Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Blaid Постоянный участник |
Помогите, пожалуйста, прояснить следующие вопросы. Есть Tank buffer для SDS PAAG электрофреза (0,025 М Tris-base, 0,192 M glycine, 0,1% SDS) и аналогичный ему по составу (до добавления метанола) Transfer buffer (http://www.cytographica.com/lab/solutions/transfer.htm) для переноса белков с геля на мембрану (насколько знаю, SDS нужен только для нитроцеллюлозных мембран; на них и собираюсь делать перенос). Так вот, а какой должен быть рН у этих буферов и насколько важно его точно выдерживать? В Protein Electrophoresis Applications guide (Hoefer) для Tank buffer приведено рН=8,3, а для Transfer buffer - 8,2-8,4. Из того, что получилось у меня: 1x Tank/Transfer buffer pH=8,73-8,74 (при 20 гр) 1х Transfer buffer (+10% MetOH) = 8,71 (20 гр) 1х Transfer buffer (+20% MetOH) = 8,60 (20 гр) Вроде как слегка защелоченый. Чем можно подкислять/подщелачивать? Подсыпать глицин или трис? Спасибо! |
distemper Постоянный участник |
Но напрягая моск можно смело утверждать что никакого доведения рН не надо. а вообще чем писать такие мелочи спрашивать и ждать ответа просто на мой взгляд проще поставить перенос и мембрану понсой покрасить (на предмет перенеслось-не перенеслось), делов на час... |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
2) Значение рН этого буфера практически пофигу, особенно для переноса ( в этом случае может быть от 8 до 9.5) Для фореза диапазон уже где-то от 8.2 до 8.5 3)SDS при переносе в общем случае не нужен вообще, для любых типов мембран. Мерить рН буфера с SDS строго запрещается , он искажает показания рН-метра и потом оооооочень долго не отмывается. SDS нужен в особых случаях их, пожалуй, всего 2. а)Вы оочень долго переносите ооочень большой белок. б)Ваш белок интереса сильно щелочной(типа гистон, протамин, цитохром). При чем SDS не рекомендуется повышать больше 0.05%, в противном случае вы рискуете сильно снизить сорбционную емкость мембраны по белку. Особенно это касается нитроцеллюлозы и в меньшей степени ПВДФ, но тоже лучше перебдеть. 4)И наконец, что есть основание, а что кислота в системе трис-основание и глицин - свободная аминокислота. Очевидный ответ на это вопрос Трис - это основание, а глицин - кислота. Поэтому если вы хотите понизить рН, то надо добавлять глицин, и наоборот - трис. |
птаха Постоянный участник |
|
птаха Постоянный участник |
меньше знаешь-крепче спишь |
Blaid Постоянный участник |
Спасибо все ответившим за "науку" |
nigoal123 IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE гость |
it sets the tone for |
guest: 123 IP-штамп: frJhOCvSv9ICE гость |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
georgepalm Участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
guest: Ufa1688 IP-штамп: frpXPq5TOmUHs гость |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
guest: Ufa1688 IP-штамп: frdN6q3cADZrs гость |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
Jaipurescorts253 Постоянный участник Jaipur |
Jaipur is a very beautiful place and if you come here for your weekend if you want a partner with you who can spend her time with you. |
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |