Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
semi Постоянный участник Москва |
(-Ъ- @ 28.05.2020 15:58) .... - убрать ревертирование практически невозможно. Пока температура смеси от комнатной (несколько минут) до 95 доползает (еще минута) ревертаза уже насинтезирует кучу всего. ... Вот тут пишут, какой состав буфера в реакции должен быть, что Taq-полимераза сревертировала РНК без обратной транскриптазы.
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
Кстати, Tth полимераза имеет достаточно высокую активность ОТ, но в присутствии катионов Марганца вместо Магния. В Ампликор-китах от Роша (HIV, HCV...) это свойство реализовано было ... около 20 лет назад.
|
semi Постоянный участник Москва |
Прикольная комбинация серологического теста и ПЦР для выявления антител к SARS-Cov2. Позволяет работать с сухими пятнами крови. "..For the testing, the eluent was assayed using a modified Antibody Detection by Agglutination-PCR (ADAP) protocol [12-14]. Briefly, 8 µL of eluent was incubated with 8 µL of 1 femtomole of SARS-CoV-2 spike protein S1 subunit-DNA conjugate pair mixtures at 37 °C for 30 min. If present, the SARS-CoV-2 antibodies in the specimen engage with S1-DNA conjugate to agglutinate into a dense immune complex. To quantify the degree of agglutination, 116 µL of ligation solution (20 mM Tris, 50 mM KCl, 20 mM MgCl2, 20 mM DTT, 25 μM NAD, 0.025 U/μl ligase, 100 nM connector) was mixed with 4 µL eluent/conjugate mixture and incubated at 30 °C for 15 min. Then, 25 µL of the ligated solution was mixed with PCR master mix that contained primer pairs and polymerase for amplification under standard thermocycling conditions (95 °C for 10 min, 95 °C for 15 sec, 56 °C for 30 sec, 13 cycles). The pre-amplified products were then quantified in a 96-well qPCR plate. SYBR green-based qPCR was performed on a Bio-Rad CFX96 real-time PCR detection system (95 °C for 10 min, 95 °C for 30 sec, 56 °C for 1 min, 40 cycles). As a result of agglutination, specimens harboring high quantities of antibodies will have large quantities of amplifiable DNA, thus exhibiting a strong qPCR signal (low Ct). In contrast, samples without SARS-CoV-2 antibodies will have few DNA amplicons, thus yielding a weaker qPCR signal (high Ct)" Сообщение было отредактировано semi - 02.06.2020 11:04
|
Asterix Постоянный участник |
Им там рецензенты похоже таких вопросов не задавали перед публикацией . |
semi Постоянный участник Москва |
(Asterix @ 02.06.2020 13:59) Фантазеры однако .. и каким образом интересно вы из сухого пятна крови получите функциональные антитела? да еще количественно? Попытайтесь растворить сухое пятно крови без использования протеиназ и хаотропов ... Им там рецензенты похоже таких вопросов не задавали перед публикацией . Так это же препринт. Можете авторам прямо задать этот вопрос. В качестве самоназначенного рецензента.
|
kb1 Участник |
(semi @ 01.06.2020 17:27) Вот тут пишут, какой состав буфера в реакции должен быть, что Taq-полимераза сревертировала РНК без обратной транскриптазы. Вот уж фантазеры так фантазеры. Впрочем г-н Andrew D. Ellington и компания этим славится. Вероятнее всего ручки они плохо помыли - вот и стала Taq (даже в обычном коммерческом буфере с магнием) на РНК работать А что касается способности Taq работать как ревертаза, то этот феномен был исследован много лет назад (о чем авторы скромно умалчивают). Для проявления ревертазной активности требуется марганец (строго), значительная активность проявляется не на всех РНК-матрицах и уступает классическим ревертазам
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
Но в то же время хорошая дипломная работа, не важно какой результат, лишь бы было побольше "просмотров и лайков". Времена такие... Да, кстати, Рош свой кит по CoV-2 для автомата Cobus 6800/8800 сделал с Tth pol c Mn 2+ Сообщение было отредактировано -Ъ- - 03.06.2020 16:09 |
Vadim Sharov Постоянный участник Россия |
СП 3.1.3597-20 Профилактика новой коронавирусной инфекции (COVID-19) Раздел III по лабораторной диагностике и регистрации случаев. |
FFP3 |
(Vadim Sharov @ 03.06.2020 18:37) Диагностические тесты для выявления нового коронавируса (SARS-CoV-2), которые получили одобрение Росздравнадзора (на 1 июля) СП 3.1.3597-20 Профилактика новой коронавирусной инфекции (COVID-19) Раздел III по лабораторной диагностике и регистрации случаев. Почему столько мало ? |
FFP3 |
(-Ъ- @ 03.06.2020 17:03) Ну надо же, в NEB, Thermo, Promega и не знали что их Taq-и обладают таким ценным свойством или подло скрывали это 30 лет. Но в то же время хорошая дипломная работа, не важно какой результат, лишь бы было побольше "просмотров и лайков". Времена такие... Да, кстати, Рош свой кит по CoV-2 для автомата Cobus 6800/8800 сделал с Tth pol c Mn 2+ А за рубежом к этому времени стали появляться публикации с первыми попытками осуществить ПЦР – полимеразную цепную реакцию. Теперь эту аббревиатуру знают все. В двух словах, ПЦР позволяет путем многократного синтеза ДНК-полимеразой одного и того же участка ДНК (а для этого достаточно даже одной матричной молекулы), намножающегося в геометрической прогрессии, извлечь его из генома, визуализировать, секвенировать – одним словом, прочесть по буквам кода. Этот новый методический прорыв в генной инженерии, отмеченный вскоре после полной доработки Нобелевской премией, поначалу делал лишь робкие шаги. И эти шаги не остались незамеченными Е.И. Шварцем. В нашем «колхозе» был и О.К. Кабоев, который к тому времени привез из очередной командировки на Дальний Восток ряд термофильных бактерий, выделил из них терморезистентную ДНК-полимеразу и описал ее свойства в J. Bacteriology. Такая полимераза являлась одной из главных составляющих ПЦР, которая проходила сменяющие друг друга фазы плавления ДНК (нагрев до 92˚С), отжига ДНК (охлаждение до 50˚С) и т.д. Используя Кабоевскую полимеразу из Thermus thermophilus, Женя Шварц впервые в России воспроизвел долгожданную ПЦР. Этот метод Шварц и Кабоев не только поставили в ОМРБ, но и обучили ему, снабдив полимеразой многие лаборатории России от Москвы до Новосибирска
|
FFP3 |
(FFP3 @ 03.06.2020 22:02) А за рубежом к этому времени стали появляться публикации с первыми попытками осуществить ПЦР – полимеразную цепную реакцию. Теперь эту аббревиатуру знают все. В двух словах, ПЦР позволяет путем многократного синтеза ДНК-полимеразой одного и того же участка ДНК (а для этого достаточно даже одной матричной молекулы), намножающегося в геометрической прогрессии, извлечь его из генома, визуализировать, секвенировать – одним словом, прочесть по буквам кода. Этот новый методический прорыв в генной инженерии, отмеченный вскоре после полной доработки Нобелевской премией, поначалу делал лишь робкие шаги. И эти шаги не остались незамеченными Е.И. Шварцем. В нашем «колхозе» был и О.К. Кабоев, который к тому времени привез из очередной командировки на Дальний Восток ряд термофильных бактерий, выделил из них терморезистентную ДНК-полимеразу и описал ее свойства в J. Bacteriology. Такая полимераза являлась одной из главных составляющих ПЦР, которая проходила сменяющие друг друга фазы плавления ДНК (нагрев до 92˚С), отжига ДНК (охлаждение до 50˚С) и т.д. Используя Кабоевскую полимеразу из Thermus thermophilus, Женя Шварц впервые в России воспроизвел долгожданную ПЦР. Этот метод Шварц и Кабоев не только поставили в ОМРБ, но и обучили ему, снабдив полимеразой многие лаборатории России от Москвы до Новосибирска
|
Шаолинь Постоянный участник |
(FFP3 @ 04.06.2020 00:05) интересно судя по публикациям разница между американсским вариантом термофильной ПЦР и российсским 7 месяцев скорость импортазамещения |
Шаолинь Постоянный участник |
(Шаолинь @ 04.06.2020 15:30) интересно судя по публикациям разница между американсским вариантом термофильной ПЦР и российсским 7 месяцев скорость импортазамещения |
Шаолинь Постоянный участник |
(Шаолинь @ 04.06.2020 15:46) Праймерзависимая амплификация двух участков β-глобинового гена человека Шварц Е. И., Кабоев О. К., Гольцов А. А., Виноградов С. В., Лебеденко Е. Н., Берлин Ю. А. Биоорг. химия 1988, |
Шаолинь Постоянный участник |
|
USA5 |
(FFP3 @ 03.06.2020 22:02) А за рубежом к этому времени стали появляться публикации с первыми попытками осуществить ПЦР – полимеразную цепную реакцию. Теперь эту аббревиатуру знают все. В двух словах, ПЦР позволяет путем многократного синтеза ДНК-полимеразой одного и того же участка ДНК (а для этого достаточно даже одной матричной молекулы), намножающегося в геометрической прогрессии, извлечь его из генома, визуализировать, секвенировать – одним словом, прочесть по буквам кода. Этот новый методический прорыв в генной инженерии, отмеченный вскоре после полной доработки Нобелевской премией, поначалу делал лишь робкие шаги. И эти шаги не остались незамеченными Е.И. Шварцем. В нашем «колхозе» был и О.К. Кабоев, который к тому времени привез из очередной командировки на Дальний Восток ряд термофильных бактерий, выделил из них терморезистентную ДНК-полимеразу и описал ее свойства в J. Bacteriology. Такая полимераза являлась одной из главных составляющих ПЦР, которая проходила сменяющие друг друга фазы плавления ДНК (нагрев до 92˚С), отжига ДНК (охлаждение до 50˚С) и т.д. Используя Кабоевскую полимеразу из Thermus thermophilus, Женя Шварц впервые в России воспроизвел долгожданную ПЦР. Этот метод Шварц и Кабоев не только поставили в ОМРБ, но и обучили ему, снабдив полимеразой многие лаборатории России от Москвы до Новосибирска афигеть и даже Первую ПЦР в России сделали в Питере |
USA5 |
(USA5 @ 04.06.2020 16:43) |
USA5 |
(USA5 @ 04.06.2020 16:43) Начало 70х. Премия Ленинского Комсомола Весной 1972 года на доске объявлений появилось объявление, приглашавшее "молодых научных сотрудников" ( до 33 лет ) подавать работы на премию Ленинского Комсомола. Еще через 2 недели на месте этой бумажки появилась другая. В ней говорилось, что через 3 дня истекает срок подачи документов на премию, а между тем ни одна работа в Совет не представлена. В тот же вечер мне позвонил близкий друг и соавтор и настойчиво предложил "подать". Произошла дискуссия. Я апеллировал к мудрости Ветхого Завета, твердя: " Блажен муж, иже не иде на совет нечестивых". Друг мой упирал на мудрость Завета Нового: " Стучите и отверзнется..." В конце-концов, поле боя осталось за ним, тем более, что никаких особых хлопот не предвиделось: день побегать с бумажками. Уже на следующий день, однако, мы натолкнулись на барьер, высоту которого сегодня трудно осознать. Нам нужны были 3 копии всех опубликованных работ. А, между тем, никаких ксероксов тогда не было и в помине, а множительная техника представлена была знаменитой "Эрой". Медленная, громоздкая, пахнувшая ацетоном машина располагалась за двойными железными дверями. Пропуском за двери служила заявка, подписанная людьми облеченными доверием. А срок исполнения колебался от 5 дней до месяца. Явившись с оформленной по всем правилам бумажкой, мы робко просочились через двойную дверь и предстали перед Начальником. Представ, проблеяли, что нам срочно ( "всем срочно" ), что Премия Ленинского Комсомола, ( "у меня - все работы срочные") и.т.д. Потомив, Начальник уже видимым образом начал умягчаться сердцем. И тут друг мой допустил ошибку, чуть было не ставшую роковой. В ответ на очередное (и уже довольно вялое) возражение: "у меня работать некому - девочки болеют", друг мой в невинности сердца предложил: " Давайте мы сами в обеденный перерыв или после работы сделаем " Лицо Начальника перекосилось. Он покраснел, желваки вздулись на скулах. Не поднимая на нас глаз, чтобы не сорваться, он, разделяя слова на слоги, выдавил: " Вы, что же, думаете, что я доверю вам процесс получения скрытого электростатического изображения? " Мы молчали, униженные и раздавленные. Тяжелое молчание длилось... и разрешилось неожиданным образом. " Завтра зайдите ", - будничным тоном сказал Начальник. Я вспомнил эту сцену через 10 лет, году, приблизительно, в 83, когда вернувшийся из США сотрудник делился ( чуть ли не на Общеинститутском Семинаре ) впечатлениями о поездке. " У них там на каждом этаже - ксерокс. Просто стоит включенный. И каждый сотрудник подходит и копирует, что хочет!", - захлебывался докладчик. " Если бы у нас так!!". Голос из зала дополнил: " Ага, и при каждой машине посадить по сотруднику первого отдела ". Еще через 10 лет мечта стала явью...Что там, бишь сказано в записных книжках Ильфа? "В 19ом веке считалось, что главное - изобрести радио. При сем предполагалось счастье человечества. Но вот, - радио есть, а счастья нет." Возвращаясь к премии, скажу, что не препятствие даже, а так, легкая заминка, возникла в самом конце беготни с бумагами. Все одобренное, пописанное и заверенное мы разложили, как предписано было в инструкции, по трем папкам и понесли в отдел Ученого Секретаря. Папки были куплены по 16 коп. ближайшем к Физтеху канцелярском магазине. Секретарь Ученого Секретаря, женщина опытная и благожелательная, папки не одобрила. " Вот, посмотрите, в каких симпатичных папках сдал нам работу С, " -сказала она. Я начал, было, рассусоливать, что не в папках дело, что содержание работы... Но мой стремительный соавтор уже несся к двери, увлекая меня за собой. В том же магазине были куплены три красные папки по 51 коп., - в точности такие же, как у С,... и бумаги поехали в Москву. Осенью, не найдя своей фамилии в списке лауреатов, я решил, что дело кончено. Однако, когда через месяц по делам я собрался ехать в Москву, мой энергичный друг стал уговаривать меня зайти в ЦК комсомола и забрать драгоценные папки с оттисками работ. " Пригодятся, " - твердил он с неискоренимым оптимизмом. "Да кто там их хранит? ", -начал канючить я, но друг показал мне на последнюю строчку в объявлении о конкурсе, где мелким шрифтом напечатано было, что авторы, участвовавшие в конкурсе, в течение года могут свои работы забрать, обратившись по адресу...Был указан адрес ЦК ВЛКСМ и приведен телефон. Подумав, что это - первая и почти наверняка последняя возможность побывать в логове Дракона, я согласился. По указанному телефону женский голос нежно спросил , когда мне удобно зайти, и уведомил, что приходить нужно с паспортом, и что пропуск будет ждать меня внизу. Спортивного вида молодой человек внимательно рассмотрел паспорт, потом меня, потом снова паспорт, потом надолго зафиксировал меня взглядом, и наконец, вложив в паспорт бумажку, протянул его мне. " На седьмой этаж на лифте поднимайтесь в 722 комнату ", - напутствовал он, -" И пропуск не забудьте отметить ". Я послушно сел в лифт, вышел на третьем этаже и, положив сердце своем не уходить, пока не утолю законного любопытства, отправился бродить по этажам. Потолки были высокими, пол - паркетным, стены выглядели свежеоштукатуренными. Никаких других следов пошлой роскоши я не заметил. Двери, ведущие из коридора в кабинеты, покрыты были дешевой фанеровкой характерного "школьного" цвета. Некоторые двери были открыты. В каждой комнате стояли столы, также смахивающие на школьные. За столами, а иногда и на столах сидели молодые люди и орали в телефоны: " Я спрашиваю, - прошел эшелон с бойцами у вас или нет ?!". " Где, черт побери у вас инструктор ?!. Я ему третий день не могу дозвониться!" Все это походило на плохой спектакль о комсомольской жизни, поставленный провинциальным театром. Сходство усугублялось тем, что по коридорам никто не ходил, - все летали. Походка - стремительная и слегка подпрыгивающая. Взгляд- пронизывающий и энергичный. Фразы - отрывистые. Жесты- рубленые. Через 15 минут я почувствовал, что любопытство мое полностью утолено. Осталось только посетить туалет. О туалетах ЦК ходили легенды, в которых эти заведения представлялись волшебной страной, текущей молоком и медом. Фантазеры уверяли, что там в каждой кабинке висит рулон туалетной бумаги, а рядом на полочке стоят запасные рулоны разных цветов. Чтобы дать понять, какие эмоции в те времена вызывали такие рассказы, напомню, что в 1972 году молодя кокетливая женщина, которой досталась туалетная бумага, просила продавца продеть внутрь рулонов веревочку, превращала покупку в ожерелье, вешала его себе на шею и гордо шла по улице, вызывая жгучее вожделение мужчин и наслаждаясь завистливым шипением менее удачливых дам. В туалете было довольно чисто. В некоторых кабинках, действительно, рулончики висели, в других - сиротливо белели картонные цилиндрики. Полотенце для рук могло бы быть и посвежее. Словом, я пришел к выводу, что никакие особенные сюрпризы здесь меня не подстерегают. И ошибся. Атлетического сложения мужчина энергично распахнул дверь и стремительно влетел в заведение. Так же энергично дверь закрыл. Окинул помещение орлиным взглядом и...потух. Впечатление было такое, что у меня на глазах шилом проткнули пузырь. Лицо мужчины посерело и сморщилось, колени подогнулись. Он ссутулился и зашаркал к писсуару. Подойдя, оперся левой рукой о стену, а правой стал мучительно, рывками расстегивать молнию. При этом он все время тихо поскуливал. Потом он неловко молнию застегивал, по стариковски глядя вниз и не переставая глухо стенать. Шаркая, направился к двери. Я, обомлев, смотрел на все это, готовясь подхватить падающее тело и позвать на помощь. Мужчина взялся за ручку двери и простонал в последний раз. Затем произошло второе чудо. Спина распрямилась. Плечи расправились. На лице вспыхнул здоровый румянец. Рывком он распахнул дверь и стремительно выскочил.. Я выглянул наружу. Мужчина упруго летел по коридору навстречу такому же красавцу. " Выступил, выступил он на слете. Сам приехал и выступил ! ", - победоносно кричал он... " Чертово местечко ", - заключил я и, не мешкая, поднялся на седьмой этаж. Постучав и получив приглашение войти, я оказался в громадной комнате, уставленной металлическими стеллажами. На стеллажах тесно, переплет к переплету стояли сотни папок. И каких! Каждая могла украсить любую Прибалтийскую выставку художественных произведений из кожи. Сидевший у окна молодой человек завладел моим пропуском и, сверившись с записями журнале предложил мне найти свои папки самому. Наши красные Золушки по 51 коп. были видны издалека и производили впечатление бомжей на дипломатическом приеме. Однако я сделал вид, что внимательно разглядываю переплеты и пошел вдоль стеллажей. Наудачу вытянул одну из папок. По благороднейшему мышиного оттенка сафьяну сверху червонным золотом было вытеснено: " Наши знания - тебе, родной Комсомол ! ". Ниже, золотой нитью двух разных оттенков был Бог знает в какой технике изображен комсомольский значок. Еще ниже, уже серебром - название какого-то московского института. Затем- фамилии авторов. И, наконец, название работы: " О роли горчичных масел при киле у крестоцветных ". Мне стало тошно, я взял своих сироток, расписался и вышел вон. Вернувшись в Питер я в красках по горячим следам описал все увиденное своему другу. " Говорил я тебе, что по шестнадцать ли копеек, по пятьдесят ли одной - все едино ", - заключил я свой рассказ. "Да, правильно тебя раскусили, -парировал он, - и впрямь нельзя тебе доверять процесс получения скрытого электростатического изображения? " |
Шаолинь Постоянный участник |
(USA5 @ 04.06.2020 16:43) отголоски Петра Первого |
Шаолинь Постоянный участник |
опрос |
Vista |
В боксе много бумажных бланков, хлорка в контейнере на полу. Это из минусов. Если, можно, давайте ещё раз по шагам, что делать? 1) отдельная пипетка для ПКО 2) ... |
Vista |
|
dk Постоянный участник Россия |
|
vb Постоянный участник |
(Vista @ 05.06.2020 18:09) Появилась ещё одна версия, что это интерференция. это реально может быть? и вообще что это такое в теме пцр что вы имеете в виду применительно к пцр? |
Vista |
|
vb Постоянный участник |
(Vista @ 06.06.2020 08:32) ну просто явление РНК-интерференции описано по ссылке выше от dk. но какое это отношение имеет к пцр я не знаю. типа в образце есть siRNA которые блокируют обратную транскрипцию? ну тогда у вас будут ложно-отрицательные результаты. кроме того, я конечно далек от этой темы, но мне кажется, что при пробоподготовке обычными для диагностической пцр методами, siRNA будут теряться. кроме того, я не уверен, что это вообще работает для обратной транскрипции. насколько я помню, это про трансляцию и прямую транскрипцию. хотя, может, вы имели в виду что-то другое, я не знаю. |
vb Постоянный участник |
(Vista @ 05.06.2020 16:28) Здравствуйте, уважаемые форумчане) извините за долгое отсутствие, очень много работы. Проблема НЕ РЕШЕНА!!! Сегодня из 94 проб чуть больше 10 отрицательных! Про око не знаю, делала не я, а звонившая мне исполнительница была в сильном эмоциональном шоке, пришлось по телефону наливать успокоительные "капли". Поясню, у нас нет электорофореза и возможностей постановки экспериментов. Поток, поток, поток проб! Нет времени. Нет сил. Нет дополнительных средств. Даже пластика нормального нет, тотальный дефицит. Вчера был представитель производителя, грубых нарушений не нашёл, кроме отсутствия "трепета" (это моя терминология))) Так, узнала положит. контроль, это, похоже, та самая плазмида (что-то искусственно созданное) Дополнительные микробы исключены, исполнитель почти в противогазе) В боксе много бумажных бланков, хлорка в контейнере на полу. Это из минусов. Если, можно, давайте ещё раз по шагам, что делать? 1) отдельная пипетка для ПКО 2) ... боюсь, что так вы проблему не решите. я бы воспользовался двумя путями: 1. элементарный математический анализ для поиска закономерностей. Это возможно, если у вас в лабе электронная база и можно выгрузить данные, включая серии наборов, расходников, исполнителей работ, источник образцов. 2. последовательный поиск источника контаминации (если это она, конечно, а не косяк производителя или взятия проб). тут придется потратить время и расходники. а что делать? я бы начал с такого: готовите два десятка моделей образцов (все отрицательные, естественно - физраствор из аптеки) в другой лаборатории. и даете их вашему лаборанту. дальше действия в зависимости от результатов. кстати говоря, по хорошему, у вас должны быть процедуры регулярного внутрилабораторного контроля и действий при отклонениях. я понимаю, что это пока для наших реальностей звучит экзотично, но биофарма к этому уже пришла. клд тоже придет.
|
semi Постоянный участник Москва |
Сообщение было отредактировано semi - 06.06.2020 13:23 |
Vista |
(semi @ 06.06.2020 14:23) На последних циклах в пробах что-то поднимается, но не поднимается в отрицательном контроле — это не контаминация, а что-то с дизайном или качеством олигов, смею предположить. Температуру отжига повысить нельзя? СОП не велит? не только в отрицательных контролях, но и не во всех наборах одной серии. день, два, три норм, потом кирдык). Вчера вообще странно, первая хорошо, вторая 90% положительных, третья вообще без положительных (контроли ок) серия одна. вот как так то? между выделениями протирка спиртом, уф. За день была постановка с высокими I5c и Ct 16, 18, 20. Я если честно грешу на оператора все же, скорость выделения бешеная, у меня намного дольше получается(, поэтому я редко делаю, нужен вал. |
semi Постоянный участник Москва |
(Vista @ 06.06.2020 14:48) не только в отрицательных контролях, но и не во всех наборах одной серии. день, два, три норм, потом кирдык). Вчера вообще странно, первая хорошо, вторая 90% положительных, третья вообще без положительных (контроли ок) серия одна. вот как так то? между выделениями протирка спиртом, уф. За день была постановка с высокими I5c и Ct 16, 18, 20. Я если честно грешу на оператора все же, скорость выделения бешеная, у меня намного дольше получается(, поэтому я редко делаю, нужен вал. Тогда, похоже, ничего не остается, как осуществлять ротацию персонала на рабочих местах и проводить постоянный анализ (оператор, лот, условия и т.д), который советовали выше. Какая разница, что Ваш уникальный оператор, как многорукая Шива, выделяет РНК со скоростью робота, если все равно приходится повторять анализы?
|
vb Постоянный участник |
а то у меня сотрудника третью неделю с больничного не выпускают - то анализы теряют, то вдруг они положительные... блин.
|
Vista |
(vb @ 06.06.2020 17:12) хоть самому к вам приезжай и решай проблему. а то у меня сотрудника третью неделю с больничного не выпускают - то анализы теряют, то вдруг они положительные... блин. спасибо огромное))) мы на Урале, у нас хорошо, лето! за окном правда) |
Vista |
(semi @ 06.06.2020 15:50) Тогда, похоже, ничего не остается, как осуществлять ротацию персонала на рабочих местах и проводить постоянный анализ (оператор, лот, условия и т.д), который советовали выше. Какая разница, что Ваш уникальный оператор, как многорукая Шива, выделяет РНК со скоростью робота, если все равно приходится повторять анализы? Вот и я такого же мнения |
H3K27me2 Участник |
(vb @ 06.06.2020 17:12) хоть самому к вам приезжай и решай проблему. а то у меня сотрудника третью неделю с больничного не выпускают - то анализы теряют, то вдруг они положительные... блин. Приезжайте к нам на Колыму Нет уж лучше Вы к нам |
H3K27me2 Участник |
(Vista @ 06.06.2020 14:48) не только в отрицательных контролях, но и не во всех наборах одной серии. день, два, три норм, потом кирдык). Вчера вообще странно, первая хорошо, вторая 90% положительных, третья вообще без положительных (контроли ок) серия одна. вот как так то? между выделениями протирка спиртом, уф. За день была постановка с высокими I5c и Ct 16, 18, 20. Я если честно грешу на оператора все же, скорость выделения бешеная, у меня намного дольше получается(, поэтому я редко делаю, нужен вал. выкинуть пипетки наборы реалтаймер пластик и проавтоклавировать лабу |
H3K27me2 Участник |
(semi @ 06.06.2020 15:50) Тогда, похоже, ничего не остается, как осуществлять ротацию персонала на рабочих местах и проводить постоянный анализ (оператор, лот, условия и т.д), который советовали выше. Какая разница, что Ваш уникальный оператор, как многорукая Шива, выделяет РНК со скоростью робота, если все равно приходится повторять анализы? на ТВ смотрю как ПЦР ставят в водолазных скафандрах в 96 пцр плашку и без скафандра нелегко попасть |
dk Постоянный участник Россия |
|
H3K27me2 Участник |
(dk @ 06.06.2020 20:24) Vista, то что вы описываете не укладывается в мой (немалый) опыт по "засёру". Не бывает такого "тут помню - тут не помню": капая из одних и тех же баночек то получать "+" то "-". Я бы грешил на "кривого" такмана: но если это стандартные промышленные наборы, транспортированные и хранящиеся согласно паспорта - такого быть не должно. Стоит поискать "косяк" где-то на стадии забора образцов или при выделении. Конечно, проавтоклавировать весь пластик и взять новый набор не помешает. Но и вариант с "ротацией" операторов тоже стоит попробовать. Плохо, конечно, что у вас поток анализов - можно было бы поэкспериментировать с одними и теми же пробами. Я в таких случаях брал лично себя и развлекался до посинения (но мне проще - я зоолог, у нас если человек - то точно чужой). " мой (немалый) опыт по "засёру" " © |
H3K27me2 Участник |
(dk @ 06.06.2020 20:24) Vista, то что вы описываете не укладывается в мой (немалый) опыт по "засёру". Не бывает такого "тут помню - тут не помню": капая из одних и тех же баночек то получать "+" то "-". Я бы грешил на "кривого" такмана: но если это стандартные промышленные наборы, транспортированные и хранящиеся согласно паспорта - такого быть не должно. Стоит поискать "косяк" где-то на стадии забора образцов или при выделении. Конечно, проавтоклавировать весь пластик и взять новый набор не помешает. Но и вариант с "ротацией" операторов тоже стоит попробовать. Плохо, конечно, что у вас поток анализов - можно было бы поэкспериментировать с одними и теми же пробами. Я в таких случаях брал лично себя и развлекался до посинения (но мне проще - я зоолог, у нас если человек - то точно чужой). dk у меня опыт по пцр засеру с 1988 |
H3K27me2 Участник |
(dk @ 06.06.2020 20:24) Vista, то что вы описываете не укладывается в мой (немалый) опыт по "засёру". Не бывает такого "тут помню - тут не помню": капая из одних и тех же баночек то получать "+" то "-". Я бы грешил на "кривого" такмана: но если это стандартные промышленные наборы, транспортированные и хранящиеся согласно паспорта - такого быть не должно. Стоит поискать "косяк" где-то на стадии забора образцов или при выделении. Конечно, проавтоклавировать весь пластик и взять новый набор не помешает. Но и вариант с "ротацией" операторов тоже стоит попробовать. Плохо, конечно, что у вас поток анализов - можно было бы поэкспериментировать с одними и теми же пробами. Я в таких случаях брал лично себя и развлекался до посинения (но мне проще - я зоолог, у нас если человек - то точно чужой). "Я бы грешил на "кривого" такмана" © нормально нуно собрать все пакман наборы в одной лабе и провести слепй тест включая китайсские корейсские американсские европейсские |
H3K27me2 Участник |
(Vista @ 06.06.2020 14:48) не только в отрицательных контролях, но и не во всех наборах одной серии. день, два, три норм, потом кирдык). Вчера вообще странно, первая хорошо, вторая 90% положительных, третья вообще без положительных (контроли ок) серия одна. вот как так то? между выделениями протирка спиртом, уф. За день была постановка с высокими I5c и Ct 16, 18, 20. Я если честно грешу на оператора все же, скорость выделения бешеная, у меня намного дольше получается(, поэтому я редко делаю, нужен вал. "За день была постановка с высокими I5c и Ct 16, 18, 20."© Ct ничего не значат некоторые пакманы дают одну копию на 40 другие на 30 |
dk Постоянный участник Россия |
(H3K27me2 @ 06.06.2020 17:43) нормально нуно собрать все пакман наборы в одной лабе и провести слепй тест включая китайсские корейсские американсские европейсские Это конечно да - но вот у ТС, как мне кажется, нет такой возможности. У них, как я понимаю, небольшая диагностическая лаборатория, а не НИИ.
|
H3K27me2 Участник |
(dk @ 06.06.2020 20:57) Это конечно да - но вот у ТС, как мне кажется, нет такой возможности. У них, как я понимаю, небольшая диагностическая лаборатория, а не НИИ. причем тут ТС это должен делать Роспотребнадзор |
H3K27me2 Участник |
(Vista @ 28.05.2020 11:53) А, ещё) смеси для амплификации не готовим. В стрипах уже готовая леофилизированная сухая смесь от производителя. Только кап туда 50мкл выделенной РНК и всё ) дурдом |
H3K27me2 Участник |
(Vista @ 28.05.2020 11:53) А, ещё) смеси для амплификации не готовим. В стрипах уже готовая леофилизированная сухая смесь от производителя. Только кап туда 50мкл выделенной РНК и всё ) а потом куда вы эти стрипы суете ? |
vb Постоянный участник |
(Vista @ 06.06.2020 15:38) а... ничего не имею против урала, но мою проблему вы не решите |
H3K27me2 Участник |
(Vista @ 28.05.2020 11:53) А, ещё) смеси для амплификации не готовим. В стрипах уже готовая леофилизированная сухая смесь от производителя. Только кап туда 50мкл выделенной РНК и всё ) вроде на 50 миклов реалтаймеров нет |
H3K27me2 Участник |
(vb @ 06.06.2020 21:34) vb тыж токма сказал поедешь на Урал |
H3K27me2 Участник |
(H3K27me2 @ 06.06.2020 22:14) Участник онлайн! vb Постоянный участник прочитанное сообщение сегодня, 17:12 Сообщение для модератора Личное письмо Отправить e-mail Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей URL #81 множественное цитирование хоть самому к вам приезжай и решай проблему. а то у меня сотрудника третью неделю с больничного не выпускают - то анализы теряют, то вдруг они положительные... блин. Всего благодарностей: 2 Поблагодарили (2): Asterix, Vista Поблагодарить автора сообщения |
H3K27me2 Участник |
(Vista @ 27.05.2020 00:12) Прямо SOS! Проблема с контаминацией, кто нибудь готов помочь? У нас небольшая ПЦР-лаборатория при городской больнице, мы практики, поэтому нужны реальные практические советы. ФИО адресс номер паспорта |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |