Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Olesya |
Кто работает с SSCP.Нужна помощь! |
Kis Участник |
|
Olesya |
|
Olesya |
|
MrDmitry Постоянный участник |
|
imers Участник Москва |
|
Olesya |
Что такое SSCP я знаю, мне нужно< чтобы кто-нибудь опытом поделился, реальным. Оставте адреса кто может помочь. |
KisA Постоянный участник SPb+Helsinki |
|
Olesya |
|
KisA Постоянный участник SPb+Helsinki |
В заключение, хотел бы добавить, что условия SSCP в каждом конкретном случае могут сильно отличаться и Вам предстоит оптимизировать метод для Ваших фрагментов (в моем случае размер фрагментов 180-200 п.н.). |
MrDmitry Постоянный участник |
green 1,2 знаем,а так типа извините.А потом,какой для него нужен трансиллюминатор,обычный? И еще: у вас методика очень сложная,зачем нужна щелочная денатурация и 16-24 ч? ведь можно взять формамид 1:50 и 5` 99c,можно гнать 5-6 часов при нормальном напряжении ,а загонять можно 30-40 минут? OLESYA:Вообще мне кажется, что "красота" геля во многом зависит от качества амплификата и условий покраски,а затем уже от условий фореза- полосы разошлись и ладно,какое между ними расстояние значения не имеет,если оно есть,хотя я не уверен на все сто - определить что не получилось бывает очень сложно,поэтому очень красивый гель явление, на первое время при отработке, скорее вероятностное.Вам можно попробовать изложить свою методику и свои наблюдения,наверняка у кого-то есть что-то похожее и вам возможно подскажут. |
MrDmitry Постоянный участник |
|
KisA Постоянный участник SPb+Helsinki |
1)SYBR GOLD покупали в фирме Диалат (Москва). Подробности позже. 2)Трансиллюминатор обычный 3)Щелочная денатурация просто удобнее, т.к. при температурной Вы вынуждены наносить пробы очень быстро (даже с формамидом). При большом количестве образцов, последние успевают частично схлопнуться и т.п. В общем неудобно. 4)16-24 ч эта особенность связана с необходимостью разделять фрагменты, одинаковые по размеру, но с однонуклеотидной заменой. Разделение должно быть четким, т.к. важна доза гена, т.е. полуколичественный вариант. 5)Что такое РДКБ? |
imers Участник Москва |
SYBR gold брали в ХимМеде. Тел. 113-29-64; 113-61-24. Но удовольствие не дешевое (сколько конкретно - не знаю, но не дешевле серебра выходит). Ну, я в РДКБ А что? <img src="graemlins/beer.gif" border="0" alt="[сходка]" /> |
imers Участник Москва |
|
MrDmitry Постоянный участник |
Просто больница хорошая, медсестер полно клевых,идешь по коридору - голова то и дело сама поворачивается То KisA: С методикой все в принципе понятно,РДКБ - детская республиканская КБ,но меня всегда интересовало и относительно Вашей методики : имеем однонуклеотидную замену,как отличить в случае доп.полоски мутацию от полиморфизма? и что значит полуколичественный вариант? |
KisA Постоянный участник SPb+Helsinki |
По-поводу полуколичественного варианта - я назвал это так, потому что по интенсивности свечения полос можно определить (относительно конечно) дозу гена, т.е. выявить гетерозиготное носительство делеции. Сами мы работаем в Институте Отта, в СПб. А РДКБ, судя по всему, связана с МГНЦ РАМН. Это наши московские коллеги, мы с ними порой сотрудничаем. |
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
guest: 123vega IP-штамп: frXqkB4MpP2jQ гость |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
guest: 123vega IP-штамп: frY/5Vmfd77P. гость |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
123goal 123goal Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |