Да, надо разбираться с этой темой.
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 18:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

https://wanelo.co/replicarolexwatches
https://musescore.com/fakerolexwatches
https://www.racked.com/users/Replicarolexwatches
https://sketchfab.com/Rolexrelicawatches
http://www.video-bookmark.com/bookmark/433...eplica-watches/
https://www.slideserve.com/ReplicawatchesUK...pt-presentation
https://www.theverge.com/users/Replicarolexwatches
https://www.yumpu.com/en/document/read/6532...lica-watches-uk
https://online.flippingbook.com/view/152275247/
https://www.instapaper.com/p/8767342
https://www.bigblueview.com/users/Replicarolexwatches
https://weheartit.com/watcheshutuk
https://sites.google.com/view/replicarolexwatches24/home
https://www.indiehackers.com/post/hints-on-...atch-113aef73a9
http://replicawatchesuk.esportsify.com/for...ica-rolex-watch

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 05:21
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft