Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Проявка результатов Western blot анализа на фотопленке
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Anastasia Buziashvili




 прочитанное сообщение 05.06.2018 19:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Здравствуйте, уважаемые биологи,

Собираю все необходимое для постановки Вестерн блот анализа. Нужная аппаратура в нашей лаборатории есть - форезная камера, аппарат для переноса, материалы в процессе сборки - все для буферов-гелей есть, антитела есть (первичные и вторичные, конъюгированные с пероксидазой хрена), нитроцеллюлозные мембраны и реактивы для проявки (люминол, кумаровую кислоту) заказали.

Темная комната у нас тоже есть.

Теперь вопрос. Как результаты вестерн блот анализа переносить с нитроцеллюлозной мембраны на фотопленку? Что для этого нужно, как проводить саму методику (пожалуйста, если кто этим занимался, можете поделиться ссылкой на рабочую методику?). И где, хотя бы теоретически, можно найти нужные материалы для проявки результатов Вестерн блота на фотопленку?
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.06.2018 20:14     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Не на фото пленку, а на рентгеновскую или купите специальную пленку для вестернов " голубой фильтр" называется, только после експозиции с мембраноиь пленку надо будет проявить сродни как обычную фотопленку проявляют- проявитель и закрепитель...
http://molbiol.ru/protocol/17_08.html
http://www.ncontrol.ru/catalog/rentgenovsk...i_rentgenplenki
посему по первоначалу рекомендую купить су бстрат для проявления пероксидазы прямо на мембране....
http://www.biovitrum.ru/product/morfologiy...gena/hromogeny/
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.06.2018 22:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

--Темная комната у нас тоже есть.

А красный фонарь?

Надо приобрести рентген пленку исключительно медицинскую и максимально возможной чувствительности. Внимание! Пленка для дефектоскопии не подходит ни в коем случае.
Пропись субстрата люминол/пара-кумаровая найдете в сети.

Мембрану после инкубации ополоснуть в воде. Бутербродная пленка в протоколе на molbiol названа Saran Wrap, сейчас более известна под названием "стрейч". Мне она не нравится. Я с успехом использую бухгалтерские прозрачные файлики из канцтоварного магазина с ними на много удобнее.
В темной комнате, но с красным светом, достаете 1 лист рентген пленки, кладете влажную мембрану на прозрачную пленку(можете использовать стекло вместо нижней пленки) капаете на мембрану субстрат и расплющиваете каплю субстрата по всей мембране прижимая к ней вторую верхнюю прозрачную пленку(смысл этой операции не дать субстрату контактировать с рентген пленкой, но в тоже время обеспечить попадание света от мембраны на пленку). Сверху на прозрачную пленку кладете рентген пленку и зажимаете весь этот бутерброд либо в медицинской кассете, в которой делают рентгеновские снимки, либо просто любым плоским грузом: книгой, стеклом, можно приклеить рентген пленку липкой лентой к верхней прозрачной пленке. Если вы делаете это в светонепроницаемой кассете, то можно включить обычное освещение и подождать. Если вы делаете это не в кассете и у вас слабый сигнал и нужна длительная экспозиция лучше накрыть весь бутерброд светонепроницаемой коробкой или одеялом.

После экспозиции пленка извлекается и проявляется в так называемом рентгеновском проявителе, это можно делать при красном свете, потом пленка фиксируется в фото фиксаже, фиксаж может быть любой даже от цветного фотопроцесса. После фиксации пленку споласкивают в проточной водопроводной воде и сушат.

Ссылки на проявители для рентген пленки.
https://www.digitaltruth.com/data/formula.php?FormulaID=92
или
https://www.digitaltruth.com/data/formula.php?FormulaID=117

Фиксажи:

кристаллический гипосульфит натрия 250 гр.
хлористый аммоний - 50 гр.
метабисульфит натрия - 17 гр.
Вода до 1л

Тиосульфат 300г
Хлористый аммоний 50г
натрия сульфит 25г
уксус столовый 9% - 60мл
вода до 1 литра

Уксус можно добавлять в раствор тиосульфата только после сульфита иначе будет беда.

Проявители и фиксажи можно купить и готовые в специализированных конторах продающих реактивы для рентген кабинетов.

Высушенную пленку можно сфотографировать со специального подсвеченного снизу просмотрового столика или с "белого" компьютерного монитора. Так же ее можно отсканировать на сканере, у которого есть модуль для транспарентного сканирования.
Участник оффлайн! Anastasia Buziashvili




 прочитанное сообщение 05.06.2018 22:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

(Tom1 @ 05.06.2018 21:14)
Ссылка на исходное сообщение  Не на фото пленку, а на рентгеновскую  или купите специальную пленку для вестернов " голубой фильтр" называется, только после експозиции  с мембраноиь пленку надо будет проявить сродни как обычную фотопленку проявляют- проявитель и закрепитель...
http://molbiol.ru/protocol/17_08.html
http://www.ncontrol.ru/catalog/rentgenovsk...i_rentgenplenki
посему  по первоначалу рекомендую купить су бстрат  для проявления пероксидазы прямо на мембране....
http://www.biovitrum.ru/product/morfologiy...gena/hromogeny/


Tom1, спасибо большое!
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.06.2018 22:30     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

"А красный фонарь?"
===========
Вспомнилось улица красных фонарей.....
Участник оффлайн! Anastasia Buziashvili




 прочитанное сообщение 05.06.2018 22:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(MMM @ 05.06.2018 23:03)
Ссылка на исходное сообщение  --Темная комната у нас тоже есть.

  А красный фонарь?

Надо приобрести рентген пленку исключительно медицинскую и максимально возможной чувствительности. Внимание! Пленка для дефектоскопии не подходит ни в коем случае.
Пропись субстрата люминол/пара-кумаровая найдете в сети.

Мембрану после инкубации ополоснуть в воде. Бутербродная пленка в протоколе на molbiol  названа Saran Wrap,  сейчас более известна под названием "стрейч". Мне она не нравится. Я с успехом использую бухгалтерские прозрачные файлики из канцтоварного магазина с ними на много удобнее.
В темной комнате, но с красным светом, достаете 1 лист рентген пленки, кладете влажную мембрану на прозрачную пленку(можете использовать стекло вместо нижней пленки) капаете на мембрану субстрат и расплющиваете каплю субстрата по всей мембране прижимая к ней вторую верхнюю прозрачную пленку(смысл этой операции не дать субстрату контактировать с рентген пленкой, но в тоже время обеспечить попадание света от мембраны на пленку).  Сверху на прозрачную пленку кладете рентген пленку и зажимаете весь этот бутерброд либо в медицинской кассете, в которой делают рентгеновские снимки, либо просто любым плоским грузом: книгой, стеклом, можно приклеить рентген пленку липкой лентой к верхней прозрачной пленке. Если вы делаете это в светонепроницаемой кассете, то можно включить обычное освещение и подождать. Если вы делаете это не в кассете и у вас слабый сигнал и нужна длительная экспозиция лучше накрыть весь бутерброд светонепроницаемой коробкой или  одеялом.

После экспозиции пленка извлекается и проявляется в так называемом рентгеновском проявителе, это можно делать при красном свете, потом пленка фиксируется в фото фиксаже, фиксаж может быть любой даже от цветного фотопроцесса. После фиксации пленку споласкивают в проточной водопроводной воде и сушат.

Ссылки на проявители для рентген пленки.
https://www.digitaltruth.com/data/formula.php?FormulaID=92
или
https://www.digitaltruth.com/data/formula.php?FormulaID=117

Фиксажи:

кристаллический гипосульфит натрия 250 гр.
хлористый аммоний - 50 гр.
метабисульфит натрия - 17 гр.
Вода до 1л

Тиосульфат 300г
Хлористый аммоний 50г
натрия сульфит 25г
уксус столовый 9% - 60мл
вода до 1 литра

Уксус можно добавлять в раствор тиосульфата только после сульфита иначе будет беда.

Проявители и фиксажи можно купить и готовые в специализированных конторах продающих реактивы для рентген кабинетов.

Высушенную пленку можно сфотографировать со специального подсвеченного снизу просмотрового столика или с "белого" компьютерного монитора. Так же ее можно отсканировать на сканере, у которого есть модуль для транспарентного сканирования.



МММ, спасибо огромное за очень подробную инструкцию!!!

Значит, как я поняла, понадобятся:

- высокочувствительная рентгеновская пленка. Аптечная подойдет? У нас такое вот, вроде, продается https://medbrowse.com.ua/rentgenovskaya-plenka-cena/kiev

- файлы для документов (с этим проблем нет)

- проявитель и фиксаж для рентгеновских снимков. Я пыталась самостоятельно разобраться с моим вопросом, искала готовые проявители-закрепители, нашла такое вот: https://novadent.prom.ua/g16583870-rentgenmaterialy. Надеюсь, такое подойдет?

- красная лампа. Вроде, у нас должна быть, но на случай, если нет, такая подойдет? https://www.beurer.com/web/ru/products/gent...red_lamps/IL-21

- белая камера с подсветкой снизу. Такая у нас точно есть.

И еще пару вопросов. Проявку-фиксацию пленки нужно проводить при красном свете, а сколько времени проявлять-фиксировать? После фиксации можно выносить пленку из темной комнаты, чтобы промыть в воде?

Еще раз огромнейшее спасибо!!!
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 06.06.2018 01:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Аптечная должна подойти. Продукция Онико РП-У вполне подходит. Ретина тоже подходит. Проявители и фиксажи от ОНИКО/AGFA тоже подходят. Ваш фонарь точно НЕ подходит вы ничего не увидите с этим фонарем. Можно попробовать фонарь на красных светодиодах.

--Проявку-фиксацию пленки нужно проводить при красном свете, а сколько времени проявлять-фиксировать? После фиксации можно выносить пленку из темной комнаты, чтобы промыть в воде?

Проявку фиксацию можно и в полной темноте проводить, просто при красном свете - это гораздо удобнее. Для этого понадобятся 2 фотокюветы одна с проявителем и одна с фиксажом/закрепителем. Время проявки определяется визуально по потемнению пленки. В свежем проявителе это обычно 2-3 минуты, в сильно поюзаном проявителе - минут 5-7. Фиксаж обычно минуты 3-5 работает, если он быстрый. Но время фиксации можно прикинуть по времени просветления кусочка непроявленной пленки в фиксаже его надо умножить на 2 - это и будет нужное время фиксации. После фиксации в течении 30-40 секунд в свежем фиксаже пленку уже можно осветить обычным светом, однако фиксировать нужно полное необходимой время, хоть и при включенном свете.
Участник оффлайн! Anastasia Buziashvili




 прочитанное сообщение 06.06.2018 12:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Ок, насчёт пленки, проявителя-фиксажа и лампы я поняла. Пока вопросов больше нет, где-то ближе к осени попробую все это сделать. Спасибо!
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 17:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/
http://simp.ly/p/nxGlWb
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24
https://8tracks.com/replicawatchesuk
Участник оффлайн! watchesonline89
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.12.2022 11:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

https://telegra.ph/Advantages-Of-Replica-Watches-08-03
https://issuu.com/home/published/_6_.docx
https://www.gta5-mods.com/paintjobs/watchesswiss
https://omegawatches89.onweb.it/
https://padlet.com/omegawatches89/je3eq9ol3xzmb9bp
https://www.pinterest.com/omegawatches89/
https://knowyourmeme.com/users/omegawatches89
https://bitcointalk.org/index.php?topic=76487.new#new
https://omegawatches89.blog.hu/
https://knowyourmeme.com/forums/general/top...f-so-why?page=1
https://penzu.com/p/c6f21f5d
https://www.reddit.com/user/omegawatches89/...are_so_popular/
https://www.vingle.net/posts/4647076
https://penzu.com/p/c68b65cc
https://diigo.com/0pige9

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 21:15
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft