 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила
* Осаждение вирусной ДНК после рестрикции -- этанол или изопропанол --
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
   |
 leyshmaniozУчастник  |
 13.09.2011 12:12
как потом осаждать ДНК, 96% этанолом или изопропанолом и ацетатом натрия, ДНК 36кб, что посаветуете, что лучше? |
|
RJ Dio Постоянный участник |
13.09.2011 12:15
По сути. ИПС или зтиловый-разницы нет, если объемы результирующей смеси позволяют, используйте этиловый, осадок будет лучше виден, и не скользкий при том. Если осаждаете из большИх объемов водного раствора, предпочтительнее брать ИПС, но поаккуратнее с осадком при деконтировании жидкости Сообщение было отредактировано RJ Dio - 13.09.2011 12:16 |
|
basil2 Постоянный участник |
13.09.2011 13:25
(leyshmanioz @ 13.09.2011 13:12)  Мне нужно очистить вирусную ДНК после рестрикции, специального кита для этого у нас нет, я использовала пцр пюрификейшн кит от киагена, но так как там колонка только может 10мкг связывать, и не более 10кб, приходиться обратиться к фенол хлороформу,как потом осаждать ДНК, 96% этанолом или изопропанолом и ацетатом натрия, ДНК 36кб, что посаветуете, что лучше? интересно, чем это вы резали, если размер 36 кб? |
|
leyshmanioz Участник |
 13.09.2011 13:42
|
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
14.09.2011 17:38
(leyshmanioz @ 13.09.2011 13:12) Мне нужно очистить вирусную ДНК после рестрикции, специального кита для этого у нас нет, я использовала пцр пюрификейшн кит от киагена, но так как там колонка только может 10мкг связывать, и не более 10кб, приходиться обратиться к фенол хлороформу,как потом осаждать ДНК, 96% этанолом или изопропанолом и ацетатом натрия, ДНК 36кб, что посаветуете, что лучше? Разьбавьте объем после рестрикции ИПС до конечной конц. ИПС - 50%, и наносите на колонку порциями по 800 мкл хоть целый литр - мембрана на колонке в этом случае выступает в качестве банального "фильтра", а не сорбента. Удержит хоть кг.  Кстати на эту тему есть киты у Инвитека, кажется, ну и сами понимаете у кого  ...
|
|
RJ Dio Постоянный участник |
14.09.2011 17:42
|
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
14.09.2011 17:47
(RJ Dio @ 14.09.2011 18:42) не советовал бы длинную ДНК на силику сажать, порвет как Тузик грелкуПри сорбции в объеме и послед. встряхивании - да, но на колонке, тем более в спиртовом растворе...  не более чем при простом осаждении.
|
|
RJ Dio Постоянный участник |
14.09.2011 17:48
|
|
basil2 Постоянный участник |
14.09.2011 17:51
(-Ъ- @ 14.09.2011 18:47) При сорбции в объеме и послед. встряхивании - да, но на колонке, тем более в спиртовом растворе... не более чем при простом осаждении.ну, если разбавить пропанолом, то наверно да, ничего не порвется и намертво не залипнет. Но я бы так делать все-равно не стал: а) какая-то часть ДНК таки застрянет, б) а нафига собс-но колонки переводить, если осаждением прекрасно можно обойтись. |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
14.09.2011 18:02
(basil2 @ 14.09.2011 18:51) ну, если разбавить пропанолом, то наверно да, ничего не порвется и намертво не залипнет. Но я бы так делать все-равно не стал: а) какая-то часть ДНК таки застрянет, б) а нафига собс-но колонки переводить, если осаждением прекрасно можно обойтись.Дк, народ хочет работать на китах, ну а если киты эти с микроколонками - это то же ващеее...супер..., поэтому я так расшибаюсь. А потом, я этих колонок столько понаделал... 
|
|
leyshmanioz Участник |
14.09.2011 18:07
|
|
RJ Dio Постоянный участник |
15.09.2011 11:15
|
|
basil2 Постоянный участник |
15.09.2011 11:27
(RJ Dio @ 15.09.2011 12:15) колонки всяко лучше, чем не-колонки. везде, где можно, надо так и делать. По времени- вообще сравнивать нельзя. По потерям, к сожалению, ситуация хуже, но приемлемокак всегда офигенно продуманное и глубокое заявление! 
|
|
RJ Dio Постоянный участник |
15.09.2011 13:45
|
|
basil2 Постоянный участник |
15.09.2011 13:56
|
|
RJ Dio Постоянный участник |
15.09.2011 14:25
|
|
nigoal123 IP-штамп: frpXPq5TOmUHs гость |
30.11.2021 08:43
|
|
Guest IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE гость |
30.11.2021 09:39
|
|
watchesonline89 Постоянный участник |
28.12.2022 10:40
|
| « Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |
 |
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024 IPS, Inc.