Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* PAAG электрофорез белков -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: SDS PAAG
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


страницы (9): < 1 2 3 4 > »  
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Pavel2
Участник



 прочитанное сообщение 27.12.2006 19:42     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #51 множественное цитирование

Мне необходимо разогнать белки на форезе, а потом провести иммуноблот и выявить IgE-АТ к этим белкам. Поэтому я хочу узнать, нужно раствор с белками кипятить перед нанесением на гель?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 27.12.2006 19:52     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #52 множественное цитирование

Поэтому я хочу узнать, нужно раствор с белками кипятить перед нанесением на гель?

Если это SDS форез, то НУЖНО!!!
Guest
IP-штамп: fra6xdMWXgbHc
гость



 прочитанное сообщение 28.12.2006 09:35     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #53 множественное цитирование

(Pavel2 @ 27.12.2006 18:06)
Ссылка на исходное сообщение  Еще такой вопрос, буфер с белками перед нанесением на гель нужно кипятить чтобы белки денатурировались?


ну если в буфере есть мочевина, то конечно не надо.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 28.12.2006 11:51     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #54 множественное цитирование

---А если слить весь буфер после фореза и перемешать отношение трис/глицин не выровняется заново?

А вот хрена вам лысого!!!! Трис который выходит в верхний гель он не из нижнего буфера, а из геля и его количество в нижнем буфере, компенсируется не глицином из верхнего буфера, а хлоридом из геля. А потерянный глицин остается в геле, который вы извлекаете из камеры.

---Еще такой вопрос, буфер с белками перед нанесением на гель нужно кипятить чтобы белки денатурировались?

Скажем так денатурация это средство, с помощью которого увеличивается и стабилизируется процент связанного с белком SDS. Но то что при кипячении белки денатурируют. Биофизический фахт.

Если вас волнует проблема того, что при денатурации белок может потерять антигенную детерминанту. То это вопрос филозовский - может потерять, а может и не потерять. К тому же блотированный на мембрану белок частично ренатурирует. Востановится ли при этом АГ детерминанта тоже вопрос филозовский. Короче, в вашем случае, если антиген покрасился, то все хорошо, а если не покрасился это еще не значит, что его там не было. Нужн иммунохроматография или иммуноперципитация для полной у уверенности.
Участник оффлайн! Pavel2
Участник



 прочитанное сообщение 15.01.2007 13:24     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #55 множественное цитирование

Меркаптоэтанол можно заменить Dithiothreitol?
Какая здесь разница?
guest: ммм
IP-штамп: frHvyGooYAnV2
гость



 прочитанное сообщение 15.01.2007 13:48     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #56 множественное цитирование

---Меркаптоэтанол можно заменить Dithiothreitol?
МОНА!!!
---Какая здесь разница?
а) ДТТ можно класть в два раза меньше чем МЭ по молям.
б) ДТТ раз в 10 или больше дороже чем МЭ
в) ДТТ менее летучь, менее вонючь, менее токсичен, не требует вытяжки.
Гость
IP-штамп: frtbMasbqESIo
гость



 прочитанное сообщение 13.02.2007 13:30     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #57 множественное цитирование

Коллеги, есть ли у кого-то опыт выделения чистого HA вируса гриппа форезом, при каких условиях,белки окрашивать или нет? Подскажите!
Гость
IP-штамп: frNgDO7rvIshI
гость



 прочитанное сообщение 05.03.2007 12:12     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #58 множественное цитирование

А вот скажите, нужно ли контролировать pH акриламидного стока?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 05.03.2007 14:20     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #59 множественное цитирование

--А вот скажите, нужно ли контролировать pH акриламидного стока?

По рН акриламидного стока можно приблизительно контролировать качество акриламида. Измерять лучше по бумажке. При гидролизе акриламида образуется акриловая кислота и аммиак, последний, как более летучий частично уходит из раствора. Поэтому гидролизовавшийся раствор обладает некоей дополнительной кислотностью но рН чистой воды обычно может доходить до 5.2-5.5 поэтому если вы использовали деионизированную воду о плохом акриламиде будет говорить рН ниже 5-4.5 на диститлляте ниже 5. Но честно говоря это очень приблизительный метод и выдает информацию, если уж акриламид полное дерьмо, хуже чем квалификации реагент.
Гость
IP-штамп: frNgDO7rvIshI
гость



 прочитанное сообщение 05.03.2007 14:26     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #60 множественное цитирование

А если сток получился в районе 7,5?
Guest
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 05.03.2007 17:18     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #61 множественное цитирование

---А если сток получился в районе 7,5?

По бумажке или по рН метру?

Просто 30% АА там уже воды мало и рН уже не совсем тот, что в чистой воде. Индикатор этому подвержен меньше чем рН-метр.

А вообще подозрительно, типа АА, кто-то подтитровал или забуферил.
Еще варианты: не очень чистая вода.
А вообще, если форез симпатичный, то я бы не заморачивался.

У идеального АА рН раствора должен совпадать с рН воды, в которой его растворили.
Гость
IP-штамп: frNgDO7rvIshI
гость



 прочитанное сообщение 05.03.2007 18:26     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #62 множественное цитирование

По pH метру. В том-то и дело, что форезы отвратные
Если бы все тип-топ, не заморочился бы никто, естественно.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 06.03.2007 14:54     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #63 множественное цитирование

1) Проверте калибровку рН-метра
2) Проверте рН воды в которой растворяли сток АА
3) Померьте рН стока АА по индикаторной бумажке.
4) Не делайте ничего из 1-3, а вместо этого, добавте в сток АА деионизирующей смолы дауэкс.

Причины паршивого фореза: полохой АА, плохой Трис, плохой Глицин.
Плохой рН. Плохие пробы (мало кипяченые, мало SDS, много соли или не тот рН в пробах)
Участник оффлайн! Танаит




 прочитанное сообщение 06.03.2007 15:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #64 множественное цитирование

То есть все что угодно :))
Ладно, будем искать.
Спасибо всем за подсказки
Гость
IP-штамп: frHWt7eplAB5c
гость



 прочитанное сообщение 07.03.2007 07:22     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #65 множественное цитирование

у меня протеан 2 большой, помогите пожалуйста приготовить растворы белков для фореза, точнее как смешать образцы белков c sample буфером, сколько мкг белка надо взять и на сколько мкл, такая проблема: я наношу белки, а разделения нет после фореза, и сколько Вольт и амперы нужны при форезе, я новичок - обьясните простым языком... заранее спасибо, жду ответа срочно
Участник оффлайн! Nastasya
Участник



 прочитанное сообщение 28.03.2007 11:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #66 множественное цитирование

А если концентрирующий гель полимеризуется где угодно: в стакане, розлей на стол на столе... но никак не между стеклами, если уж соизволит то это больше похоже на приступ насморка у слона, что может быть не так?
Участник оффлайн! accelerant
Постоянный участник
Europe & Russia



 прочитанное сообщение 31.03.2007 12:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #67 множественное цитирование

(Гость @ 07.03.2007 14:22)
Ссылка на исходное сообщение  у меня протеан 2 большой, помогите пожалуйста приготовить растворы белков для фореза, точнее как смешать образцы белков c sample буфером, сколько мкг белка надо взять и на сколько мкл, такая проблема: я наношу белки, а разделения нет после фореза, и сколько Вольт и амперы нужны при форезе, я новичок - обьясните простым языком... заранее спасибо, жду ответа срочно


Иногда все же полезно научиться излагать свои мысли связно..
Гость
IP-штамп: fru928dN3/GhE
гость



 прочитанное сообщение 06.04.2007 14:05     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #68 множественное цитирование

Подскажите молекулярную массу ферритина свиньи,или методику его выделения из селезенки если такое возможно
Участник оффлайн! Сергей Васильевич




 прочитанное сообщение 06.04.2007 14:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #69 множественное цитирование

Подскажите молекулярную массу ферритина свиньи, или методику его выделения из селезенки если такое возможно
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 06.04.2007 15:36     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #70 множественное цитирование

Подскажите молекулярную массу ферритина свиньи

Точно не помню жираф большой, около 500-600кДа это нативный в конце концов можно в Генбанке уточнить.

или методику его выделения из селезенки если такое возможно.

Такое возможно, а методики нужно искать в первоисточниках.
Участник оффлайн! bukach
Постоянный участник
Geneva, Switzerland



 прочитанное сообщение 06.04.2007 18:49     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #71 множественное цитирование

(Сергей Васильевич @ 06.04.2007 14:14)
Ссылка на исходное сообщение  Подскажите молекулярную массу ферритина свиньи, или методику его выделения из селезенки если такое возможно



а) базы данных, например swiss prot
вот что он про ферритин пишет. если пойдете по ссылкам, то там помимо его а.к. последовательности обнаружите еще и ссылки на статьи по выделению
http://ca.expasy.org/cgi-bin/sprot-search-...rritin%2C%20pig

б) еще PubMed не бесполезен в подобных разысканиях
Гость
IP-штамп: frmkz51JvFK6w
гость



 прочитанное сообщение 18.05.2007 15:44     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #72 множественное цитирование

Помогите!
Уже испробовали все, что могли!
После прокраски таинственно исчезают все белки до 70 кДа. Причем в концентрирующем геле их нет ?!
Участник оффлайн! Dmitry Molotkov




 прочитанное сообщение 25.06.2007 13:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #73 множественное цитирование

Подскажите, если кто знает, как самому сделать градиент-формер для приготовления градиентных ПААГ. Буду рад любым ссылкам, описаниям, принципам работы и т.д. Заранее спасибо.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 26.06.2007 18:19     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #74 множественное цитирование

--Помогите!
Уже испробовали все, что могли!
После прокраски таинственно исчезают все белки до 70 кДа. Причем в концентрирующем геле их нет ?!

опишите протокол окраски.
С составами растворов.

Похоже они у вас вымываются либо фиксация, либо окраска хромают.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 26.06.2007 20:22     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #75 множественное цитирование

--Подскажите, если кто знает, как самому сделать градиент-формер для приготовления градиентных ПААГ. Буду рад любым ссылкам, описаниям, принципам работы и т.д. Заранее спасибо.

Принцип описан у Остермана в электроферозном томе.

Самый топорный вариант два стакана и две U-образные трубки с длиной рук не меньше чем высота стакана(трубки должны иметь кран или любое устройство отсекающее поток в них. Два стакана соединяются одной трубкой(как сообщающиеся сосуды) из одного из стаканов второй трубкой делается слив. В стакан со сливом помещается магнитный мешальник, конструкция водружается на магнитную мешалку. Сливную трубку соединяют с резервуаром в котором собираются сотворить концентрационный градиент. Готово дело.



Сделать можно из двух бакпечаток. Или баночек на их основе.
http://www.medp.spb.ru/product/lp_bpk.php

В одной баночке у самого дна в цилиндрической стенке делается отверстие по диаметру чуть больше чем стержень от шариковой ручки, в другой делаются два таких отверстия одно напротив другого(как бы лежащие на противоположных концах диаметра). В каждое отверстие вставляется по отрезку от трубочки стержня шариковой ручки для того что бы стержень герметично зафиксировался в отверстии на отрезок трубочки одевают уплотнительное резиновое колечко(например из нипельной велорезины или тонкой силиконовой трубки). У вас должно получится две емкости со сливными трубочками снизу - у одной - одна, у другой - две. Теперь с помощью тонкой резиновой трубочки(силикон) надо соединить одну емкость с другой. Трубочка должна быть такой длины, что бы ее можно было легко пережимать каким-нибудь зажимом. У вас должно получится два сообщающихся сосуда, пермычку между которыми вы можете перекрывать зажимом. У одного из сосудов должна остаться еще одна сливная трубочка. К этой трубочке надо так же подсоединить тонкую резину, в конец которой вставлен тонкий типик от автоматической пипетки или игла от шприца. Эта сливная трубочка тоже должна иметь возможность перекрываться зажимом. Все! Теперь осталось сделать магнитный мешальник из обрезка гвоздя запаянного в туже трубочку от стержня шариковой ручки. Хэнд мэйд градиент готов. Вместо баночек можно использовать шприцы или пробирки с плоским дном.

Другой продвинутый вариант делается из двух толстых блоков орг стекла.

Толщина 30-40мм и где то 85х85(150х150) мм размером

В одном рядом друг с другом паралельно в торце делаются два сквозных отверстия подходящего диаметра(15-20мм)(прообраз все тех же сообщающихся сосудов) высота(глубина) подбирается в зависимости от объема градиента, но выше 150мм не надо. В торце другой заготовки примерно по центру делается глухое толстое отверстие диаметров от 8-12мм и глубиной мм 50-75 - это основа будущего цилиндрического крана. Расстояние от глухого конца отверстия до ближайшего торца блока должно быть мм на 5 больше чем диаметр сообщающихся сосудов. Теперь в заготовке с глухим отверстием надо сделать два масеньких отверстия лежащих на одной линии и перпендикулярно плоскости заготовки в глухое отверстие( так сказать перпендикулярно оси глухого отверстия и вдоль оси этого глухого отверстия (те как бы отверстия в стенке глухого отверстия). Второе требование к этим отверстиям расстояние между ними должно быть таким, чтоб если к ним приложить заготовку с сообщающимися сосудами(осями сосудов перпендиколярно плоскости второй заготовки, образуя подобие тавра), то оба маленьких отверстия попадают каждое в свой сосуд при этом один из сообщаюшихся сосудов краем своего дна должен обязательно попадать за пределы глухой стенки глухого отверстия. Теперь в заготовке с глухим отверстием делается третье масенькое отверстие не сквозное, а глухое, на той же линии, что и первых два, но уже за глухой стенкой, оно должно быть на таком расстоянии от ближайшего, что бы они оба оказались в пределах дна одного из "собщающихся" сосудов в другой заготовке. При прикладывании заготовки с сообщающимися сосудами к заготовке с глухим отверстием, два маленьких отверстия, попадающих в стенку глухого отверстия должны попадать в дно двух разных "сообщающихся" сосудов, а маленькое глухое отверстие должно быть в пределах дна оного из "сообщающихся" сосудов. Теперь если маленькие отверстия поставить вертикально, то в горизонтальном направлении надо от ближайщего торца заготовки просверлить отверстие соединяющее дно маленького глухого отверстия с торцом заготовки - это аналог сливного канала(Г-образный канал). Теперь осталось изготовить кран, который представляется из себя стержень из оргстекла или тефлона ответный глухому отверстию те соответствующий ему по диаметру(на пару тройку соток меньше) и чуть длинней, чтоб было за что крутить, стержень нужно снабдить воротком или рычажком, с помощью которого его можно вращать в отверстии. В боковой поверхности стержня выфрезеровывается продольная проточка по ширине равная диаметру масеньких отверстий в стенке глухого отверстия, а длинной точно совпадающая с расстоянием между наиболее удаленными краями этих отверстей(глубина особого значения не имеет). Эта проточка таким образом образует канал соединяющий эти два масеньких отверстия, когда стержень(кран) вставлен в глухое отверстие(получаются сообщающиеся сосуды), если кран повернуть, то эти отверстия разъединятся(сосуды разобщаются). Ну теперь приклеиваем первую заготовку с сообщающимися сосудами ко второй, так чтоб в одном сосуде было одно отверстие, а в другом два одно с краном, а другое сливное, присоединяем к сливному шланг с зажимом и наконечником. Все.

Если вы чего-нибудь поняли, то с вас пиво, если не поняли, то пиво в двойне. Честно, нельзя такие вопросы в форуме задавать это надо рисовать и показывать. Отдельного труда стоит. Это просто у меня сегодня отходняк от защиты дипломов вот я и растекся словом по монитору
Ъ
IP-штамп: frWBxqPTDNeUI
гость



 прочитанное сообщение 26.06.2007 22:44     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #76 множественное цитирование

Да, МММ, очень хорош отходняк. Вы не ленивы. Уважаю, уважаю beer.gif beer.gif
Участник оффлайн! Dmitry Molotkov




 прочитанное сообщение 27.06.2007 09:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #77 множественное цитирование

Спасибо, МММ, с меня действительно пиво, не ожидал такоко подробного описания.
Гость
IP-штамп: fr7/T.o4fBiy6
гость



 прочитанное сообщение 10.11.2007 00:34     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #78 множественное цитирование

Кто нибудь сталкивался с ситуацией, когда синие образцы после начала фореза подтекают между стеклом и stacking гелем? Какие могут быт причины и решения? Спасибо!
Guest
IP-штамп: frNFBHcL2JSwo
гость



 прочитанное сообщение 10.11.2007 01:28     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #79 множественное цитирование

от синих образцов полоскание в марганцовке помогает. или Ёд.
Гость
IP-штамп: fr7/T.o4fBiy6
гость



 прочитанное сообщение 10.11.2007 03:08     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #80 множественное цитирование

Полоскание чего?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 10.11.2007 16:58     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #81 множественное цитирование

--Кто нибудь сталкивался с ситуацией, когда синие образцы после начала фореза подтекают между стеклом и stacking гелем? Какие могут быт причины и решения? Спасибо!

Причина отход геля от стекла.

Это у вас либо плохой набор(прокладок) разброс по толщине гребенки и боковых прокладок, либо грязное стекло. Либо когда вынимаете гребенку очень сильно механически воздействуете на стекла блока.
Guest
IP-штамп: frPanb9Lvzu1g
гость



 прочитанное сообщение 10.11.2007 20:31     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #82 множественное цитирование

Пользуясь приемом, подробно описанным ммм, можно заливать сразу несколько идентичных гелей, если изготовить из оргстекла "скворечник", стоящий острием- призмой вниз - в основную часть ставятся собранные стекла со спейсерами , обмотанные скотчем так, чтобы его концы свисали снаружи, а в острие ( там внутри слепая трубочка с двумя симметричными ответстиями по бокам, так, что струя "бьет" в стенку призмы, а не наверх) закачивается сначала пропанол, затем градиент, начиная с легкого 5% раствора акриламида и кончая тяжелым раствором, к которому добавляют для стабилизации еще и 10% сахарозу (объем компонентов определить заранее). Затем начать закачивать 50% сахарозу, в самую первую фракцию которой капнуть бромфенол- и затем долить остальную). Когда бромфенол окажется на уровне нижнего конца стекол ( финиша гелей), закачивание прекратить, и все сооружение перенести в теплую воду, градусов 50. Количество ТЕМЕДа и сульфата аммония должно быть снижено раза в три-четыре ( подберите эеспериментально - в зависимости от концентрации гелей, чтобы не полимеризовался при комнатной температуре в течение минут 40 - часа), растворы должны быть при закачке охлажденными, а полимеризация начинаться после перенесения в теплую воду. Растворы акриламида-бисакриламида готовятся в нужном буфере, но БЕЗ SDS - он все равно идет впереди при форезе . Наутро извлечь "кассету" готовых гелей за хвосты оставленного снаружи скотча. Метод хорошо работал для небольших гелей -10x10, например. Кроме идентичности гелей и создания запаса (хранить в буфере, дозаливать только "гребенку" по мере необходимости) плюс еще и в том, что устаняется возможность "протечек" при заливке градиента . Форму градиента можно задавать любую, в зависимости от формы сосудов ( цилиндрическая, коническая с расширением вверх или вниз - это есть в старых учебниках по ионообменной хроматографии), в том числе близкую к экспоненте.

Насчет отслоения геля - если это происходит из-за излишних "усилий", то легче вынимать гребенку, закапав вдоль гребенки воды или буфера - так, чтобы в пустые лунки входила жидкость, а не воздух.
guest: Vasyl
IP-штамп: fr39I8Nrrb2K2
гость



 прочитанное сообщение 15.11.2007 07:07     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #83 множественное цитирование

(guest: ммм @ 10.11.2007 16:58)
Это у вас либо плохой набор(прокладок) разброс по толщине гребенки и боковых прокладок, либо грязное стекло. Либо когда вынимаете гребенку очень сильно механически воздействуете на стекла блока.


Не, стекла мытые -> сполоснутые дистиллятом ->70% этанолом. А насчет системы - чем богаты тем и рады, MiniProteanII from Bio-Rad. Может, попробовать что-нибудь в гель добавить, чтоб он лучше к стеклу прилипал? Известны ли современной науке такие весчества? Кроме клея для стекла?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 15.11.2007 13:26     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #84 множественное цитирование

--Не, стекла мытые -> сполоснутые дистиллятом ->70% этанолом.
И грязные. smile.gif

-- А насчет системы - чем богаты тем и рады, MiniProteanII from Bio-Rad.

Ну раз богаты, то радуйтесь. Закажите новые стекла и будет вам счастие. Или лучше напишите рекламацию: "Мол гавно у вас система, стекла, типа, в горячей хромке не помыть, потому что тут вашим прокладкам и кирдык наступит.

У вас, например могли, попортится прокладки, а они часть стекла, так что от смены стекла никуда не деться.
--Известны ли современной науке такие весчества? Кроме клея для стекла?
Ага! Алилтриэтоксисилан - обрабатывать надо стекло, но после этого гель к стеклу приторчит КОВАЛЕНТНО. smile.gif
Участник оффлайн! polly




 прочитанное сообщение 15.11.2007 19:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #85 множественное цитирование

Ребята, разъясните мне безграммотной, как приготовть трис-Сl ph 8,8 и 6,8 которые используют в белковом форезе? В прописях на сайте найти не могу frown.gif
Участник оффлайн! comp3v
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 15.11.2007 19:42     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #86 множественное цитирование

(polly @ 15.11.2007 18:39)
Ссылка на исходное сообщение  Ребята, разъясните мне безграммотной, как приготовть трис-Сl ph 8,8 и 6,8 которые используют в белковом форезе? В прописях на сайте найти не могу frown.gif
а в чём непонятность-то? готовится обычный трис (1M или 1,5M), перед "доливанием" до конечного объёма доводится pH до нужного значения - и всё, собсно
Участник оффлайн! polly




 прочитанное сообщение 15.11.2007 19:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #87 множественное цитирование

(comp3v @ 15.11.2007 17:42)
Ссылка на исходное сообщение  а в чём непонятность-то? готовится обычный трис (1M или 1,5M), перед "доливанием" до конечного объёма доводится pH до нужного значения - и всё, собсно


Что то это мне картину никак не происнило , Скажите сколько чего сыпать confused.gif
Участник оффлайн! comp3v
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 15.11.2007 20:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #88 множественное цитирование

мнэээ... во студенты пошли...
сколько сыпать - зависит от того, что у Вас есть. Посмотрите на банке с трисом (я не знаю, что там у вас - Trzima base или ещё чего), какая у него молекулярная масса. Определитесь, какой объём хотите. Ну и сыпьте, соответственно, m[г]=Mw[г/моль]*V[л]*с[моль/л]
Участник оффлайн! polly




 прочитанное сообщение 15.11.2007 20:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #89 множественное цитирование

а НСl сколько надо добавлять
Участник оффлайн! comp3v
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 15.11.2007 20:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #90 множественное цитирование

ставите на мешалку, суёте pH-метр, и капаете себе потихоньку, покуда не доведётся до нужного значения
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 15.11.2007 20:06     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #91 множественное цитирование

Откройте книжечку методичку про буферные растворы и почитайте, а так долго объяснять.

Если кратко то взвешивате основание трис чтоб получалось по молярности на нужный объем. Растворяете в обьеме меньшем раза в 2, полтора, потом подтитровываете концентрированной солянкой на рН-метре и доводите водой до нужного объема. Ну, есть тонкости, имено, с трисом, его лучше до обема не доводить а дать денек постоять, потом еще раз подтитровать, а потом только подводить объем.
Участник оффлайн! polly




 прочитанное сообщение 15.11.2007 20:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #92 множественное цитирование

К сожалению методички нет, а то бы почитала и не мучила бы никого.
Спасибо Вам огромное, уважаемый "guest: ммм " Все стало понятно, только я вот не знаю какой моляльности должен быть трис, В описании белкого фореза в приготовлении растворов фигурирует просто tris-Cl pH 8,8 и 6,8
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 15.11.2007 20:41     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #93 множественное цитирование

Найдите Остермана и будет Вам счастье....
или посмотрите раздел "методы" на данном сайте там тоже прописи есть.....
http://molbiol.ru/protocol/
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 15.11.2007 20:55     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #94 множественное цитирование

Нужного рН 1М Трис НС1 готовится сливанием 1М-х растворов Трис НС1 и Трис ОН. Еще проще - ссыпанием нужных навесок обоих Трисов и доведением до метки. Если будете работать аккуратно (точные навески и температура окр.среды), ошибка не более 0,05.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 16.11.2007 13:54     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #95 множественное цитирование

Нужного рН 1М Трис НС1 готовится сливанием 1М-х растворов Трис НС1 и Трис ОН. Еще проще - ссыпанием нужных навесок обоих Трисов и доведением до метки. Если будете работать аккуратно (точные навески и температура окр.среды), ошибка не более 0,05.

Ну для этого нужна табличка. И два реактива вместо одного (ибо HCl стоит дешевле дистиллята). Да и с навесками там не тривиальный расчет нужен будет чтоб молярность по трису сохранить. Но если нет рН-метра, то только так и делать иначе никак.
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 16.11.2007 18:38     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #96 множественное цитирование

В готовом трисе, полученном этими двумя методами, содержание вещества одинаково. Но затраты времени несравнимы, а также не контактируешь с конц. НС1 (ну пусть будет 1:1), рН контроль по бумажке (приятно!). Много преимуществ! А где эту табличку найти? - на сайте Sigma (лень искать smile.gif,пардон). А кому нужны сотые доли рН ?, ну тогда можно и рН-метр завести. smile.gif Себестоимость ниже. если с учетом затрат времени и полученных эмоций. smile.gif tongue.gif
Guest
IP-штамп: frPanb9Lvzu1g
гость



 прочитанное сообщение 16.11.2007 20:38     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #97 множественное цитирование

(guest: Vasyl @ 15.11.2007 07:07)
Может, попробовать что-нибудь в гель добавить, чтоб он лучше к стеклу прилипал? Известны ли современной науке такие весчества? Кроме клея для стекла?
- если в концентрирующий гель добавить diallyltartardiamide вместо бисакриламида, то гель получается очень "пластичный" и образцы не перетекают. Правда, из-за пластичности (если начистоту, то "сопливости" smile.gif ) геля гребенку лучше извлекать, добавляя вдоль гребенки чтобы вместо воздуха входил, буфер - или даже просто под струей воды, иначе ячейки получатся кривые, и столбики придется выравнивать иглой
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 16.11.2007 21:38     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #98 множественное цитирование

--В готовом трисе, полученном этими двумя методами, содержание вещества одинаково.

Нет, только если смешивать растворы. Если по сухому весу делать надо либо пресчитывать объемы на 100мл по сумме и высчитавать потом навески, либо высчитывать объем по табличке как сумму объемов растворов и тогда его нужно доводить в мерном цилиндре, что не всегда удобно.

-- на сайте Sigma
Сайт может быть просто недоступен из-за отсутствия связи. Так что табличку придется не только найти, но и распечатать, заранее подготовившись, и взять с собой.

--Но затраты времени несравнимы, а также не контактируешь с конц. НС1

если взвешивать сравнимы.

Если бороться с солянкой, то тогда от акриламида, надо просто в обморок падать.

--Себестоимость ниже. если с учетом затрат времени
Затраты времени стоят очень по разному в США, России и Китае, например.
--и полученных эмоций.

Это вообще вещь субьективная

Кроме того солянокислый трис, вроде дороже основания и при том еще в нем содержание основного вещества меньше. Ты платишь за лишний вес моля солянки, к каждому молю триса.

Если ты заранее приготовишь растворы тебе никогда не сделать трис концентрированей твоих исходников. А например 3М трис рН 8,8 вообще таким способом(слиянием растворов не сделать, 3МТрис основание просто не растворяется в воде), а подтитровкой он делается.
Гость
IP-штамп: frG/ehwVgdnf.
гость



 прочитанное сообщение 19.11.2007 12:22     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #99 множественное цитирование

может кто подскажет как
Участник оффлайн! polly




 прочитанное сообщение 30.11.2007 16:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Народ, помогите. Купили в лабмаге камеру для вертикального фореза белков на 2 геля (VE-20) Если ее просто так собрать , то она понятное дело течет, Нужно ее пролить по периметру, для это мы так поняли там и канавка есть, + в коробку вложены 2 пробирки с белым порошком и 2 типа пипетки. Похоже это для проливки, но абслютно не написано, что это, в чем разводить и в каком количестве. Если кто знает что с этим делать, ПОЖАЛУЙСТА, подскажите.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 13.12.18 07:47
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft