Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* PAAG электрофорез белков -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: SDS PAAG
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


страницы (9): « < 3 4 5 6 7 > »  
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Raido

Москва



 прочитанное сообщение 12.12.2008 10:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Около 20 кДа. А вывод о том, что белки ниже 35 кДа не разделяются был сделан из наблюдения за "поведением" маркера: белки маркера массой менее 35 кДа идут в месте с фронтом.
Гость
IP-штамп: frLqHustVBwN2
гость



 прочитанное сообщение 12.12.2008 12:51     Сообщение для модератора       

Помогите, пожалуйста! пробы проходят через концентрирующий гель и входят в разделяющий, но останавливаются на самом верху геля и дальше не идут и нет разделения(( краска идет нормально. маркер сигмовский тоже не разделяется. смесь акриламида с бисом свежая, биорадовская.
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 12.12.2008 14:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

3kDa в каком геле гнать? Я в догадках...
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 12.12.2008 17:19     Сообщение для модератора       

-3kDa в каком геле гнать? Я в догадках..

А зачем? Можно HPLC или после ультрофильтрации в нативном геле при рН близкизх к рI только расплываться будет сильно.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 12.12.2008 17:22     Сообщение для модератора       

--Помогите, пожалуйста! пробы проходят через концентрирующий гель и входят в разделяющий, но останавливаются на самом верху геля и дальше не идут и нет разделения(( краска идет нормально. маркер сигмовский тоже не разделяется. смесь акриламида с бисом свежая, биорадовская.

По моему вы перепутали верхний и нижний буфера. или забыли SDS в электродном буфере, но тогда обычно уже в концентрирующем начинаются тормоза.
Гость
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 12.12.2008 17:30     Сообщение для модератора       

ничего не перепутали, это точно. спасибо за идею про СДС, переделаю буфер.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 12.12.2008 19:23     Сообщение для модератора       

--ничего не перепутали, это точно. спасибо за идею про СДС, переделаю буфер.

Ой! Дык! Мы ж з вами с одногу месту захОдте в 508к, пообщамся в реале гелёк предьявите.
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 12.12.2008 19:30     Сообщение для модератора       

(guest: ммм @ 12.12.2008 18:23)
Ссылка на исходное сообщение  --ничего не перепутали, это точно. спасибо за идею про СДС, переделаю буфер.

Ой! Дык! Мы ж з вами с одногу месту захОдте в 508к, пообщамся в реале гелёк предьявите.

Вот я и думаю чего это с ммм - сам с собой того чтоль... eek.gif
Лучший
IP-штамп: frI8XktBaiNDk
гость



 прочитанное сообщение 14.12.2008 00:32     Сообщение для модератора       

Ставлю винду, мне пишет connect error плизз помогите поставить, в чем проблема может быть?!((
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 19.12.2008 17:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Сколько может храниться сухой рибофлавин? Нашел на складе запечатанные бутылочки, но они примерно мои одногодки... Какой шанс что он не потерял активность? Хранились в темноте.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 19.12.2008 19:50     Сообщение для модератора       

Посмотрите фарм статью или анатоцию на витаминчик.
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 20.12.2008 15:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Посмотрел. Но нигде не написанно как долго он может храниться в сухом (видимо лиофилизированном) виде.
220
IP-штамп: frTITTs62W.JQ
гость



 прочитанное сообщение 16.01.2009 14:55     Сообщение для модератора       

Вопрос о трудностях процесса!
Есть проблема: после окрашивания на дорожках, соответствующих нанесенным препаратам из корневищ одного цветика (грубому экстракту и после гель-колонки) вообще ни фига нет (ничего не прокрасилось), хотя концентрация белков в обоих случаях была около 2 мг/мл. При этом маркеры отлично разделялись, неплохо прокрасились и шли ровной полосой, в то время как дорожки с образцами сильно размазывались и уширялись к низу. Проверяли уже все: и гели и буферы, но итог тот же. Грубый экстракт получали после высаливания сульфатом, но ведь суточный диализ был..., вроде соли при проверке не было. Может, каким-то образом на образцы влияют полисахариды, кот-е в них есть или какие-то другие не учтенные соединения? В общем, пока ситуация немножко тупика wall.gif
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 16.01.2009 15:51     Сообщение для модератора       

-В общем, пока ситуация немножко тупика

Как вы определяли концентрацию в 2мг/мл?

-При этом маркеры отлично разделялись, неплохо прокрасились и шли ровной полосой, в то время как дорожки с образцами сильно размазывались и уширялись к низу.

Как вы это узнали, если на дорожках ничего не обнаружено?

--Грубый экстракт получали после высаливания сульфатом, но ведь суточный диализ был..., вроде соли при проверке не было.

Как вы проверяли наличие соли. Хлоридом Бария?

В диализе важно не время, а объем против, которого отдиализованно.
220 to МММ
IP-штамп: frTITTs62W.JQ
гость



 прочитанное сообщение 16.01.2009 16:17     Сообщение для модератора       

Как вы определяли концентрацию в 2мг/мл?

По Брэдфорд в обоих случаях.

Как вы это узнали, если на дорожках ничего не обнаружено?

Это на дорожках с нанесенными образцами в итоге ничего не видно, а маркеры после фиксации (гель фиксировали 20% ТХУ) и прокрашивания геля были разделены и картинка была очень даже ничего. Тут есть еще один момент, возможно связанный с красителем: после окрашивания (ночь) картинка стала появляться только при отмывке уксусной кислотой, до этого гель был равномерно прозрачно-голубым.

Как вы проверяли наличие соли. Хлоридом Бария?

В диализе важно не время, а объем против, которого отдиализованно.

Ну да, хлоридом бария shuffle.gif Что касается объма, то диализ вели с 4-х кратной сменой по 500 мл.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 16.01.2009 16:31     Сообщение для модератора       

Неужели, у вас после диализа ничего не выпало. А концентрацию вы измеряли до дитализа или после?
И и сколькими процентами насыщения СА проводили экстракцию?
Гость 220 to МММ
IP-штамп: frTITTs62W.JQ
гость



 прочитанное сообщение 16.01.2009 16:44     Сообщение для модератора       

Ну да, после диализ выпал таки осадок (диализ против дистиллята). А высаливали при 80% насыщении. Концентрацию мерили уже после диализа.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 16.01.2009 16:55     Сообщение для модератора       

--в то время как дорожки с образцами сильно размазывались и уширялись к низу.

Это как вы узнали? Если на них ничего небыло.

Где то у вас промах.

Сомнение N1
Не верю я, что после экстракции 80% СА и после диализа и выпадения. Осталось такая высокая концентрация 2мг/мл.
Сомнение N2
Возможно у вас идет сильный протеолиз, а гель довольно низкой процентности вот все во фронт и убежало.
Участник оффлайн! wormball




 прочитанное сообщение 18.01.2009 19:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Господа, а как вы герметизируете камеру? Вакуумная смазка не устраивает в силу геморроидальности отмытия.

И с помощью чего вы регистрируете и обрабатываете результаты?

Заранее благодарен.

Сообщение было отредактировано wormball - 18.01.2009 19:53
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 19.01.2009 16:53     Сообщение для модератора       

--Господа, а как вы герметизируете камеру?

Герметизировать камеру опасно ибо во время э/ф выделяется водород и кислород, которые могут взорваться.

Если вы имеете ввиду герметизацию электродных емкостей то это зависит от конструкции, но обычно там либо она не требуется либо с помошью резиновой прокладки и зажима.

--И с помощью чего вы регистрируете и обрабатываете результаты?

Вас интересует soft или аппарат перевода на физический/цифровой носитель или окраска?
окраска: кумаси/серебро
перенос в компьютер: сканер/фотоаппарат
soft: например ImageJ
Участник оффлайн! wormball




 прочитанное сообщение 20.01.2009 04:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Если вы имеете ввиду

Я имею в виду непосредственно ёмкость, в которую заливается гель.

Вас интересует soft или аппарат перевода на физический/цифровой носитель или окраска?

Прежде всего софт, ибо ImageJ не понравился тем, что выдаёт результаты исключительно в форме рисунков (причём с довольно низким разрешением по яркости), а другие программы, упомянутые в соседнем топике, не бесплатны. Аппарат также интересует, в частности, чем и насколько лучше "фирменные" решения за бешеные бабки, нежели цифромыльница в совокупности с самодельной подсветкой. Окраска у нас кумасси, а серебро лучше?

сканер

Интересная мысль.. Токмо надо опять же изобретать просвечивающую подсветку. Или же есть сканеры с готовой лампой формата хотя бы А5?

Также зело интересует вопрос о том, на что в первую очередь грешить, ежели полосы почти не разрешаются. Выделяем белки из лейкоцитов (желатин, центрифуга, PMSF), далее всё "по Лэммли". Вода разве что обычный дистиллят в силу отсутствия чего-либо лучшего.
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.01.2009 05:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(wormball @ 20.01.2009 01:35)
Ссылка на исходное сообщение 
Интересная мысль.. Токмо надо опять же изобретать просвечивающую подсветку. Или же есть сканеры с готовой лампой формата хотя бы А5?


просвечивающая - здорово. но в большинстве случаев не нужна. пользуем обычный сканер hp3300
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 20.01.2009 17:57     Сообщение для модератора       

--Я имею в виду непосредственно ёмкость, в которую заливается гель.
Ах! Вот вы о чем. Ну у мене спец камера там просто заглушка стоит вроде боковой прокладки.
А так, Агароза 4 ever!!!

--ImageJ не понравился тем......

Ну крякните этот платный софт или напишите свой.

--Аппарат также интересует, в частности, чем и насколько лучше "фирменные" решения за бешеные бабки, нежели цифромыльница в совокупности с самодельной подсветкой.

По качеству результата ничем, а так удобство и быстрота, но не супер те не во столько раз во сколько дороже.

--Или же есть сканеры с готовой лампой формата хотя бы А5?

Есть конечно, у кэнона и эпсона точно есть.

-о том, на что в первую очередь грешить, ежели полосы почти не разрешаются.

На процентность геля: если маленькие белки не разрешаются, процентность надо увеличить, если большие, то уменьшить. Это в первую очередь. Во вторую на акриламид, тогда его надо деионизовать. Ну и в последнюю очередь буфера.

--а серебро лучше?
Дороже, капризней на порядок-два чувствительней.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): wormball
Участник оффлайн! Alenike




 прочитанное сообщение 21.01.2009 13:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

кто сталкивался с такой вещью: при делении белков 2Д форезом с использованием стрипов, либо кислая, либо щелочная сторона не делятся, получаются вертикальные полосы или все размыто, а середина геля разделяется хорошо- белок к белку. такой полосатый гель получаем. На что тут думать? shuffle.gif
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 21.01.2009 14:42     Сообщение для модератора       

1) стрипы загавнились или изначально по краям с плохим разрешенем
2) либо слишком долго гнали(щелочные слипаются кислые расходятся) либо слишком рано перестали гнать щелочные делятся кислые слишись.
3) Аналит и католит шпортились.
Участник оффлайн! Knizhnik




 прочитанное сообщение 21.01.2009 21:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Подскажите пожалуйста, заливаю 15% SDS-PAAG, а фронт идет вместе с полосой маркера 17 кДа, а мне нужен белок 15 кДа. Раньше ставила, все получалось, отделялась полоса маркера 12 кДа, а сейчас нет и все. В чем может быть проблема?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 21.01.2009 22:09     Сообщение для модератора       

--Раньше ставила, все получалось, отделялась полоса маркера 12 кДа, а сейчас нет и все. В чем может быть проблема?

Поменялася стоковый раствор акриламида. Поменялась концентрация Биса.
Участник оффлайн! Knizhnik




 прочитанное сообщение 21.01.2009 22:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

--Раньше ставила, все получалось, отделялась полоса маркера 12 кДа, а сейчас нет и все. В чем может быть проблема?

Поменялася стоковый раствор акриламида. Поменялась концентрация Биса.

сток тот же пробовала,сегодня его переделала, поставила - опять тоже самое:( пробовала менять TGB, APS, TEMED - не помогает! может переделать TrisHCl pH 8,8 и 6,8 для разрешающего и концентрирующего гелей??
Участник оффлайн! wormball




 прочитанное сообщение 22.01.2009 02:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: ммм @ 20.01.2009 17:57)
Ну крякните этот платный софт или напишите свой.

Может быть, действительно стоит написать.. А кряков я не нашёл. Какую из них крякать?

Есть конечно, у кэнона и эпсона точно есть.

А можно конкретные модели? И используете ли вы светофильтры на 590 нм? Ежели да, то где их взять? Появилась также мысль использовать натриевые лампы низкого давления, благо они светят как раз на требуемой длине волны, однако сия идея сдерживается трудностями в нахождении пускорегулирующих аппаратов для оных ламп.

На процентность геля: если маленькие белки не разрешаются, процентность надо увеличить, если большие, то уменьшить.

Не, они все не разрешаются. Просто идёт сплошная синяя полоса и на ней от силы 10 пиков. Белки самые средние.

Во вторую на акриламид, тогда его надо деионизовать.

А чем и как его деионизировать? А перекристаллизовать не пойдёт?

Ну и в последнюю очередь буфера.

Кстати, про буфера. Не подскажете, какой и где купить электрод для рН-метра? И как его хранить? Аппарат mettler toledo 320 ph meter.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 22.01.2009 13:32     Сообщение для модератора       

--А кряков я не нашёл. Какую из них крякать?
Totallab.Напишите в раздел форума про биософт вам скорее всего помогут.
-А можно конкретные модели?
НЕТ! У меня старый а ползать по сайтам производителей и делать вашу работу мне лень.
-И используете ли вы светофильтры на 590 нм?
Я? Нет! И такой узкополосный фильтр не нужен, можно просто купить старый советский ораньевый фильтр в комиссионке или на развалах в Измайлово, а можно фирменный от Мурами или Кенко на foto.ru или в Сивме.
-Не, они все не разрешаются. Просто идёт сплошная синяя полоса и на ней от силы 10 пиков. Белки самые средние.
Тут могут проблемы в пробе, например высокая соль, или большое количество протеаз. Но и в акриламиде и в буферах тоже может быть дело.
-А чем и как его деионизировать?
Смолой ионообменной, примерно так же, как деионизируют воду. Смолы могут быть разные, например уже готовая смесь продает DOW, Purolight(не уверен, что правильно написал) но они одноразовые. а можно использовать последовательно сухие катионит и анионит в Н+ и ОН- формах соответственно из советских КУ 2-8 и АВ 17-8 Есть их аналоги у выше названных забугорных супостатов цены их отличаются не сильно.
-А перекристаллизовать не пойдёт?
Подойдет, но на мой взглят муторнее и не так эффективно. Перекристализация хороша для уборки желтезны.
-Не подскажете, какой и где купить электрод для рН-метра? И как его хранить? Аппарат mettler toledo 320 ph meter.
НЕ знаю, мне хватает Белорусского ЭСЛ 43(63) но у него разъем другой.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): wormball
Участник оффлайн! wormball




 прочитанное сообщение 27.01.2009 21:53     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: ммм @ 22.01.2009 13:32)
Ссылка на исходное сообщениеСмолой ионообменной, примерно так же, как деионизируют воду.

К стыду своему никогда не деионизировал ни воду, ни что-либо ещё. Где про это следует читать?

Перекристализация хороша для уборки желтезны.

Кстати говоря, никто часом не знает, откуда берут хлороформ? А то он оказывается запрещённый. Акриламид, бромистый этидий и т. п. не запрещённые, зато хлороформ запрещённый.

Посмотрел в магазинах акриламид. Есть 500 грамм за 1100 рублей либо 500 грамм за 4700 рублей. Критичен ли выбор из этих двух акриламидов для качества электрофореза?

Также следующий вопрос. Полосы на геле каким-то чудом стали проявляться, но теперь начальник утверждает, что раньше картина распределения белков была другая, т. е. одни белки обгоняют другие, которых в норме они якобы не должны обгонять. Он утверждает, что это всё вследствие того, что акриламид напитал в себя воды и посему гель получается слишком разбавленный. В то время как я почему-то думаю, что результаты гонки между белками не должны зависеть от плотности геля, и грешу либо на акриловую кислоту, либо на СДС, либо на недостаточную тщательность процедуры выделения белков, в частности, недостаточную продолжительность кипячения. Кто из нас прав? И чем это может быть вызвано? PH 5%-го акриламида порядка 5,38, однако рН-метр наш ни к чёрту, а начальник отказывается покупать новый электрод, мотивируя это своей финансовой несостоятельностью. Гель, где я хотел посмотреть зависимость результатов от кипячения и предфореза, начальник почему-то выкинул, так и не показав мне. Я думаю, он что-то скрывает.

Может быть, мне вовсе следует рвать когти из этого рассадника мракобесия?
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 28.01.2009 08:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

смеялся smile.gif
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 28.01.2009 13:38     Сообщение для модератора       

--Посмотрел в магазинах акриламид. Есть 500 грамм за 1100 рублей либо 500 грамм за 4700 рублей. Критичен ли выбор из этих двух акриламидов для качества электрофореза?

Ага! скорее всего вам нужен за 4700. А за 1100 как раз потребуется перекристализация.

--зато хлороформ запрещённый.
Все вопросы к МВД, хлороформ можно использовать для криминальных действий. Операцию Ы смотрели?

Юр лицам хлороформ продают либо вообще без вопроросов, либо с бумажкой за подписью ответственного лица, в которой укзано, для чего хлороформ используется. Что бы за нал быть Юр. лицом достаточно принести доверенность от этого Юр лица на свое имя.

-что результаты гонки между белками не должны зависеть от плотности геля.

Не совсем так. Они могут не разрешится, те прийти к финишу одновременно, но вот, когда маленький прибегает позже большого невозможно.

--порядка 5,38

Но цифра ничего себе.

--Может быть, мне вовсе следует рвать когти из этого рассадника мракобесия?

Пожалуй, я склонялся бы к такому решению.
Участник оффлайн! wormball




 прочитанное сообщение 29.01.2009 01:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: ммм @ 28.01.2009 13:38)
Ссылка на исходное сообщениеНе совсем так. Они могут не разрешится, те прийти к финишу одновременно, но вот, когда маленький прибегает позже большого невозможно.

Неужели совсем невозможно? А ежели, скажем, белки недостаточно денатурировали и СДС их недостаточно облепил? Или, скажем, группы акриловой кислоты в геле их тормозят?

Юр лицам хлороформ продают либо вообще без вопроросов, либо с бумажкой за подписью ответственного лица, в которой укзано, для чего хлороформ используется. Что бы за нал быть Юр. лицом достаточно принести доверенность от этого Юр лица на свое имя.

Но где его продают? В "научных" магазинах я не нашёл, нашёл только сайты производителей, которые находятся в Кирово-Чепецкой области и наверняка не отгружают меньше вагона.

Сообщение было отредактировано wormball - 29.01.2009 01:23
Участник оффлайн! Vadim Sharov
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 29.01.2009 05:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Вы в Москве?
Я брал хлороформ в "Нева-реактиве".
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 29.01.2009 17:54     Сообщение для модератора       

- А ежели, скажем, белки недостаточно денатурировали и СДС их недостаточно облепил?

НЕ! Так не получится. У вас тупо все залипнет на старте потому что недоденатурировать оооочень трудно достижимо.

-Или, скажем, группы акриловой кислоты в геле их тормозят?

Не они некго не тормозят они просто обратный ток жидкости вызывают а в нем просто все мажится.

--Но где его продают? В "научных" магазинах я не нашёл

Вы смеетесь:
На все один ответ - ХИММЕД. Но так же вы можете попробовать Мос реактив, АкадемСнаб, Дом лаверна и тд тп.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): wormball
Участник оффлайн! wormball




 прочитанное сообщение 30.01.2009 00:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: ммм @ 29.01.2009 17:54)
ХИММЕД.

Действительно. Дело всё в том, что в диа-м сказали, что хлороформа нет, ибо он запрещён, а в яндексе я натыкался исключительно на сайты производителей и на упоминания в форумах о том, что его сложно либо невозможно достать. Из вышеизложенного я сделал вывод, что дальнейшие поиски суть бесперспективняк.
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 30.01.2009 12:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

wormball, если в пущино, то могу отлить кубиков 200 за так.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): wormball
Участник оффлайн! wormball




 прочитанное сообщение 01.02.2009 02:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(plotter @ 30.01.2009 12:02)
Ссылка на исходное сообщение  wormball, если в пущино, то могу отлить кубиков 200 за так.

К сожалению, я не в Пущино, да и 200 кубиков, боюсь, не спасут отца русской демократии (вы ведь хлороформ имеете в виду, а не акриламид?).

[offtop]Помнится, мы практику проходили в Пущино, зело понравилось. Какой институт? Вам часом биофизики не нужны? shuffle.gif [/offtop]
Участник оффлайн! wormball




 прочитанное сообщение 02.02.2009 17:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Кстати говоря, а где вы достаёте бумагу для самописца?
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 03.02.2009 12:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

wormball. в биофизике тусуемсяsmile.gif Второй год мегатусни пошел. wall.gif А вы сами откуда?
Могу в принципе и литром облагородить. Только если везти далеко...
Guest
IP-штамп: frlnAsDr.5x7A
гость



 прочитанное сообщение 03.02.2009 16:24     Сообщение для модератора       

Скажите почему в денатурирующих условиях (SDS) сначала белки бегут при 60 мА быстро, а на последних минутах (когда остаеться пройти 1-2 см до конца) мА падают до 28 и соответственно белок бежит очень медленно. ПОЧЕМУ???
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 03.02.2009 21:43     Сообщение для модератора       

--Скажите почему в денатурирующих условиях (SDS) сначала белки бегут при 60 мА быстро, а на последних минутах (когда остаеться пройти 1-2 см до конца) мА падают до 28 и соответственно белок бежит очень медленно. ПОЧЕМУ???

Потому что вы включили источник постоянного тока в режим стабилизации по напряжению. smile.gif

А если серьезно, то это связано не с денатурирующими условиями, а с буферной системой Орнштейна-Дэвиса(или так называемой буферной системой диск-фореза).

В начале у вас в геле 0.375М раствор трисового буфера (грубо: много соли) и следовательно высокая проводимость (низкое сопротивление) при заданном напряжении относительно большой ток. По мере движение глициновой границы по гелю весь трисовый буфер вытесняется из геля в электродную камеру, а его место в геле занимает электродный трис-глициновый буфер, в котором ионная сила и содержание соли практически никакое следовательно низкая проводимость(высокое сопротивление) и при заданном напряжении низкий ток.

Кстати, скорость движения белка не зависит от тока напрямую, а зависит от напряженности эл поля, которое есть практически прямопропорциональная функция напряжения. Так что при заданном напряжении скорость движения белка практически одинаковая.
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 10.02.2009 12:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Кстати, вопрос чисто для интерса (все работает и так).
А фронт бромфенолового должен быть тоненьким и расплывшимся? У меня он к низу расплывается почемуто. Но полосы белка все как на подбор. Почему так?
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 03.03.2009 14:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Как ведут себя на форезе белки после обработки солями тяжелых металлов (заингибированные)?
От осатков соли белки отмыты.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 04.03.2009 14:33     Сообщение для модератора       

-А фронт бромфенолового должен быть тоненьким и расплывшимся? У меня он к низу расплывается почемуто.

Это у вас БФС не очееннь чистый.

-Как ведут себя на форезе белки после обработки солями тяжелых металлов (заингибированные)?

Я думаю форез этого не заметит. Разве что металлы будут ну очень тяжелые свинец, барий, висмут.

К томуже часть металла при кипячении в сэмпл буфере должна вооще отвалится.
Участник оффлайн! plotter
Постоянный участник
Стыдно признаваться о том, где живу...



 прочитанное сообщение 05.03.2009 12:31     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

ферментосовский маркер тоже бромфеноловым расплывается. там то он точно чистый. Да и мой, вроде как чда...
Гость
IP-штамп: frQIXFWYSh9iU
гость



 прочитанное сообщение 23.03.2009 21:36     Сообщение для модератора       

Два вопроса:

1. Ксиленцианол должен бежать впереди бромфенола? (по привычке добавил еще и его)

2. Как избавиться от синей полоски внизу геля? http://img25.imageshack.us/img25/8251/13388690.jpg
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 24.03.2009 19:18     Сообщение для модератора       

--1. Ксиленцианол должен бежать впереди бромфенола? (по привычке добавил еще и его)

Хороший вопрос. Для ответа на него нужно знать его изоэлектрическую точку, а мне она не известна. Но пои идее он должен бежать чуть помедленнее.

--2. Как избавиться от синей полоски внизу геля?

Выгнать краситель(БФС) из геля
Гость
IP-штамп: frecG.u5Slk7M
гость



 прочитанное сообщение 25.03.2009 10:11     Сообщение для модератора       

> Выгнать краситель(БФС) из геля

Кажись, ее не должно быть... В чем может быть причина этой полоски? Она не мешает разделению белков?

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
страницы (9): « < 3 4 5 6 7 > » 
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.09.18 01:13
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft