Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
mirt |
|
Guest IP-штамп: frkM0/MHHgnTA гость |
Праздники закончились! Кто это Вам посоветовал? |
AVP Постоянный участник New Jersey |
(Guest @ 15.01.2006 16:26) может быть какой то поисковик... например... Am J Pathol. 1976 Jul;84(1):11-24. Related Articles, Links Gel-filtered human platelets. Ultrastructure, function, and role of proteins in inhibition of aggregation by aspirin. Fine KM, Ashbrook PC, Brigden LP, Maldonado JE, Didishelm P. etc. Сообщение было отредактировано AVP - 16.01.2006 08:02 |
Mac-1 Постоянный участник оттуда |
Это - стандартная методика приготовления мытых тромбоцитов, о фильтрации их через Сефаросу я не слыхал, но думаю что разница не принципиальна, разве что вы избавляетесь не только от кальция, а заодно и от многих других белков плазмы. Выходят они со свободным обьемом, (примерно 1/3 обьема колонки), и имеют примерно такой же обьем, какой вы наносите. Референций есть - масса, вот например: http://www.bloodjournal.org/cgi/content/full/97/4/929 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.f...l=pubmed_docsum |
Guest IP-штамп: frkM0/MHHgnTA гость |
(Mac-1 @ 16.01.2006 07:36) Ну вот это другое дело, а то гель -фильрация тромбоцитов.... Речь идет об очистке от белков и другого плазиы. Получение (выделение, очистка) тромбоцитов из цельной крови, это несколько иной, предварительный этап пере Сефадексами. |
Mac-1 Постоянный участник оттуда |
Мирт просто неправильно сформулировала свою просьбу - она хочет выделять "мытые тромбоциты" ("washed platelets") именно гель-фильтрацией, но тот, кто работал с тромбоцитами, поймет, что она хочет. Сейчас есть еще и какие-то более продвинутые методы, позволяющие обойтись без колонок, даже в индустриальных масштабах (мытые тромбоциты используют в медицине для трансфузии при лейкемии, - так с них антигены АБО и даже Резус, кажется, с них смывают - не знаю точно..) - но я не в курсе их, когда мне нужны тромбоциты, так их "по-старинке" гоню через Сефадекс, чтоб убрать кальций и мембранно-связанные через него белки, вроде Фактора вон Виллебрандта, протромбина итп, которые могут проактивировать тромбоциты. |
гость: m IP-штамп: frmqVJjPYfvF2 гость |
|
Mac-1 Постоянный участник оттуда |
Это - обязательная операция и после упаковки новой колонки, и перед каждым экспериментом. После упаковки и перед каждым нанесением тромбоцитов пропустите через колонку сперва 3-4 обьема колонки раствора Тироде - тогда ваши тромбоциты после элюции будут находится именно в нем. Только я вам советую, перед нанесением добавлять и в богатую плазму, и в Тироде еще и немного Апиразы (Apyrase) - тогда у вас будет больше гарантии, что тромбоциты не проактивируется. |
mirt |
|
Mac-1 Постоянный участник оттуда |
Просто приготовьте колонку - я для Сефадекса использовал 4 Х 25 см, а вам какую нужно я не знаю - посмотрите графики селективности Сефарозы и посчитайте какой длины вам нужна будет колонка, чтобы избавится от белка от которого вы хотите избавится - я не знаю ваш эксперимент и от чего вы хотите чистить. Больше сказать не могу, т.к. я уже писал, что первый раз слышу об использовании Сефарозы для таких целей. Обычно Сефадекса Г-25 за глаза хватает. В принципе, вы говорили, что собираетесь использовать 2% агарозу (2в - это 2% агарозы), поэтому, скорее всего вам может подойти колонка где-то в 50-60 см, она отделит абсолютное большинство белков. Колонку можно использовать много раз если будете работать аккуратно - не дадите ей подсыхать, не напустите туда воздуха, будете удалять верхний слой, если он заметно для глаз загрязнится, итд итп. Сколько раз - сказать трудно, т.к. больше всего (на 95%) это зависит от вашей собственной аккуратности, а также (на 5%) от той плазмы, которую будете использовать. Восстанавливать Сефарозу не нужно - после использования колонку достаточно уравновесить заново, т.е. пропустить 3-4 обьема буфера (Тироде) - см. выше. Когда не пользуетесь ею, храните ее или в 20% спирте или в 0.05% азиде (уравновесить ими). Удачи! |
Guest IP-штамп: frkM0/MHHgnTA гость |
(Mac-1 @ 16.01.2006 09:31) Гость, не судите строго! Мирт просто неправильно сформулировала свою просьбу - она хочет выделять "мытые тромбоциты" ("washed platelets") именно гель-фильтрацией, но тот, кто работал с тромбоцитами, поймет, что она хочет. Сейчас есть еще и какие-то более продвинутые методы, позволяющие обойтись без колонок, даже в индустриальных масштабах (мытые тромбоциты используют в медицине для трансфузии при лейкемии, - так с них антигены АБО и даже Резус, кажется, с них смывают - не знаю точно..) - но я не в курсе их, когда мне нужны тромбоциты, так их "по-старинке" гоню через Сефадекс, чтоб убрать кальций и мембранно-связанные через него белки, вроде Фактора вон Виллебрандта, протромбина итп, которые могут проактивировать тромбоциты. to Mac-1: - не строго, я с юмором. А Вам спасибо за инфу, очень полезная!
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
Ufa1688 Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |