Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Результаты поиска -- Найденные сообщения --

страницы (78):  1 2 3 > » 

учебный вопрос по ретровирусам
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 16.02.2020 07:30  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1793817  |  Ответов: 3  |  Просмотров: 410
Здравствуйте.

Поясните, плиз, по ретровирусам. mol.gif

На их вирионной (+)РНК обратной транскриптазой синтезируется (-)ДНК, а потом на ней как на матрице синтезируется обратной транскриптазой (+)ДНК. Потом эта вирусная двухцепочечная ДНК попадает в ядро клетки-хозяина и встраивается в его ДНК.

Вопрос. мРНК вируса потом с какой цепи синтезируется - с (-)ДНК или (+)ДНК?

Спасибо.

Дендритные шипики, иммуногистохимия, синаптофизин
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 14.05.2017 14:56  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1667205  |  Ответов: 18  |  Просмотров: 3 110
(MMM @ 10.05.2017 21:12)
Ссылка на исходное сообщение  Экспрессию белка можно посмотреть Western'ом, RT-qPCR'ом.  RT-qPCR'ом проще всего если известна нуклеотидная последовательность гена. Антитела тоже можно получить это месяца 3-4 работы либо на синтетический пептид, либо на продукт клонированного гена, опять же если известна нуклеотидная последовательность гена. Более сложный вариант это трансфекция клеток репортерным вектором, где под промотором гена интереса вставлен репортерный продукт, например, флуоресцентный белок или люцифераза, для вашего случая - это самый геморрой, потому что потребуется культивирование и трансфекция клеток улитки.

Спасибо, конечно, но, увы, эти методы недоступны ни по финансовым причинам, ни по материальному обеспечению. Нуклеотидная последовательность неизвестна. О получении антител и трансфекции я вообще молчу frown.gif.

Дендритные шипики, иммуногистохимия, синаптофизин
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 08.05.2017 18:59  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1666448  |  Ответов: 18  |  Просмотров: 3 110
А почему вас смущает, что антитела к млекопитающим? (Про шипики уже забыли, концентрируемся на синапсах.)

Дендритные шипики, иммуногистохимия, синаптофизин
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 07.05.2017 05:39  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1666329  |  Ответов: 18  |  Просмотров: 3 110
(ECH @ 06.05.2017 22:17)
Ссылка на исходное сообщение  внимательнее читайте статью на какой модели они работают. конечно находят если один нейрон физически впечатать в другой


Да, я потом прочитал внимательнее и понял, что нейроны друг друга не находят :-), а их заставляют найтись.

Вы думаете, что изолировать места контактов и выделить это всё из улитки, чтобы потом обработать антителами, не получится?

Дендритные шипики, иммуногистохимия, синаптофизин
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 06.05.2017 09:18  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1666224  |  Ответов: 18  |  Просмотров: 3 110
Так. Тема не закрыта.

Число дендритных шипиков у высших животных коррелирует с числом синапсов. У улиток, похоже, шипики отсутствуют.

Однако нашлась статья, в которой авторы связывают экспрессию синаптофизина в нейронах нужного нам организма, прудовика, с числом синапсов:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21722207

Таким образом, наблюдение за экспрессией этого белка с повестки дня не снимается. Возникает второй вопрос.
В статье изучали экспрессию в культуре сдвоенных нейронов, пре- и постсинептических, которые, насколько я понял, находят друг друга в культуральной жидкости.
Мы хотим всё это увидеть не в культуре, а в организме. Известны нейроны, которые образуют сеть.
Подскажите, пожалуйста, каким образом это следует поступить? Извлекать нейроны, искать место контакта и его окрашивать?

Дендритные шипики, иммуногистохимия, синаптофизин
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 28.04.2017 15:46  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1665388  |  Ответов: 18  |  Просмотров: 3 110
(ECH @ 27.04.2017 15:25)
Ссылка на исходное сообщение  
А есть ли у нейронов улиток вообще дендритные шипики? Вопрос несколько грубый, но справедливый. Пабмед выдает только одну ссылку на русском 1992 года, некая Брежная, с одним цитированием.


Похоже, кина не будет и этот ваш вопрос был ключевым... weep.gif

Spiny neurons are rarely found in lower organisms (for example, Drosophila melanogaster
and Caenorhabditis elegans ), indicating that spines evolved to accommodate the more complex functions of ‘advanced’ nervous systems, such as the mammalian brain.

http://www.nature.com/nrn/journal/v2/n12/f...n1201-880a.html

Дендритные шипики, иммуногистохимия, синаптофизин
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 28.04.2017 14:39  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1665379  |  Ответов: 18  |  Просмотров: 3 110
(ECH @ 27.04.2017 15:25)
Ссылка на исходное сообщение  Тут как бы требуются не конкретные технические советы, а чтение литературы.

Я с вами согласен, в принципе, но невозможно быть узким специалистом во всём. Мы положились на тех, кто занимается иммуногистохимией.
(ECH @ 27.04.2017 15:25)
Ссылка на исходное сообщение
Что такое синаптофизин? Везикулярно ассоциированый белок синаптических терминалей. Является ли он маркером дендритных шипиков? Ни разу.

А можно ссылку, почему не является?
(ECH @ 27.04.2017 15:25)
Ссылка на исходное сообщение
Красили ли нейроны улитки антителами на синаптофизин? Да, навскидку из пабмеда работа 1990 года и многие другие.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2106363

Спасибо.
(ECH @ 27.04.2017 15:25)
Ссылка на исходное сообщение
Интерпретировали ли это как число дендритных шипиков? Нет.

В принципе, это не означает, что это нельзя интерпретировать как маркер дендритных шипиков.
(ECH @ 27.04.2017 15:25)
Ссылка на исходное сообщение
Что является маркерами постсинапсов и дендритных шипиков у тех нейронов и зверей, у которых они есть? Из часто используемых psd95 и homer. Красили ли улиток на них до и после воздействия? Много раз - идем обратно в пабмед.

Спасибо, глянем.
(ECH @ 27.04.2017 15:25)
Ссылка на исходное сообщение
А есть ли у нейронов улиток вообще дендритные шипики? Вопрос несколько грубый, но справедливый. Пабмед выдает только одну ссылку на русском 1992 года, некая Брежная, с одним цитированием.

Спасибо, изучим.

Дендритные шипики, иммуногистохимия, синаптофизин
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 25.04.2017 03:20  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1664965  |  Ответов: 18  |  Просмотров: 3 110
(ship @ 24.04.2017 20:03)
Ссылка на исходное сообщение  вам бы в эти нейроны просто ввести флуоресцентный белок, типа RFP, чтобы метил их селективно, ну и тогда можно пытаться считать даже на живых клетках, или фиксировать.


Спасибо за идею, конечно, но, полагаю, это уже иной уровень финансирования, который мы не потянем.

Дендритные шипики, иммуногистохимия, синаптофизин
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 24.04.2017 18:01  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1664927  |  Ответов: 18  |  Просмотров: 3 110
(ship @ 24.04.2017 16:11)
Ссылка на исходное сообщение  А как вы эти три нейрона будете отличать от всех остальных? Иммуногистохимию на срезах обычно делают, вы же не можете сделать срез чтобы весь нейрон попал, а антитела нормально не покрасят ткани целого организма, как мне кажется, да и визуализировать и считать потом как?


1. У улиток многие нейроны легко идентифицируемы и внесены в атласы.
2. Да, не можем сделать так, чтобы нейрон попал в срез. Собственно, я поэтому и задаю вопрос специалистам, потому как гистологический метод и единичные нейроны я как-то не соотношу.
3. Ну, если будет светиться каждый шипик (а я не знаю, как оно там), то считать нормально. Но я не уверен, как оно там :-)

Дендритные шипики, иммуногистохимия, синаптофизин
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 24.04.2017 03:02  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1664864  |  Ответов: 18  |  Просмотров: 3 110
- Вам это для чего нужно?
Для того, чтобы понять, стало ли между клетками больше синапсов после воздействия.

- Считать надо конечно не 3 клетки, а десятки. Ну и в 2-3 повторах эксперимента.
У улитки есть 3 нейрона, ответственных за рефлекс, который будет формироваться в эксперименте. Что происходит с остальными нейронами - нам неважно. Именно их я и имел в виду. Естественно, будет набираться статистика по нескольким животным.

- Какое у вас оборудование? Во что смотреть будете?
У нас никакого оборудования нет, мы выступаем заказчиками. А нам предлагают иммуногистохимию для 3 нейронов, поэтому я пытаюсь разобраться, адекватный ли метод нам предлагают.

Идеальный вариант для нас - электронная микроскопия с подсчётом плотности шипиков в единицах штуки на микрон длины (к примеру). Но она недоступна.

Дендритные шипики, иммуногистохимия, синаптофизин
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 23.04.2017 09:37  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1664779  |  Ответов: 18  |  Просмотров: 3 110
День добрый.

Помогите, пожалуйста, разобраться с одной задачей. wall.gif

Дано: 3 нейрона улитки, связанные друг с другом.
Надо: посчитать число дендритных шипиков у этих нейронов до и после воздействия.

Предлагается иммуногистохимический метод с использованием антител к синаптофизину.

Вопросы:
1) возможна ли количественная оценка?
2) насколько к 3 нейронам вообще применим данный метод?

Спасибо.

Ионные каналы
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 13.07.2016 17:53  |  Биофизика и матметоды в биологииБиофизика и матметоды в биологии  |  link: #1630097  |  Ответов: 2  |  Просмотров: 4 410
Здравствуйте.

Скажите, пожалуйста, как называется (в том числе по-английски) свойство ионных каналов пропускать ток ионов в обоих направления - как внутрь, так и наружу? Это ведь не универсальное свойство ионных каналов? Какие эксперименты надо поставить, чтобы определить, что канал обладает таким свойством?

Спасибки.

Приготовление растворов
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 05.10.2015 16:03  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1581809  |  Ответов: 35  |  Просмотров: 3 670
2 -Ъ-

:-)

Приготовление растворов
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 05.10.2015 09:28  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1581747  |  Ответов: 35  |  Просмотров: 3 670
2 avor

Я и не выхожу, а тут, оказывается, чтец моралей завёлся. Недоработка! umnik.gif

Приготовление растворов
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 03.10.2015 12:06  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1581451  |  Ответов: 35  |  Просмотров: 3 670
2 R.J.Dio

Мне такой вопрос задал физик, которого в своё время занесло в молбиол. Проблему-то я сразу понял, но у меня классический макроанализ, самая маленькая навеска - сотни миллиграммов, а объёмы - десятки и сотники кубиков, поэтому я сразу сюда написал в надежде, что ситуацию прояснят. Конкретно я не могу сказать, что ему там надо было развести, скину ему ссылку на наш тред - пусть пример приведёт, может, с конкретикой оно будет специалистам понятнее.

Приготовление растворов
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 02.10.2015 20:34  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1581361  |  Ответов: 35  |  Просмотров: 3 670
да, для примера. а если не стоковый?

Приготовление растворов
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 02.10.2015 20:20  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1581353  |  Ответов: 35  |  Просмотров: 3 670
Простите, я знаю, что такое КУО и даже знаю, где это применяется - в аптечной технологии лекарств. В статьях для рестриктазы КУО не указывают.

Но я веду речь о другом. Задача: надо приготовить 10 мкл раствора с концентрацией 40 % (масса/объём). Вопрос - как приготовить. Если бы надо было приготовить 10 мл раствора, то я бы готовил растворением навески 4 г в мерной колбе на 10 мл с доведением растворителя до метки. Но как готовить на малых объёмах?

Приготовление растворов
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 02.10.2015 19:52  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1581337  |  Ответов: 35  |  Просмотров: 3 670
Я имел в виду вот что. Если смешать 4 мг вещества и 10 мкл воды, то не получится 30 % раствор (массо-объёмной концентрации) из-за контракции. А контракция значима, когда концентрация высока. И меня интересует, как поступать в такой ситуации.

Приготовление растворов
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 02.10.2015 19:34  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1581329  |  Ответов: 35  |  Просмотров: 3 670
Что такое, не понял?

Приготовление растворов
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 02.10.2015 19:28  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1581327  |  Ответов: 35  |  Просмотров: 3 670
Ну я имел в виду, что растворитель - вода, тогда 1 мкл соответствует 1 мг. :-)

Приготовление растворов
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 02.10.2015 19:08  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1581321  |  Ответов: 35  |  Просмотров: 3 670
Я привёл пример про рестриктазу условно, я не знаю, как там на самом деле, так как сам молбиол и биохимом не занимаюсь. Но усугублю. Надо приготовить раствор 10 мкл, в котором 4 мг вещества. По сути это 4/14=30 % раствор. Он в итоге явно не будет занимать объём 10 мкл за счёт констрикции. Как быть?

Приготовление растворов
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 02.10.2015 18:51  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1581318  |  Ответов: 35  |  Просмотров: 3 670
Добрый день.

Мне сегодня задали вопрос, который я хотел бы переадресовать вам как специалистам. Задача такая - надо приготовить раствор малого объёма (для ПЦР рестриктазу развести и т.п.) с высокой концентрацией растворённого вещества, т.е. более 10 %. Как правило в методиках стоит масса/объём.

Я как классический химик готовлю раствор в мерных колбах, и там неважно, какая концентрация, так как всё доводится растворителем до метки. Но как поступать в случае растворов малых объёмов, ведь там до метки не доведёшь, а при смешивании раствора и растворителя объём может быть весьма неаддитивен? Подскажите, пожалуйста, как это делать?

Спасибо.

-Где купить дрозофил?-
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 11.05.2015 14:53  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1552528  |  Ответов: 6  |  Просмотров: 1 697
Я тут нашёл список мушиных "гнёзд". Прикрепляю, может, кому понадобится.

Селективаная экспрессия в нужное время
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 09.05.2015 13:39  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1552156  |  Ответов: 49  |  Просмотров: 3 593
2 Replikant

Спасибо большое!

Селективаная экспрессия в нужное время
himik
Постоянный участник
не родина


Отправлено: 09.05.2015 11:38  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1552146  |  Ответов: 49  |  Просмотров: 3 593
В мышах тоже используют! И тоже в этих же моделях! Мне нужно понять принципиальную возможность, и как оно работает. С Cre я более менее разобрался. И хочется всё-таки иметь возможность регулировать уровень экспрессии с помощью дозы тетра.
страницы (78):  1 2 3 > »  

Новые сообщения  Есть новые сообщения
Нет новых сообщений  Нет новых сообщений
Нет новых сообщений*  Тема с вашим участием
Горячая тема - новые сообщения  Горячая тема (есть новые сообщений)
Горячая тема - нет новых сообщений  Горячая тема (нет новых сообщений)
Важно - нет новых сообщений  Важная тема
Опрос - есть новые голоса  Опрос — есть новые голоса
Опрос - нет новых голосов  Опрос — нет новых голосов
Опрос -нет новых голосов  Опрос с вашим участием
Объявление  Объявление
Тема закрыта  Закрытая тема
Тема перемещена  Перемещённая тема


Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 18.02.20 22:13
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft