molbiol.ru -> ИФА: сыворотка крови на пустом пластике-возможно ли?

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* ИФА: сыворотка крови на пустом пластике-возможно ли?

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Рони

16.02.2013 17:06

URL #1

Моё руководство придумало такое вот ИФА!!! выявлять в крови больного специфические антитела методом ифа, сорбируя на первом этапе на пустые лунки сыворотку!затем идёт антиген, а затем конъюгат ( моноклоны мышиные к этому антигену меченные пероксидазой), ну а потом проявитель.Это вообще реально?

guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость

16.02.2013 17:24

URL #2

устанете от ложноотрицательных результатов при такой схеме.

А главное не ясны мотивы такой схемы, ведь можно сенсибилизировать планшет антигеном.

guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость

16.02.2013 17:26

URL #3

или у вас антиген - гаптен, тогда такая схема вообще работать не будет

Рони

16.02.2013 17:40

URL #4

антиген-цельные клетки, а цель-создание конюгата пероксидазного на основе МКА мыши к возбудителю (допустим иерсиний), который будет выявлять антитела к этому возбудителю в сыворотке больного человека.

Рони

16.02.2013 17:42

URL #5

либо антигеном будет липополисахарид наружной мембраны возбудителя

guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость

16.02.2013 18:46

URL #6

клетки лишком большой объект что бы в обычной схеме ИФА удержаться на планшете при промывках.

ЛПС слишком малоизбирательный антиген. И вообще на поверхности клетки обычно столько всего , что антитела к чему нибудь из этого поверхностного набора могут оказаться в сыворотке здорового человека без всяких контактов с возбудителем. Так что велик риск ложноположительных результатов. В любом случае для начала надо изучить какие антитела и какому антигену возбудителя будут однозначно указывать на заболевание и лучше использовать именно этот антиген, а не клетку целиком.

Клетку конечно можно попытаться как-то иммобилизовать на планшете химически, а не с помощью сыворотки больного, а потом уже наносить сыворотку больного, но велик риск ложно положительных результатов.

Что касается антител к возбудителю то это неплохая вещь для выявления самого возбудителя. Те в посевах и на в зараженных объектах и жидкостях и продуктах.

Guest
IP-штамп: frZJqNZ2eowqQ
гость

16.02.2013 19:45

URL #7

конечно более логично выявлять антиген с помощью мышиного пероксидазного конъюгата в заражённых образцах, но руководство почему-то решило "сойти с ума" и попробовать провернуть такое,даже не знаю с чего начать, получить какой-либо стандартный антиген для начала...сначала планируют отработать на сыворотке от мышей заражённых этим возбудителем...вообщем как-то всё с переподвыподвертом.

Guest
IP-штамп: frZJqNZ2eowqQ
гость

16.02.2013 19:53

URL #8

всё упирается в мышиный пероксидазный конъюгат на основе МКА,его уже получаем уже. поэтому иммобилизуется первой на лунки сыворотка человека, а потом только АГ, и затем специфичный к этому АГ конъюгат мышиный. просто выявление антигена в образцах с помощью этого конъюгат-уже пройденный этап, отработанный. и теперь руководство хочет "извратиться".

vb
Постоянный участник

16.02.2013 19:59

URL #9

(Рони @ 16.02.2013 15:40)

конюгата пероксидазного на основе МКА мыши к возбудителю (допустим иерсиний), который будет выявлять антитела

понимаете, вот тут у вас, как сказал бы папа карло, институциональное противоречие. а попросту неувязочка. коньюгат к возбудителю не может одновременно выявлять антитела. вы разберитесь сначала с вариантом ифа: сендвич, кто к кому антитела и т.д.

если нужно выявлять антитела человека к возбудителю, то конбюгат у вас должен быть против антител человека G там или M. даже A, если хотите...

птаха
Постоянный участник

17.02.2013 05:35

URL #10

>> выявлять в крови больного специфические антитела методом ифа, сорбируя на первом этапе на пустые лунки сыворотку!затем идёт антиген, а затем конъюгат ( моноклоны мышиные к этому антигену меченные пероксидазой)

если все это затевается науки для

то чувствительность и специфичность такой извращенной системы, наверное, можно повысить
если сорбировать на планшет не сыворотку, а очищенный IgG, а потом сразу наносить очищенный специфичный для возбудителя АГ (о чем говорил МММ) с пришитой пероксидазой. Получится одностадийный метод для выявления спец. антител.

Никакого коммерческого применения такая система понятное дело не найдет, но желание руководства Вы осуществите

vb
Постоянный участник

17.02.2013 16:44

URL #11

у беста была такая система "capture-вариант".
на планшет садится антитело против человеческих антител. потом проба сыворотки. потом смесь антигена и коньюгата против этого антигена.

Сообщение было отредактировано vb - 17.02.2013 19:16

птаха
Постоянный участник

17.02.2013 18:50

URL #12

наверна
сперва моноклон против Ig

а не коньюгат

Сообщение было отредактировано птаха - 17.02.2013 18:57

птаха
Постоянный участник

17.02.2013 18:55

URL #13

а вопщето да
если подмодифицировать систему предложенную афтором на манер векторовской
может и сгодится, напр., для выявления ранних АТ

Сообщение было отредактировано птаха - 17.02.2013 18:58

vb
Постоянный участник

17.02.2013 19:15

URL #14

(птаха @ 17.02.2013 16:50)

наверна
сперва моноклон против Ig

а не коньюгат

ну да. оговорился.

Guest
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость

20.02.2013 14:10

URL #15

может, вам следует попробовать сделать EMIT-анализ?

guest: рони
IP-штамп: fr3LHlkQhhb4w
гость

23.02.2013 23:40

URL #16

а где можно подробнее почитать про EMIT-анализ совсем немного нашла информации?а "capture-вариант" тоже вариантик...нужно обдумать.спасибо за советы!

guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость

24.02.2013 07:22

URL #17

с клетками замаетесь EMIT делать. А антитела в сыворотке было есть и будет ловить на плашку с иммобилизованным антигеном

guest: Alex76
IP-штамп: friCJHCWFt1UU
гость

07.03.2013 07:50

URL #18

Бред какой-то. Сорбировать исследуемую сыворотку и выявлять в ней антитела стандартным антигеном, да еще и клеткой. Начнем по порядку: сорбировать сыворотку исследуемую, а если там антитела в низком титре? А сыворотка - это многокомпонентная белковая система и очень большая вероятность того, что нужные антитела не сядут. Второе - клетка в виде антигена. Клетка тоже содержит большое количество нуждных и ненужных компонентов, так что большая вероятность получить ложноположительный результат. Есть старая отработанная десятилетиями методика непрямого ИФА - садите очищенный антиген на плашку, добавляете исследуемую сыворотку и затем конъюгат против антител исследуемой сыворотки.

птаха
Постоянный участник

07.03.2013 17:15

URL #19

спасибо,
КЭП

бутанол
Постоянный участник
Новосибирск

08.03.2013 18:35

URL #20

а может сорбировать вторичные антитела на пластик, затем в расворе провести реакцию с антигеном сыворотки (все же надежнее будет в жидкости а не на твердой фазе), затем провести связывание с антигеном моноклональных антител и вторичных антител в той или иной последовательности и т.д.
Из плюсов -клетка большая и антигена на ней много а чтобы связаться с плашкой ей может хватить небольшого процента комплексов типа антиген-антитело т.е. можно получить усиление сигнала довольно значительное, но нелинейное. Второй плюс, можно развлекаться с конкурентным ингибированием и оценкой гетерогенности специфических антител в сыворотке больного относительно моноклональных антител. Из минусов - ложноположительные результаты, значит лучше чтобы конкурентное ингибирование было а тогда клетку вы можете на плашку цеплять за любой антиген. Может тогда уж влияние антител на метаболическую активность клетки?

guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость

09.03.2013 12:12

URL #21

Не надо ничего сорбировать на пластик. Надо просто купать микроба в анализируемой сыворотке. потом отмываться от нее, наносить вторичный анти(хозяин сыворотки) коньюгат отмывать и красить. Все можно делать в формате 96 и 384 с коническим дном и на центрифуге для планшетов.

бутанол
Постоянный участник
Новосибирск

13.03.2013 13:27

URL #22

может тогда вообще на фильтрах? есть плашки с фильтром поры 0,2-0,4 мкм вместо дна и вакуумная система. по моему довольно удобно будет включая простоту и скорость отмывок, инкубаций.

guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость

13.03.2013 13:43

URL #23

там с фильтрами проблема, они должны быть инертны к белкам, иначе будет не специфическая сорбция. А вот вакуумная система там должна быть зачетная. А) под планшет. Б) с равномерным отсосом. Но если она есть то почему нет.

Panaev
Постоянный участник

14.03.2013 05:56

URL #24

У Миллипора такие системы были. В основном предназначались для скрининга гибридом. Давеча выкинул пару этих железок - за 12 лет никто не пользовался.

watchesbiz
Постоянный участник

07.12.2021 15:19

URL #25

http://replicarolexwatches.simpsite.nl/
https://www.smore.com/rj7kh-best-replica-watches
https://www.athleticsnation.com/users/Replicarolexwatches
https://pastebin.pl/view/ab0e458a
https://mix.com/watcheshutukcom
https://www.woddal.com/post/359216_tiny-acc...nybody-039.html
https://share.naturalnews.com/posts/3904099
https://demo.wowonder.com/post/214429_the-i...-producers.html
https://rapichat.com/post/5369_our-purpose-...ible-there.html
https://dashburst.com/replicarolexwatches/1
https://sway.office.com/KifcQvn36MK821G8
https://flipboard.com/@replicarolex24
https://getpocket.com/redirect?url=https%3A...eshut.uk.com%2F
https://www.openstreetmap.org/user/Hints%20...20Rolex%20Watch

nigoal123
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость

27.05.2022 06:58

URL #26

The first sentence has nigoal one single purpose ลิงค์รับทรัพย์ to entice the reader to sexy gaming Write in a semi-informal dream gaming read the next sentence. ka gaming rewarding to satisfy curiosity.

it sets the tone for 123goal the rest of the article 11hilo hooking the reader in 123bets choose the best three or four. pggame123 one step at a time. big gaming are intrigued by a question

nigoal123
IP-штамп: frpXPq5TOmUHs
гость

28.05.2022 09:13

URL #27

Many a time you have nigoal seen some writers or ลิงค์รับทรัพย์ people write their problems sexy gaming Write in a semi-informal dream gaming and suggestions in ka gaming some newspapers

They are writing their 123goal opinions and beliefs 11hilo in the form of an article. 123bets choose the best three or four. pggame123 we will get ourselves familiar big gaming with article writing

guest: 123
IP-штамп: frJhOCvSv9ICE
гость

02.06.2022 12:18

URL #28

For years there 123VEGA have been FA CHAI SLOT calls for Asia - which JILI SLOT is home to some PRAGMATIC PLAY of the world's สล็อตPG biggest CO2 emitters - to ditch fossil fuels 11HILO to help tackle climate AMB CASINO change. Countries in the region - including FC SLOT its three biggest economies 88KTC China, Japan and India - were criticised last year 123GOAL for not making a bigger.

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.