Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
WhiteNike |
Стоит задача определить количество карбонилированных белков в культуре клеток, с использованием метода с ДНФГ. Для лизиса клеток использовали Рипу вместе с стрептомицин сульфатом и ингибитором протеаз, однако потом выяснилось, что ДНФГ взаимодействует с рипой и коктейлем и это свело все попытки померить карбонилированные белки на спектрофотометре на нет. Думаем попробовать лизис с использованием тритона х-100 в 50 мМ трис буфере (pH=8) + 10% стрептомицин сульфат + PMSF как ингибитор В теории ДНФГ не должен с PMSF реагировать.. Помогите пожалуйста, может быть есть способы лизировать клетки без ингибитора? Как можно попытаться решить эту проблему? Заранее огромное спасибо |
MMM Постоянный участник |
В теории гидразины должны реагировать с фторангидридами(PMSF). Так что плохая новость для вас ДНФГ должен в теории реагировать с PMSF. Вторая плохая новость для вас стрептомицин содержит по крайней мере одну альдегидную группу, которая должна реагировать с гидразином. Проверьте реакцию с раствором стрептомицина. А вот просто RIPA без ингибиторов, никаких карбонилов и альдегидов вроде не содержит. |
737MAX Участник |
(MMM @ 31.08.2019 13:45) --В теории ДНФГ не должен с ПМСФ реагировать В теории гидразины должны реагировать с фторангидридами(ПМСФ). Так что плохая новость для вас ДНФГ должен в теории реагировать с ПМСФ. Вторая плохая новость для вас стрептомицин содержит по крайней мере одну альдегидную группу, которая должна реагировать с гидразином. Проверьте реакцию с раствором стрептомицина. А вот просто РИПА без ингибиторов, никаких карбонилов и альдегидов вроде не содержит. мммыч а сколко РИПА буффероффф сусчествует в природе с СДС без СДС с ландышами без ландышей |
737MAX Участник |
(737MAX @ 02.09.2019 19:29) Radioactive Immmono Perecipit Action |
MMM Постоянный участник |
|
737MAX Участник |
(MMM @ 02.09.2019 21:53) Саша! Вот ты зачем этот вопрос задал? Или ты думал что я не знаю, что их составов примерно столько сколько авторов статей употребляющих это название? Или ты думал что я не знаю |
737MAX Участник |
(MMM @ 02.09.2019 21:53) Саша! Вот ты зачем этот вопрос задал? Или ты думал что я не знаю, что их составов примерно столько сколько авторов статей употребляющих это название? ммм ну ландно выложи СТАНДАРТНЫЙ RIPA |
watchesonline89 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |