molbiol.ru -> Гуанидин тиоцианат + протеиназа К

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Гуанидин тиоцианат + протеиназа К

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Almost

09.06.2017 13:08

URL #1

Добрый день! Подскажите пожалуйста, ингибируется ли протеиназа К в 4 М гуанидин тиоцианате? Спасибо!

MMM
Постоянный участник

09.06.2017 15:45

URL #2

Ингибируется.

R-J-Dio
Постоянный участник

10.06.2017 12:22

URL #3

и в хромпике тоже- Вы будете удивлены

Austin1819

11.06.2017 20:31

URL #4

6 M guanidinium, 30 mM sodium citrate (pH 7.0), 0.5% Sarkosyl,0.20 mg/ml proteinase K and 0.3 M b-mercaptoethanol, and incubatedat 55°C for 3–4 h.
https://www.researchgate.net/publication/13...m_DNA_isolation

Austin1819

11.06.2017 20:32

URL #5

почему у них тогда не ингибируется? или они не знают что ингибируется?

MMM
Постоянный участник

12.06.2017 09:05

URL #6

Не знают.
Недостатки образования.

Биологи(не зависимо от того где они получили образование) часто страдают отсутствием системного знания в области физики, химии и биохимии.

Поблагодарили (2): Austin1819, -Ъ-

genseq
Постоянный участник

12.06.2017 09:21

URL #7

Подскажите пожалуйста, ингибируется ли протеиназа К в 0,1% SDS?

Austin1819

12.06.2017 10:38

URL #8

(genseq @ 12.06.2017 10:21)

Подскажите пожалуйста, ингибируется ли протеиназа К в 0,1% SDS?

тут уж точно нет

avial
Постоянный участник

13.06.2017 11:13

URL #9

А зачем вам ее работа в 4М? Буферы разводятся объемом образца и концентрация гуанидина там пониже получается.

sceptique
Постоянный участник
временной жизни

13.06.2017 12:40

URL #10

(MMM @ 12.06.2017 10:05)

https://en.wikipedia.org/wiki/Proteinase_K

Этот крокодил крошит всё, и без активатора-кальция, и в 4М-мочевине. Последняя даже увеличивает её активность.

Изучайте структурную биологию и биокатализ - не будьте такими самоуверенными по поводу силы своего так называемого "образования".

Сообщение было отредактировано sceptique - 13.06.2017 12:43

Поблагодарили (2): Almost, criplenie

Horse-radish
Участник

13.06.2017 13:10

URL #11

Алмост, работает. Проверено именно на GTC, при указанных вами конц-ях.
+1 к предыдущему оратору.

Поблагодарили (1): Almost

-Ъ-
Постоянный участник
Москва

13.06.2017 13:46

URL #12

(Horse-radish @ 13.06.2017 14:10)

Алмост, работает. Проверено именно на GTC, при указанных вами конц-ях.
+1 к предыдущему оратору.

Кем проверено?
В 2-4 М GTC собственноручно проверял, пытался приспособить "продвинуть" к своим китам - масло масленное.
Черпаем знания из Вики!

sceptique
Постоянный участник
временной жизни

13.06.2017 14:16

URL #13

Ваш суб-Ъ-ективизм забавен против доказательств категории "А" и "В", на которые ссылается вики.

P.S. Аутоинактивации протеаз никто не отменял. Вы просто могли криво проверять не в том диапазоне концентраций.

Сообщение было отредактировано sceptique - 13.06.2017 14:18

MMM
Постоянный участник

13.06.2017 14:19

URL #14

(sceptique @ 13.06.2017 13:40)

Ну если очень хочется можно проверить на сывороточном альбумине.

Но, даже википидейной статье про ГТЦ написан 1М

may increase the activity several times, like the addition of 0.5–1% sodium dodecyl sulfate (SDS) or Guanidinium chloride (3 M), Guanidinium thiocyanate (1 M) and urea (4 M).

К сожалению или нет, но 4М ГТЦ не равно 4М мочевина.

Ну и там чушь написана про увеличение активности. Активность фермента с хаотропами и ПАВами растет незначительно(скорее незначительно падает), а вот доступность субстрата для атаки активным центром фермента возрастает действительно иногда в разы. Но ничто не вечно под луною. С ростом концентрации детергента(хаотропа) нарушается структура активного центра и привет.

Поблагодарили (1): Almost

Horse-radish
Участник

13.06.2017 14:25

URL #15

(-Ъ- @ 13.06.2017 11:46)

Мной проверено. Сожрать кусок ткани за 20 минут, конечно, не сожрет, но понадкусает знатно.

sceptique
Постоянный участник
временной жизни

13.06.2017 14:34

URL #16

Ъ, не портьте свои киты протеиназой К, они и без нее отлично работают. А так станут еще дороже и недоступнее для большинства.

Поблагодарили (1): criplenie

-Ъ-
Постоянный участник
Москва

13.06.2017 16:26

URL #17

(sceptique @ 13.06.2017 15:34)

Не бойтесь, те изыскания мною проводились практически 20 лет назад, ну примерно через некоторое время после выхода в свет этой злополучной статьи, вокруг чего эта дискуссия.
Протеиназа К в лиофилизованном виде идет в другом ките для экспресс пробоподготовки и, кстати, вполне себе бюджетный кит, несмотря на дорогостоящие компоненты.
В лизирующем растворе на основе 4 М и выше GTC с детергентами при правильном приготовлении

некоторые ткани, свернувшаяся кровь, гели агарозные солюбилизируются практически без остатка и без Протеиназы К.
Об обратимой инактивации ферментов в таком растворе я ничего не могу сказать, но возможно ДНК- и РНК-азы там действительно воскрешают при разбавлении этого раствора..., а Протеиназа К, которая легко дохнет при нагревании до 70-80 град - нет.

За отзыв -

MMM
Постоянный участник

13.06.2017 18:12

URL #18

(Horse-radish @ 13.06.2017 15:25)

Сожрать кусок ткани за 20 минут, конечно, не сожрет, но понадкусает знатно.

ГТЦ и без протеиназы неплохо растворяет белки.
Это очень грязный опыт, который ничего не доказывает.
Чистый опыт это, когда вы берете чистенький субстрат например актин или альбумин варите его в разных условиях и сравниваете на белковом форезе результат.

Поблагодарили (1): criplenie

Horse-radish
Участник

14.06.2017 15:43

URL #19

(MMM @ 13.06.2017 16:12)

Выход РНК/ДНК из ткани значительно возрастает при обработки протеиназой в денатурирующих условиях, естественно по сравнению с выделением БЕЗ протеиназы. Надеюсь ТС сделал для себя выводы.

А курсовую работу с "чистым опытом" по влиянию детергентов на активность протеиназы мне кажется в литературе описали уже не раз, но если хотите повторите и докажите всем, что я не прав.

watchesbiz
Постоянный участник

23.11.2021 15:16

URL #20

http://replicarolexwatches.simpsite.nl/
https://www.smore.com/rj7kh-best-replica-watches
https://www.athleticsnation.com/users/Replicarolexwatches
https://pastebin.pl/view/ab0e458a
https://mix.com/watcheshutukcom
https://www.woddal.com/post/359216_tiny-acc...nybody-039.html
https://share.naturalnews.com/posts/3904099
https://demo.wowonder.com/post/214429_the-i...-producers.html
https://rapichat.com/post/5369_our-purpose-...ible-there.html
https://dashburst.com/replicarolexwatches/1
https://sway.office.com/KifcQvn36MK821G8
https://flipboard.com/@replicarolex24
https://getpocket.com/redirect?url=https%3A...eshut.uk.com%2F
https://www.openstreetmap.org/user/Hints%20...20Rolex%20Watch

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.