Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Выделение макрофагов из мышей -- Проблемы с центрифугированием макрофагов --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! konyshevil

Nighny Novgorod



 прочитанное сообщение 26.10.2012 12:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Здравствуйте, уважаемые участники!

Хотелось бы попросить о помощи тех из вас, кто близок к клеточным технелогиям или в той или иной мере занимался выделением макрофагов. В качестве тренировочного пункта нами были выбраны перитонеальные макрофаги, которые мы получали из мышей следующим образом:

1. Как обычно, вскрывали мышь, вымывали р-ром Хенкса с гепарином (5 МЕ/мл) клетки, получали мутноватый раствор.
2. Центрифугировали клетки при 15000 об/мин, 10 мин. При этом ФОРМИРОВАЛСЯ ВОЛОКНИСТО-БЕЛЫЙ ОСАДОК, который удавалось осадить только при 3000 об/мин. При суспендировании он плохо разбивался, и нити остались в растворе, так что посчитать клетки в камере Горяева оказалось весьма затруднительно.

Пожалуйста, если кто-то сталкивался с подобными затруднениями или может помочь нам, откликнитесь. Мой вопрос: как осадить макрофаги и предотвратить образование сгустка?\

Спасибо.
Участник оффлайн! Агроном
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.10.2012 12:31     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Центрифугировали клетки при 15000 об/мин, 10 мин
eek.gif

не, ну это чересчур. Для макрофагов хватит 400g c избытком.
Хенкс без кальция и магния? Мне кажется, что белые нити это таки фибрин у вас выпал.
Участник оффлайн! Pharmaсol
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.10.2012 13:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

(Агроном @ 26.10.2012 13:31)
Ссылка на исходное сообщение  eek.gif

не, ну это чересчур. Для макрофагов хватит 400g c избытком.
Хенкс без кальция и магния? Мне кажется, что белые нити это таки фибрин у вас выпал.

+1

http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002....im1401s83/full
Участник оффлайн! konyshevil

Nighny Novgorod



 прочитанное сообщение 26.10.2012 20:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Ой, извините, опечатался: не 15000, а 1500!
Да, Хенкс без кальция и магния. Этот фактор влияет на полимеризацию фибрина?
Guest
IP-штамп: frkQdfaj18oXA
гость



 прочитанное сообщение 20.11.2012 13:49     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

сразу вопрос: что вводили мышкам для получения перитонита? я работал с МФ и крысиными и мышиными, вроде такого пока не было. попробуйте за сутки интраперитонеально ввести немного тиогликолевой среды, через 24 часа мыши капут и 5 мл физраствора с гепарином и минут 5 помассировать брюшко, но аккуратно!!!! потом аккуратно забрать суспензию. Если все хорошо сделано, их будет навалом. Если нет тиогликолевой, попробуйте среду полную (с сывороткой). тоже неплохо работает. Физраствор лучше холодный. Крутить - не более 1000 об/мин.
Guest
IP-штамп: fr8IKppqjEx.k
гость



 прочитанное сообщение 20.11.2012 14:06     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Добрый день! Искусственно перитонит не вызывали - коллеги проинформировали нас, что и в случае работы с неподвергшейся казни мышью всё должно быть нормально. В прошлый раз получилсоь хорошо, но всё равно это проклятое облачко фибрина осталось после центрифугирования, а человек, который сотрудничает с нами и производит сканирующую микроскопию, жалуется, что клетки как будто облиты сметаной. Конечно, проводили фиксацию спиртом и глутаровым альдегидом, но, думаю, не могло же это вызвать такую интенсивную полимеризацию фибрина?!

Кроме того, неудовлетворительно краятся клетки и Гимзой: ядра ярко-малиновые, а цитоплазма вовсе не визуализируется. Может, работали Вы когда0нибудь с окраской таких препаратов? Нет ли другого метода окраски?
Участник оффлайн! bioasg




 прочитанное сообщение 25.11.2012 10:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Да, окрашивать приходилось много чего, и культуры, и выпоты и костный мозг, я же клинлаб. По Гимзе: чем фиксировали? спиртом - не самый лучший вариант, полученная вами картина (малиновые ядра, цитоплазмы нет) предсказуема. Рекомендую фиксировать Май-Грюнвальдом, потом красить Гимзой. Красители дешевле некуда, в фирме Минимед закажите, они вам за 300 р. доставят хоть на край света. Самый экономичный вариант - свяжитесь с ЛЮБОЙ больницей или поликлиникой, выйдите на лабораторию - там его хоть залейся - каждый день мазки крови красят сотнями. кубиков 20-30 дадут, вам больше и не надо. К тому же Гимза там в виде концентрата, надо разводить раз в 50 кажется. Кстати, для Гимзы очень важен рН, поэтому она готовится не на воде, а на буфере Серенсена. Сдвиг рН дает измененную картину окрашивания. не менее важный вопрос: как приготовляли мазок? Сколько сушили? тут есть весьма вредный нюанс: клетки, выделенные из биологических жидкостей и клетки, отмытые физраствором или даже средой (не важно) имеют разные тинкториальные свойства. Как это объяснить - не знаю, но это факт. берешь асцит, делаешь мазок - клетки ровные, красивые. Переводишь их в физраствор или среду - все, препарат пропал. Сморщились, потрескались, в общем гадость а не препарат. вам нужно покрасить именно свежевыделенные макрофаги или задачи исследования позволяют их покультивировать и потом красить? по моему опыту монослойки проще красить. Я красил в свое время и М-Г/Гимзой, и гематоксилином.
Участник оффлайн! bioasg




 прочитанное сообщение 25.11.2012 10:27     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

и по поводу "сметаны в глутаре". Вполне вероятно, что глутар осаждает вообще все белки, а поскольку в брюшной полости они есть, и в Хенксе вашем они тоже будут в растворенном состоянии, и не только фибрин. После открутки посмотрите на 40х ваши макрофаги, вдруг что интересное увидите. Попробуйте отмывать не 1, а 2 раза. И еще: вероятно, для мазка и окраски вам лучше приготовить один осадок, а для электронки - другой. Будет возможность экспериментировать и не загубить "соседний" препарат. Будут вопросы - пишите в личку, что-нибудь придумать всегда можно
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  08.12.2021 15:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/
http://simp.ly/p/nxGlWb
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24
https://8tracks.com/replicawatchesuk
Участник оффлайн! watchesonline89
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  28.12.2022 12:27     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

https://omegawatches89.seesaa.net/article/490300647.html
https://list.ly/i/8020067
https://wakelet.com/wake/FbtgXuYkRErMzQ1HUDcgZ
https://fortunetelleroracle.com/fashion/exc...a-online-737625
https://omegawatches89.blog.hu/2022/11/13/u...log_hu-n_109243
https://trello.com/w/omegawatches891/account
https://omegawatches89-95.webselfsite.net/notre-produit
https://blog.udn.com/omegawatches89/176226699
https://omegawatches89.seesaa.net/article/490300795.html
https://ameblo.jp/omegawatches89/entry-12756688272.html
https://www.vingle.net/posts/4647040
https://wakelet.com/wake/H0vWrtoDDLsN1D3RnAjp6
https://penzu.com/p/5778d3b5
https://telegra.ph/Exciting-Deals-Offered-O...ca-Online-08-03
https://omegawatches89.simplesite.com
https://ameblo.jp/omegawatches89/entry-12756647075.html
https://omegawatches89.simplesite.com/452939039
https://telegra.ph/Amazing-Offers-Available...es-Online-08-03

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 03:09
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft