Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Полимеразы для primer extension
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! avial
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 17.06.2008 19:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Столкнулись с тем, что очень большая разница в эффективности работы полимераз для primer extension. И сразу вопрос возник - в России можно купить нормальную? И какая из зарубежных наиболее эффективна?
Хоть выбор и невелик и можно было бы все просто перебрать, но сложности с заказом заставляют задать этот вопрос здесь smile.gif
Участник оффлайн! genseq
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 17.06.2008 20:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

В России можно купить, но из-под прилавка. Обратитесь в Евроген. По дошедшим до меня слухам они собирались продавать полимерзу с повышенной специфичность для primer extension. В прайсе она пока не значится, поэтому лучше позвонить или написать на E-mail.
http://evrogen.ru/
Участник оффлайн! afanasev-max
Постоянный участник
Irkutsk-Moscow-Irkutsk



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.06.2008 08:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

http://www.sbd.ee/index.php?lan=EN&sid=71&...=62&active1=102
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 18.06.2008 09:43     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

КленТак и его модификации подойдет. А в Еврогене найдется все. smile.gif Кстати, а куда делся Проблемник.? confused.gif Неужто опять умер в виртуале. weep.gif
guest: avial
IP-штамп: frM.OGd33xfA6
гость



 прочитанное сообщение 18.06.2008 14:11     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Да, солисовская вариант, но опять-таки, забугорная фактически. В том смысле что у нас ее не продают, а хотелось бы просто покупать в том же хеликоне.
Понятно, значит, пока все плохо smile.gif
Будем перебирать доступные, может чего и найдется.
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 18.06.2008 14:30     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(guest: avial @ 18.06.2008 13:11)
Ссылка на исходное сообщение  Да, солисовская вариант, но опять-таки, забугорная фактически. В том смысле что у нас ее не продают, а хотелось бы просто покупать в том же хеликоне.
Понятно, значит, пока все плохо smile.gif
Будем перебирать доступные, может чего и найдется.

Генсек Вам дал правильное направление. umnik.gif А звонить можно по этому телефону и получить самую квалифицированную информацию о КленТаке и его модификации (335-71-93 Игнатов). По моим результатам это лучшая полимераза в мире по аллельспецифик ПЦР. Для Аспе тоже подойдет, думаю. confused.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 18.06.2008 14:33     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(Ъ @ 18.06.2008 13:30)
Ссылка на исходное сообщение  Генсек Вам дал правильное направление. umnik.gif  А звонить можно по этому телефону и получить самую квалифицированную информацию о КленТаке и его модификации (335-71-93 Игнатов). По моим результатам это лучшая полимераза в мире по аллельспецифик ПЦР. Для Аспе тоже подойдет, думаю. confused.gif

Дк может ему не для минисиквенса confused.gif
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 18.06.2008 14:37     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

(Guest @ 18.06.2008 13:33)
Ссылка на исходное сообщение  Дк может ему не для минисиквенса  confused.gif

avial хорошо знаю - разведка доложила - точно для минисиквенса. smile.gif Он очень капиллярники любит. confused.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 18.06.2008 14:55     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

(Ъ @ 18.06.2008 13:37)
Ссылка на исходное сообщение  авиал хорошо знаю - разведка доложила - точно для минисиквенса. smile.gif  Он очень капиллярники любит. confused.gif

тогда клентермаза нужна для терминаторов .
http://www.genecraft.de/products/?id=33
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 18.06.2008 15:24     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

(Guest @ 18.06.2008 13:55)
Ссылка на исходное сообщение  тогда клентермаза нужна для терминаторов .
http://www.genecraft.de/products/?id=33

Буйная фантазия у ребят - расписали свою продукцию комбинируя три фермента ... lol.gif
http://www.genecraft.de/products/?id=6
Участник оффлайн! avial
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.06.2008 19:50     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(Ъ @ 18.06.2008 11:37)
Ссылка на исходное сообщение  avial хорошо знаю - разведка доложила - точно для минисиквенса. smile.gif  Он очень капиллярники любит. confused.gif

Вот чего не люблю, так это каппилярники. Мутотень капризная. Так что неправильная разведка smile.gif
Неужели по сайту в той теме непонятна была моя любовь? smile.gif Ну да ладно.
К тому же, да, забыл в первоначальном вопросе указать, что полимераза для дидезокси- нужна.
А КленТак по сравнению со Штоффелем лучше в аллель-специфичной?
Спасибо за телефон и за наводку smile.gif

И еще один общетеоретический вопрос - ладно аллель-специфичная ПЦР, где от полимеразы требуется максимально избирательно элонгировать только полный дуплекс и "не узнавать" мисматч, но в primer extension - это же обычный первый шаг обычной элонгации, который обрывается из-за дальнейшей невозможности прицепить следующую букву. Почему такая разница в работе полимераз? Или я чего-то не понимаю?
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 19.06.2008 10:02     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

(avial @ 18.06.2008 18:50)
Ссылка на исходное сообщение  Вот чего не люблю, так это каппилярники. Мутотень капризная. Так что неправильная разведка smile.gif
Неужели по сайту в той теме непонятна была моя любовь? smile.gif Ну да ладно.
К тому же, да, забыл в первоначальном вопросе указать, что полимераза для дидезокси- нужна.
А КленТак по сравнению со Штоффелем лучше в аллель-специфичной?
Спасибо за телефон и за наводку smile.gif

И еще один общетеоретический вопрос - ладно аллель-специфичная ПЦР, где от полимеразы требуется максимально избирательно элонгировать только полный дуплекс и "не узнавать" мисматч, но в primer extension - это же обычный первый шаг обычной элонгации, который обрывается из-за дальнейшей невозможности прицепить следующую букву. Почему такая разница в работе полимераз? Или я чего-то не понимаю?

КленТак и Штоффел-фрагмент, в принципе, одно и тоже - от разных авторов, из разных продуцентов разные модификации, якобы улучшающие качества. Они не имеют от 5-штрих и от 3-штрих экзонуклеазных активностей и их используют в первую очередь в циклических секвенированиях по Сенгеру и в аллельспецифик ПЦР. В праймер-экстеншн и АСПЕ, наверное, используется это же свойство - в этом я только теоретик. Спросите у Гостя1, он собаку съел на этом.
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 19.06.2008 11:29     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

(avial @ 18.06.2008 18:50)
Ссылка на исходное сообщение  Вот чего не люблю, так это каппилярники. Мутотень капризная. Так что неправильная разведка smile.gif
Неужели по сайту в той теме непонятна была моя любовь? smile.gif Ну да ладно.
К тому же, да, забыл в первоначальном вопросе указать, что полимераза для дидезокси- нужна.
А КленТак по сравнению со Штоффелем лучше в аллель-специфичной?
Спасибо за телефон и за наводку smile.gif

И еще один общетеоретический вопрос - ладно аллель-специфичная ПЦР, где от полимеразы требуется максимально избирательно элонгировать только полный дуплекс и "не узнавать" мисматч, но в primer extension - это же обычный первый шаг обычной элонгации, который обрывается из-за дальнейшей невозможности прицепить следующую букву. Почему такая разница в работе полимераз? Или я чего-то не понимаю?

http://www.biomedcentral.com/content/pdf/1471-2164-6-35.pdf
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 19.06.2008 11:34     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

(avial @ 18.06.2008 18:50)
Ссылка на исходное сообщение  Вот чего не люблю, так это каппилярники. Мутотень капризная. Так что неправильная разведка smile.gif
Неужели по сайту в той теме непонятна была моя любовь? smile.gif Ну да ладно.
К тому же, да, забыл в первоначальном вопросе указать, что полимераза для дидезокси- нужна.
А КленТак по сравнению со Штоффелем лучше в аллель-специфичной?
Спасибо за телефон и за наводку smile.gif

И еще один общетеоретический вопрос - ладно аллель-специфичная ПЦР, где от полимеразы требуется максимально избирательно элонгировать только полный дуплекс и "не узнавать" мисматч, но в пример ехтенсион - это же обычный первый шаг обычной элонгации, который обрывается из-за дальнейшей невозможности прицепить следующую букву. Почему такая разница в работе полимераз? Или я чего-то не понимаю?

некоторые терминаторы меченные некоторыми красителями некоторые сиквеназы
не любют
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 19.06.2008 12:08     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

(Guest @ 19.06.2008 10:34)
Ссылка на исходное сообщение  некоторые терминаторы меченные некоторыми красителями некоторые сиквеназы
не любют

.... в некоторых руках! lol.gif Привет. Стаья полезная - один и тот же фермент, но из разных источников confused.gif , я так думаю. umnik.gif
Guest
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 19.06.2008 15:01     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

[ Стаья полезная - один и тот же фермент, но из разных источников confused.gif , я так думаю. umnik.gif
[/quote]

Ферменты немного разные хотя все содержат мутацию Табора-Ридчарсона для включения ddNTPs. ThermoSequenase, например, это полноразмерная Taq с двумя заменами: одна выключает нуклеазную активность, а вторая Табора-Ридчарсона. Therminator (NEB) создан на базе отличного от Taq фермента. TERMIPol и KlenThermase -клентаки. Причем KlenThermase, насколько я знаю, бала создана в России smile.gif людьми на которых указал Генсек и Ъ и содержит какие-то дополнительные навороты которые они не раскрывают.
Участник оффлайн! avial
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.06.2008 00:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

Ну вот сибэнзим продает секвеназу...

Хорошо, спасибо за наводки, будем искать smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 07:53     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

[quote=Guest,19.06.2008 14:01]Ссылка на исходное сообщение [ Стаья полезная - один и тот же фермент, но из разных источников confused.gif , я так думаю. umnik.gif
[/quote]

Ферменты немного разные хотя все содержат мутацию Табора-Ридчарсона для включения ддНТПс. ТхермоСеяуенасе, например, это полноразмерная Тая с двумя заменами: одна выключает нуклеазную активность, а вторая Табора-Ридчарсона. Тхерминатор (НЕБ) создан на базе отличного от Тая фермента. ТЕРМИПол и КленТхермасе -клентаки. Причем КленТхермасе, насколько я знаю, бала создана в России smile.gif людьми на которых указал Генсек и Ъ и содержит какие-то дополнительные навороты которые они не раскрывают.
[/quote]
Клентерму они-то создали тока буфферочек к ней поленились довести до ума.
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 07:55     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

[quote=Guest,19.06.2008 14:01]Ссылка на исходное сообщение [ Стаья полезная - один и тот же фермент, но из разных источников confused.gif , я так думаю. umnik.gif
[/quote]

Ферменты немного разные хотя все содержат мутацию Табора-Ридчарсона для включения ддНТПс. ТхермоСеяуенасе, например, это полноразмерная Тая с двумя заменами: одна выключает нуклеазную активность, а вторая Табора-Ридчарсона. Тхерминатор (НЕБ) создан на базе отличного от Тая фермента. ТЕРМИПол и КленТхермасе -клентаки. Причем КленТхермасе, насколько я знаю, бала создана в России smile.gif людьми на которых указал Генсек и Ъ и содержит какие-то дополнительные навороты которые они не раскрывают.
[/quote]
Игнатовскую Клентерму я гоняю на промеговском "зеленом буффере" от ГоуТак smile.gif
Как говорят "почувствуй разницу" smile.gif
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 09:24     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

[quote=Guest,20.06.2008 06:55]Ссылка на исходное сообщение  Ферменты немного разные хотя все содержат мутацию Табора-Ридчарсона для включения ддНТПс. ТхермоСеяуенасе, например, это полноразмерная Тая с двумя заменами: одна выключает нуклеазную активность, а вторая Табора-Ридчарсона. Тхерминатор (НЕБ) создан на базе отличного от Тая фермента. ТЕРМИПол и КленТхермасе -клентаки. Причем КленТхермасе, насколько я знаю, бала создана в России smile.gif людьми на которых указал Генсек и Ъ и содержит какие-то дополнительные навороты которые они не раскрывают.
[/quote]
Игнатовскую Клентерму я гоняю на промеговском "зеленом буффере" от ГоуТак smile.gif
Как говорят "почувствуй разницу" smile.gif
[/quote]
Сами они называют такой буфер confused.gif на ктором фиг-вам. Тоже удивляюсь, почему не довести confused.gif . Ну вот, теперь я о тебе знаю все, в случае чего, мало ли. smile.gif Привет.
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 09:27     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

(avial @ 19.06.2008 23:46)
Ссылка на исходное сообщение  Ну вот сибэнзим продает секвеназу...

Хорошо, спасибо за наводки, будем искать smile.gif

Сибэнзим термосеквеназа - тоже КленТак.
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 09:35     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

[quote=Ъ,20.06.2008 08:24]Ссылка на исходное сообщение Игнатовскую Клентерму я гоняю на промеговском "зеленом буффере" от ГоуТак smile.gif
Как говорят "почувствуй разницу" smile.gif
[/quote]
Сами они называют такой буфер confused.gif на ктором фиг-вам. Тоже удивляюсь, почему не довести confused.gif . Ну вот, теперь я о тебе знаю все, в случае чего, мало ли. smile.gif Привет.
[/quote]
smile.gif Получил из Генкрафта проспект - на нем на первой странице статья Каледина
и надпись "Самая первая Так полимераза в мире!" smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 09:39     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #23 множественное цитирование

Когда спросил Генкрафт почему Так полимераза Каледина 62 кд -
они впали в ступор smile.gif привет
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 09:41     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #24 множественное цитирование

[quote=Guest,20.06.2008 08:35]Ссылка на исходное сообщение  Сами они называют такой буфер confused.gif на ктором фиг-вам. Тоже удивляюсь, почему не довести confused.gif . Ну вот, теперь я о тебе знаю все, в случае чего, мало ли. smile.gif Привет.
[/quote]
smile.gif Получил из Генкрафта проспект - на нем на первой странице статья Каледина
и надпись "Самая первая Так полимераза в мире!" smile.gif
[/quote]
"Как молоды мы были ... weep.gif weep.gif weep.gif " Было ли это. confused.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 09:47     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #25 множественное цитирование

Кстати -статья на русском была smile.gif
All: 1 Review: 0
Click to change filter selection through MyNCBI.

1: Biokhimiia. 1980 Apr;45(4):644-51.Links
[Isolation and properties of DNA polymerase from extreme thermophylic bacteria Thermus aquaticus YT-1]
[Article in Russian]

Kaledin AS, Sliusarenko AG, Gorodetskiĭ SI.

A DNA polymerase has been isolated from the thermophylic bacteria Thermus aquaticus YT-1. The six-step purification procedure resulted in an electrophoretically homogeneous enzyme preparation with molecular weight of about 62 000. The enzyme does not contain contaminant exo- and endonuclease activities and has a temperature optimum on the DNA templates at 70 degress and that on RNA matrices at 50 degrees. The maximal activity of the enzyme requires the presence of bivalent cations (magnesium or manganese) 0,1--0,2 M KCl or NaCl, all deoxynucleoside triphosphates and template in the incubation mixture. The enzyme is active when "activated" DNA, poly(dA)-poly(dT), poly(dA)-oligo(dT)10 and poly(rA)-oligo(dT)10 are used as templates and is inactive on the native and denaturated DNAs as well as on the native molecules of RNA and poly(rC)-oligo(dG)12--180.
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 09:48     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #26 множественное цитирование

(Guest @ 20.06.2008 08:39)
Ссылка на исходное сообщение  Когда спросил Генкрафт почему Так полимераза Каледина 62 кд -
они впали в ступор smile.gif привет

Это твоя профессия - людей в ступор вводить. no.gif Смотри чтобы тебе СНИП-азу не подсунули - она очень медленная, но очень точная.
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 09:51     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #27 множественное цитирование

[quote=Ъ,20.06.2008 08:41]Ссылка на исходное сообщение smile.gif Получил из Генкрафта проспект - на нем на первой странице статья Каледина
и надпись "Самая первая Так полимераза в мире!" smile.gif
[/quote]
"Как молоды мы были ... weep.gif weep.gif weep.gif " Было ли это. confused.gif
[/quote]
Таки Каледин выделил Штоффель или КленТак в итоге ? smile.gif
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 10:03     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #28 множественное цитирование

[quote=Guest,20.06.2008 08:51]Ссылка на исходное сообщение  "Как молоды мы были ... weep.gif weep.gif weep.gif " Было ли это. confused.gif
[/quote]
Таки Каледин выделил Штоффель или КленТак в итоге ? smile.gif
[/quote]
Естественно не КленТак и не Стоффел, а самый обыкновенный 90 с чем-то кд Так Пол. А Каледин много чего термофильного (полимераз) выделял и от нечего делать я впоследствии все это пробовал. А Кленов-фрагмент из Е соли (не термофильный) в те времена только входил в моду в составе кита рандом-праймер.
Начало КленТаков - от мадам Стоффел. Каледину КленТак в то время только снился. Надеюсь, ничего не сочиняю smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 10:13     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #29 множественное цитирование

[quote=Ъ,20.06.2008 09:03]Ссылка на исходное сообщение Таки Каледин выделил Штоффель или КленТак в итоге ? smile.gif
[/quote]
Естественно не КленТак и не Стоффел, а самый обыкновенный 90 с чем-то кд Так Пол. А Каледин много чего термофильного (полимераз) выделял и от нечего делать я впоследствии все это пробовал. А Кленов-фрагмент из Е соли (не термофильный) в те времена только входил в моду в составе кита рандом-праймер.
Начало КленТаков - от мадам Стоффел. Каледину КленТак в то время только снился. Надеюсь, ничего не сочиняю smile.gif
[/quote]
Каледин прямо пишет - 62 000 вес , а не 92 000 вес -
куда 30 000 от Так полимеразы он потерял ?
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.06.2008 10:20     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #30 множественное цитирование

: PCR Methods Appl. 1993 May;2(4):275-87.Click here to read Links
High-level expression, purification, and enzymatic characterization of full-length Thermus aquaticus DNA polymerase and a truncated form deficient in 5' to 3' exonuclease activity.
Lawyer FC, Stoffel S, Saiki RK, Chang SY, Landre PA, Abramson RD, Gelfand DH.

Program in Core Research, Roche Molecular Systems, Alameda, California 94501.

The Thermus aquaticus DNA polymerase I (Taq Pol I) gene was cloned into a plasmid expression vector that utilizes the strong bacteriophage lambda PL promoter. A truncated form of Taq Pol I was also constructed. The two constructs made it possible to compare the full-length 832-amino-acid Taq Pol I and a deletion derivative encoding a 544-amino-acid translation product, the Stoffel fragment. Upon heat induction, the 832-amino-acid construct produced 1-2% of total protein as Taq Pol I. The induced 544-amino-acid construct produced 3% of total protein as Stoffel fragment. Enzyme purification included cell lysis, heat treatment followed by Polymin P precipitation of nucleic acids, phenyl sepharose column chromatography, and heparin-Sepharose column chromatography. For full-length 94-kD Taq Pol I, yield was 3.26 x 10(7) units of activity from 165 grams wet weight cell paste. For the 61-kD Taq Pol I Stoffel fragment, the yield was 1.03 x 10(6) units of activity from 15.6 grams wet weight cell paste. The two enzymes have maximal activity at 75 degrees C to 80 degrees C, 2-4 mM MgCl2 and 10-55 mM KCl. The nature of the substrate determines the precise conditions for maximal enzyme activity. For both proteins, MgCl2 is the preferred cofactor compared to MnCl2, CoCl2, and NiCl2. The full-length Taq Pol I has an activity half-life of 9 min at 97.5 degrees C. The Stoffel fragment has a half-life of 21 min at 97.5 degrees C. Taq Pol I contains a polymerization-dependent 5' to 3' exonuclease activity whereas the Stoffel fragment, deleted for the 5' to 3' exonuclease domain, does not possess that activity. A comparison is made among thermostable DNA polymerases that have been characterized; specific activities of 292,000 units/mg for Taq Pol I and 369,000 units/mg for the Stoffel fragment are the highest reported.
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 10:26     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #31 множественное цитирование

[quote=Guest,20.06.2008 09:13]Ссылка на исходное сообщение  Естественно не КленТак и не Стоффел, а самый обыкновенный 90 с чем-то кд Так Пол. А Каледин много чего термофильного (полимераз) выделял и от нечего делать я впоследствии все это пробовал. А Кленов-фрагмент из Е соли (не термофильный) в те времена только входил в моду в составе кита рандом-праймер.
Начало КленТаков - от мадам Стоффел. Каледину КленТак в то время только снился. Надеюсь, ничего не сочиняю smile.gif
[/quote]
Каледин прямо пишет - 62 000 вес , а не 92 000 вес -
куда 30 000 от Так полимеразы он потерял ?
[/quote]

Я могу у Городецкого спросить, это его детище. confused.gif confused.gif
Каледин в 90-х может быть и КленТак выделял. Даю ЦУ своей разведке. smile.gif
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 10:32     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #32 множественное цитирование

Я могу у Городецкого спросить, это его детище. confused.gif confused.gif
Каледин в 90-х может быть и КленТак выделял. Даю ЦУ своей разведке. smile.gif
[/quote]
А Кабоев наверняка все знает. Когда у него день рождения? confused.gif Звони и мне тефон дай, на всякий пожарный. smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 11:15     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #33 множественное цитирование

[quote=Ъ,20.06.2008 09:32]Ссылка на исходное сообщение Я могу у Городецкого спросить, это его детище. confused.gif confused.gif
Каледин в 90-х может быть и КленТак выделял. Даю ЦУ своей разведке. smile.gif
[/quote]
А Кабоев наверняка все знает. Когда у него день рождения? confused.gif Звони и мне тефон дай, на всякий пожарный. smile.gif
[/quote]
день рождения и меил я тебе уже давал .
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 12:30     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #34 множественное цитирование

[quote=Guest,20.06.2008 10:15]Ссылка на исходное сообщение  А Кабоев наверняка все знает. Когда у него день рождения? confused.gif Звони и мне тефон дай, на всякий пожарный. smile.gif
[/quote]
день рождения и меил я тебе уже давал .
[/quote]
Потерял, дай еще раз - пусть вся страна тоже знает про своих героев. umnik.gif
Guest
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 16:10     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #35 множественное цитирование

[quote=Ъ,20.06.2008 08:24]Ссылка на исходное сообщение  Игнатовскую Клентерму я гоняю на промеговском "зеленом буффере" от ГоуТак smile.gif
Как говорят "почувствуй разницу" smile.gif
[/quote]
Сами они называют такой буфер confused.gif на ктором фиг-вам. Тоже удивляюсь, почему не довести confused.gif .[/quote]


Кажется "они" довели (буфер). В Еврогене "из-под прилавка" дают пробовать новый 5х ПЦР буфер - аналог ГоуТак-овского, только не зеленый, а красный. Сравнил с Промеговской зеленкой в параллельных разведениях матрицы и полимеразы. Удивительно, но факт (кто бы сказал - не поверил), в Еврогеновском красном зелье все работает НАМНОГО лучше чем в Промеговском зеленом eek.gif . Может заленка у меня не свежая rolleyes.gif ?
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 16:57     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #36 множественное цитирование

[quote=Guest,20.06.2008 15:10]Ссылка на исходное сообщение  Сами они называют такой буфер confused.gif на ктором фиг-вам. Тоже удивляюсь, почему не довести confused.gif .[/quote]
Кажется "они" довели (буфер). В Еврогене "из-под прилавка" дают пробовать новый 5х ПЦР буфер - аналог ГоуТак-овского, только не зеленый, а красный. Сравнил с Промеговской зеленкой в параллельных разведениях матрицы и полимеразы. Удивительно, но факт (кто бы сказал - не поверил), в Еврогеновском красном зелье все работает НАМНОГО лучше чем в Промеговском зеленом eek.gif . Может заленка у меня не свежая rolleyes.gif ?
[/quote]
Точно, зелень завяла. Оранж Ж + кселенцианол = зелень. Добавить туда бетаинчику до 1.5-2.0 М и буфер стандартный до 2х и получится 2х промеговская зеленка. Евроген заменил зелень на крезоловый красный (для красоты) и добавили NH4+ с бетаином для усиления реакции, я так думаю. confused.gif
Guest
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 17:32     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #37 множественное цитирование

[/quote]
Точно, зелень завяла. Оранж Ж + кселенцианол = зелень. Добавить туда бетаинчику до 1.5-2.0 М и буфер стандартный до 2х и получится 2х промеговская зеленка. Евроген заменил зелень на крезоловый красный (для красоты) и добавили NH4+ с бетаином для усиления реакции, я так думаю. confused.gif
[/quote]

Все может быть. Но факт остается фактом - новый Еврогеновский буфер работает лучше Промеговского confused.gif .
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 17:39     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #38 множественное цитирование

[quote=Guest,20.06.2008 16:32]Ссылка на исходное сообщение [/quote]
Точно, зелень завяла. Оранж Ж + кселенцианол = зелень. Добавить туда бетаинчику до 1.5-2.0 М и буфер стандартный до 2х и получится 2х промеговская зеленка. Евроген заменил зелень на крезоловый красный (для красоты) и добавили НХ4+ с бетаином для усиления реакции, я так думаю. confused.gif
[/quote]

Все может быть. Но факт остается фактом - новый Еврогеновский буфер работает лучше Промеговского confused.gif .
[/quote]
какое окно по магнию получается на еврогене и промеге ?
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 17:39     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #39 множественное цитирование

[quote=Guest,20.06.2008 16:32]Ссылка на исходное сообщение  [/quote]
Точно, зелень завяла. Оранж Ж + кселенцианол = зелень. Добавить туда бетаинчику до 1.5-2.0 М и буфер стандартный до 2х и получится 2х промеговская зеленка. Евроген заменил зелень на крезоловый красный (для красоты) и добавили NH4+ с бетаином для усиления реакции, я так думаю. confused.gif
[/quote]

Все может быть. Но факт остается фактом - новый Еврогеновский буфер работает лучше Промеговского confused.gif .
[/quote]
Я искренно рад за Евроген и охотно верю, что лучше. Кстати, куда делся Проблемник confused.gif не с кем пособачиться. smile.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 17:41     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #40 множественное цитирование

[quote=Ъ,20.06.2008 16:39]Ссылка на исходное сообщение Точно, зелень завяла. Оранж Ж + кселенцианол = зелень. Добавить туда бетаинчику до 1.5-2.0 М и буфер стандартный до 2х и получится 2х промеговская зеленка. Евроген заменил зелень на крезоловый красный (для красоты) и добавили НХ4+ с бетаином для усиления реакции, я так думаю. confused.gif
[/quote]

Все может быть. Но факт остается фактом - новый Еврогеновский буфер работает лучше Промеговского confused.gif .
[/quote]
Я искренно рад за Евроген и охотно верю, что лучше. Кстати, куда делся Проблемник confused.gif не с кем пособачиться. smile.gif
[/quote]


Проверь магниевое окошко еврогена на верити.
Guest
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 17:51     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #41 множественное цитирование

Кстати, старый 10х буфер с магнием от Еврогена (они его к Так'у прикладывают) работает тоже неплохо, хотя и уступает Зеленке.
Guest
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 17:55     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #42 множественное цитирование

Проблемника действительно не хватает.
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 18:02     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #43 множественное цитирование

Проверь магниевое окошко еврогена на верити.
[/quote]
Я планирую. но мне сначала предстоить свою "зеленку" соорудить под этот КленТак. С таким высоким рН, как рекомендуют, весь Магний уйдет в осадок. confused.gif Партизаны, не хотят дружить. wink.gif
Guest
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 18:17     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #44 множественное цитирование

(Guest @ 20.06.2008 16:39)
какое окно по магнию получается на еврогене и промеге ?


Новый 5х буфер у Еврогена без магния. Гонял в параллель с ГоуТак Флекси (тоже без магния). Обычный Taq в обоих буферах неплохо работает с Mg от 1.5 до 3.0 мМ. Оптимум на простых матрицах где-то 1.8-2.0мМ. если брать больше 2-2.5мМ то надо уменьшать циклы или лезет грязь
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 18:28     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #45 множественное цитирование

(Guest @ 20.06.2008 17:17)
Ссылка на исходное сообщение  Новый 5х буфер у Еврогена без магния. Гонял в параллель с ГоуТак Флекси (тоже без магния). Обычный Taq в обоих буферах неплохо работает с Mg от 1.5 до 3.0 мМ. Оптимум на простых матрицах где-то 1.8-2.0мМ. если брать больше 2-2.5мМ то надо уменьшать циклы или лезет грязь

А Mg продается в отдельной пробирке? F выше 2,5 mM полезет конечно грязь, если отжиг оставить тот же - Тm смещается, т.е. надо повышать отжиг и все нормализуется.
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 18:36     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #46 множественное цитирование

(Guest @ 20.06.2008 17:17)
Ссылка на исходное сообщение  Новый 5х буфер у Еврогена без магния. Гонял в параллель с ГоуТак Флекси (тоже без магния). Обычный Taq в обоих буферах неплохо работает с Mg от 1.5 до 3.0 мМ. Оптимум на простых матрицах где-то 1.8-2.0мМ. если брать больше 2-2.5мМ то надо уменьшать циклы или лезет грязь

С минимальным Магнием КленТак будет работать чисто, без ошибок (не наломает дров с аллельспецифик), с максимальным или близким к этому (2,5 -3,5 mM) - высокую чувствительность, я так думаю... umnik.gif
Guest
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 18:44     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #47 множественное цитирование

(Ъ @ 20.06.2008 17:28)
Ссылка на исходное сообщение  А Mg продается в отдельной пробирке? F выше 2,5 mM  полезет конечно грязь, если отжиг оставить тот же - Тm смещается, т.е. надо повышать отжиг и все нормализуется.


Согласен. Если магния много - уменьшай циклы и повышай отжиг, иначе беда.
Mg в отдельной пробирке у них пока отсутствует. Новый буфер капают из под прилавка smile.gif (раздают знакомым для независимого тестирования). Поэтому пользую магний из промеговских наборов или свой smile.gif
Guest
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 18:47     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #48 множественное цитирование

(Ъ @ 20.06.2008 17:36)
Ссылка на исходное сообщение  С минимальным Магнием КленТак будет работать чисто, без ошибок (не наломает дров с аллельспецифик), с максимальным или близким к этому (2,5 -3,5 mM) - высокую чувствительность, я так думаю... umnik.gif


Логично wink.gif
Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость



 прочитанное сообщение 20.06.2008 19:05     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #49 множественное цитирование

(Guest @ 20.06.2008 17:17)
Ссылка на исходное сообщение  Новый 5х буфер у Еврогена без магния. Гонял в параллель с ГоуТак Флекси (тоже без магния). Обычный Тая в обоих буферах неплохо работает с Мг от 1.5 до 3.0 мМ. Оптимум на простых матрицах где-то 1.8-2.0мМ. если брать больше 2-2.5мМ то надо уменьшать циклы или лезет грязь



Гоу Така флекси зеленая у меня "пошире окошко" по магнию давала -
от 2 до 6 мМ равномерные выходы - без красок - окно поуже confused.gif
Участник оффлайн! avial
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.06.2008 20:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #50 множественное цитирование

(Ъ @ 20.06.2008 06:27)
Ссылка на исходное сообщение  Сибэнзим термосеквеназа - тоже КленТак.

В смысле аналог свой или они покупают у кого-то?

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 15:24
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft