Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Качество биологического материала -- как может повлиять на исход ПЦР --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! TumAnn




 прочитанное сообщение 25.09.2010 04:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Здравствуйте, уважаемые коллеги.
Возможно, мой вопрос покажется кому-то глупым, а ответ очевидным... но я не так давно попала в эту сферу, и на работе не с кем посоветоваться, к сожалению...
Может быть, вы сможете если не помочь с ответом, то хоть подсказать где искать его.

Вот какой вопрос: насколько сильно качество биологического материала влияет на результат пцр? Особенно если работа идет с рнк. Может ли культура клеток после стресса давать иной выход рнк, нежели до стресса?

Почему возник вопрос:
Мы работаем с культурой клеток, из которой выделяем РНК, далее следует реакция ОТ и РТ-ПЦР. Цель - исследование влияния внешних индукторов на экспрессию гена. После проведения первой серии исследований и получения удовлетворяющего результата кто-то случайно выключил на выходные наш СО2-инкубатор. Большая часть клеток погибла... а оставшаяся была оживлена, разогнана. И вот первая попытка проведения эксперимента в тех же условиях, что и предыдущие, закончилась удивительным результатом: сигнал присутствует лишь в малой части образцов, причем на планшете они распределены случайным образом. Никакой системы я не могу увидеть... из 4 повторностей одна может дать вполне заметный сигнал, а три другие абсолютно пусты. И так каждый образец. Как исследуемый ген, так и эндогенный контроль. От методики я не отступала. Что могло дать такой результат? грешу на клетки, но пока это на уровне интуиции.

Заранее большое спасибо.
Анна
Участник оффлайн! Statin
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.09.2010 10:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Если речь идет о РНК, то качество биологического материала является критичным и при выделении РНК и для последующей ПЦР. Единственное, что может некоторым образом смягчить эту зависимость это использование для qPCR маленьких ампликонов 70-110 bp. Качество материала, здесь важно как вы осуществляли подготовку суспензии клеток. Если сразу после культивирования осуществляете лизис клеток, а не храните их в заморозке, то все в порядке. На вскидку у вас может быть несколько проблем. 1. После разгона клетки чем-нибудь заразили. 2 выжили какие-нибудь резистентные клоны клеток и у них действительно нет экпрессии искомого гена. 3 наиболее вероятно все-таки проблемы с ПЦР, полетели реактивы (например, вместе с СО2 инкубатором выключили и холодильник, в котором они хранились), полетели праймеры (некачественнные праймеры очень не любят разморозки-заморозки, всегда аликвотируйте).
Участник оффлайн! TumAnn




 прочитанное сообщение 25.09.2010 12:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Спасибо большое за ответ.
Проверю каждый вариант.
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 27.09.2010 13:28     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

(TumAnn @ 25.09.2010 12:40)
Ссылка на исходное сообщение  Спасибо большое за ответ.
Проверю каждый вариант.


участки однонитивой рнка при стрессе убиваются быстрее , чем участки склонные к
рнк-рнк двунитчатости smile.gif
Участник оффлайн! admin121
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.05.2021 05:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

http://www.marocohra.com/img/index.html
http://www.marocohra.com/img/01.html
https://www.fineart-stories.de/images/01.html
https://www.fineart-stories.de/images/02.html
http://psm-rentik.cz/img/ssgh/02.html
http://lounskevabeni.cz/img/ssgh/index.html
http://www.obytnaauta-karavany.cz/img/karavany/03.html
http://altusvario-eshop.cz/img/parizska/03.html
http://altusvario-eshop.cz/img/parizska/index.html
http://altusvario-eshop.cz/img/parizska/02.html
http://ods12.sefredaktor.cz/img/ssgh/03.html
https://graffcolor.com.br/chat/images/03.html
https://graffcolor.com.br/chat/images/index.html
https://graffcolor.com.br/chat/images/02.html
http://foxtintas.com.br/img/01.html
http://foxtintas.com.br/img/03.html
http://ods12.sefredaktor.cz/ver.php
http://ods12.sefredaktor.cz/privacy.php
http://ods12.sefredaktor.cz/info.php
http://ods12.sefredaktor.cz/important.php



https://rb.gy/cun3ad
https://rb.gy/yg88kc
https://rb.gy/6cgeqp
https://rb.gy/devv52
https://rb.gy/xhjaot
https://rb.gy/4qrulb
https://bit.ly/3eUc2J7
https://bit.ly/3uZu1DC
https://bit.ly/3yfGAMN
https://bit.ly/3onrro7
https://bit.ly/3fkG3Rm
https://bit.ly/33P6Z6i
https://cutt.ly/Nb11Sk9
https://cutt.ly/Wb11Dk3 *
https://cutt.ly/jb11FTQ
https://cutt.ly/gb11GWp
https://cutt.ly/Mb11HSF
https://cutt.ly/lb11Jxl
https://cutt.ly/ub11J6x
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.05.2021 07:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

https://app.ex.co/stories/bestreplicawatche...-regime-for-you
https://rolexrelicawatches.hpage.com/replica-watches-uk.html
https://www.cgmimm.com/articles/hints-to-he...lica-watches-uk
https://www.deviantart.com/fakerolexwatches...es-UK-871090193
https://replicawatches24.exposure.co/best-r...eplicawatches24
https://knowyourmeme.com/users/replicawatchesuk
https://www.scoop.it/topic/bestreplicawatch...ica-rolex-watch
https://uberant.com/article/1268140-hints-o...ca-rolex-watch/
https://devpost.com/watcheshutuk
https://www.ted.com/profiles/26540630/about
https://drive.google.com/file/d/1uTx90WraSJ...iew?usp=sharing
https://ibb.co/hgfZwb0
https://writer.zohopublic.com/writer/publis...10192bd4c742ceb
https://replicawatches24.mystrikingly.com/b...ica-rolex-watch
https://my.desktopnexus.com/ReplicawatchesU...a-rolex--31049/
https://sway.office.com/Tqm7mC7s0VWLhKAl
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  01.06.2021 05:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

https://www.uptrennd.com/post-detail/hints-...-watch~ODY3MDU2
https://anotepad.com/note/read/mqg8p5jm
https://www.crokes.com/replicarolexwatches/profile/
https://ko-fi.com/post/Watches-Shopping-Gui...-Watc-E1E13PZV9
https://www.merchantcircle.com/blogs/replic...x-Watch/1966540
https://www.nairaland.com/6427528/watches-s...de-finding-fake
https://www.vingle.net/posts/3587193
https://fortunetelleroracle.com/sport/replica-watches-280478
https://www.goodreads.com/story/show/132736...ake-rolex-watch
https://www.diigo.com/item/note/85twz/phwr?...2395edb2dac07ea
https://github.com/ReplicawatchesUK/Replica...ake-Rolex-Watch
https://www.reddit.com/user/Bestreplicawatc...ke_rolex_watch/
https://slashdot.org/submission/13306958/wa...ake-rolex-watch
https://www.wattpad.com/1030107359-replica-...guide-finding-a
https://www.instructables.com/member/Fakero...licPreview=true
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  25.09.2021 06:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

http://replicarolexwatches.simpsite.nl/
https://www.smore.com/rj7kh-best-replica-watches
https://www.athleticsnation.com/users/Replicarolexwatches
https://pastebin.pl/view/ab0e458a
https://mix.com/watcheshutukcom
https://www.woddal.com/post/359216_tiny-acc...nybody-039.html
https://share.naturalnews.com/posts/3904099
https://demo.wowonder.com/post/214429_the-i...-producers.html
https://rapichat.com/post/5369_our-purpose-...ible-there.html
https://dashburst.com/replicarolexwatches/1
https://sway.office.com/KifcQvn36MK821G8
https://flipboard.com/@replicarolex24
https://getpocket.com/redirect?url=https%3A...eshut.uk.com%2F
https://www.openstreetmap.org/user/Hints%20...20Rolex%20Watch

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.10.21 00:25
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft